जीर्ण कसना चोट के साथ चूहों में स्वचालित चाल विश्लेषण

Neuroscience

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Summary

एक neuropathic पशु मॉडल में दर्द की प्रतिक्रिया का सटीक आकलन दर्द रोगों के pathophysiology की जांच और नए एनाल्जेसिक विकसित करने के लिए महत्वपूर्ण है । हम एक स्वचालित चाल विश्लेषण प्रणाली द्वारा कुतर हिंद पंजा के संवेदी समारोह निर्धारित करने के लिए एक संवेदनशील और उद्देश्य विधि प्रस्तुत करते हैं ।

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Kang, D. W., Choi, J. G., Moon, J. Y., Kang, S. Y., Ryu, Y., Park, J. B., Kim, H. W. Automated Gait Analysis in Mice with Chronic Constriction Injury. J. Vis. Exp. (128), e56402, doi:10.3791/56402 (2017).

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Abstract

वॉन Frey परीक्षण व्यापक रूप से neuropathic दर्द जानवरों के संवेदी समारोह की जांच करने के लिए इस्तेमाल किया गया है कि एक शास्त्रीय विधि है । हालांकि, यह व्यक्तिपरक डेटा और एक कुशल, अनुभवी प्रयोगकर्ता की आवश्यकता के रूप में कुछ नुकसान है । तारीख करने के लिए, संशोधनों की एक किस्म वॉन Frey विधि में सुधार हुआ है, लेकिन यह अभी भी कुछ सीमाएं हैं । हाल की रिपोर्टों का सुझाव दिया है कि चाल विश्लेषण neuropathic पशुओं से अधिक सटीक और उद्देश्य डेटा पैदा करता है । यह प्रोटोकॉल प्रदर्शित करता है कि कैसे स्वचालित चाल विश्लेषण करने के लिए चूहों में neuropathic दर्द की डिग्री निर्धारित करने के लिए । acclimation के कई दिनों के बाद, चूहों के निशान रोशन करने के लिए कांच के फर्श पर स्वतंत्र रूप से चलने के लिए अनुमति दी गई थी । फिर, पैरों के निशान और चाल के ठहराव विभिंन चलने के मापदंडों के स्वत: विश्लेषण के साथ वीडियो क्लिप के माध्यम से प्रदर्शन किया गया, जैसे पंजा प्रिंट के क्षेत्र, स्विंग समय, पंजा के कोण, आदि ।

इस अध्ययन का मुख्य उद्देश्य के लिए स्वचालित चाल विश्लेषण की कार्यप्रणाली का वर्णन और संक्षेप में यह शास्त्रीय संवेदी परीक्षण से डेटा के साथ तुलना वॉन Frey रेशा का उपयोग कर रहा है ।

Introduction

तंत्रिका आघात से प्रेरित प्रणाली के रोग परिवर्तन, चयापचय रोग, सूजन, संक्रमण, ischemia, या स्व-प्रतिरक्षित रोग neuropathic दर्द है, जो एक घाव या रोग का प्रत्यक्ष परिणाम के रूप में उत्पन्न दर्द के रूप में परिभाषित किया गया है में परिणाम कभी-कभार somatosensory सिस्टम1को प्रभावित कर रहा है । Neuropathic दर्द आमतौर पर असहनीय है और दुर्भाग्य से, पारंपरिक एनाल्जेसिक आम तौर पर पर्याप्त दर्द राहत का उत्पादन नहीं है2। neuropathic दर्द की एक प्रमुख विशेषता सहज और उत्तेजना पैदा होता है (यानी, allodynia और hyperalgesia) दर्द । Allodynia एक nociceptive प्रतिक्रिया है कि सामांय रूप से गैर दर्दनाक उत्तेजनाओं, जैसे प्रकाश स्पर्श या गर्म उत्तेजना के लिए होता है । Hyperalgesia हानिकारक यांत्रिक और/या थर्मल उत्तेजनाओं3के लिए एक बढ़ाया दर्द प्रतिक्रिया इंगित करता है । हालांकि इन दो लक्षणों दोनों गंभीर जीवन के रोगी की गुणवत्ता ख़राब, यांत्रिक allodynia कोमल स्पर्श उत्तेजना द्वारा पैदा की सबसे उत्तेजक लक्षण है क्योंकि नरम संपर्क रोजमर्रा की जिंदगी में से बचने के लिए मुश्किल है ।

neuropathic दर्द के उपचार के लिए अंतर्निहित तंत्र और नए एनाल्जेसिक की जांच करने के लिए, दर्द की प्रतिक्रिया की सटीक माप आवश्यक है । कई neuropathic दर्द पशु मॉडल के कारण अपने उच्च पहुंच क्षमता4,5,6,7में हिंद पंजा क्षेत्र पर nociceptive प्रतिक्रियाओं का विकास किया है । इस प्रकार, ज्यादातर दर्द प्रतिक्रिया आकलन यांत्रिक उत्तेजनाओं लागू करने के द्वारा तल या पृष्ठीय सतह पर किया गया है विशेष उपकरणों, जैसे वॉन Frey रेशा के रूप में । सबसे अधिक उपयोग की जाने वाली विधि में से एक डिक्सन8 और बाद में संशोधित संस्करण9,10द्वारा वर्णित अप और डाउन पद्धति है । हालांकि, बहुत कुशल, अनुभवी प्रयोगकर्ता वॉन Frey परीक्षण करने के लिए आवश्यक हैं और परिणाम व्यक्तिपरक हो सकता है ।

स्वचालित चाल विश्लेषण प्रणाली स्वतंत्र रूप से चलती कुतर में चलने के विभिन्न मापदंडों को मापने के द्वारा स्नायविक और neuromuscular विकारों की जांच कर सकते हैं । तंत्रिका चोट पशु मॉडल की एक किस्म में, nociception की डिग्री और कई उपचार के antinociceptive प्रभाव एक दर्द उत्तेजना11,12,13को जोड़ने के बिना मूल्यांकन किया जा सकता है, 14. यह विश्लेषण प्रणाली स्थिर और गतिशील चाल मापदंडों का पता लगा सकती है, जैसे: पंजा प्रिंट क्षेत्र (पूरा पंजा प्रिंट के क्षेत्र कि मंजिल के साथ संपर्क), पंजा तीव्रता (संपर्क पंजा क्षेत्र की औसत तीव्रता), डग लंबाई ( एक ही पंजा के उत्तराधिकारी प्लेसमेंट के बीच दूरी), रुख चरण (एक भी हिंद पंजा के लिए जमीन संपर्क की अवधि), चरण अनुक्रम (क्रम में चार पंजे फर्श पर रखा जाता है), स्विंग (स्विंग चरण की अवधि), और स्विंग गति (गणना डग लंबाई और स्विंग अवधि से और प्रति सेकंड पिक्सल के रूप में व्यक्त) । इस कागज का उपयोग एक विश्लेषण प्रणाली को दर्शाता है और वॉन Frey क्रोनिक कसना चोट (सीसीआई) neuropathic चूहों का उपयोग परीक्षण के साथ डेटा की एक संक्षिप्त तुलना प्रदान करता है ।

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Protocol

< p class = "jove_content" > सभी प्रयोगों को दर्द के अध्ययन के लिए इंटरनेशनल एसोसिएशन के नैतिक दिशा निर्देशों के अनुसार आयोजित किया गया था और संस्थागत पशु देखभाल और Chungnam राष्ट्रीय विश्वविद्यालय में उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया ( डाइजॉन, दक्षिण कोरिया).

< p class = "jove_title" > 1. Sciatic तंत्रिका पर सीसीआई की प्रेरण

  1. घर पुरुष ICR चूहों वजन 20-25 ग्राम के तहत एक 12 एच प्रकाश/अंधेरे चक्र पर नियंत्रित कमरे के तापमान (पर बनाए रखा 20-25 & #176; C) और आर्द्रता (४०-६०%), भोजन के लिए स्वतंत्र पहुँच और पानी. सर्जरी से पहले एक सप्ताह के पशु देखभाल कक्ष में चूहों के लिए एक acclimation अवधि की अनुमति दें. आवास के दौरान
    1. , चूहों की उपस्थिति और व्यवहार का निरीक्षण और असामान्य हरकत गतिविधि दिखा चूहों का उपयोग नहीं करते.
      नोट: सीसीआई सर्जरी के लिए एक दिन पहले, वॉन Frey रेशा लागू करने और स्वचालित चाल विश्लेषण करने के लिए सामान्य आधारभूत मूल्यों को प्राप्त करने के द्वारा हिंद पंजा की यांत्रिक संवेदनशीलता को मापने । फिर, चूहों को नियंत्रित करने और प्रयोगात्मक समूहों के लिए बेतरतीब ढंग से आवंटित.
  2. सर्जरी के दिन, anesthetize चूहों को इंजेक्शन देकर 2, 2, 2-tribromoethanol (२५० मिलीग्राम/intraperitoneal (IP)) नोट: ऐसे सर्जिकल गाउन, दस्ताने, और मुखौटा के रूप में व्यक्तिगत सुरक्षात्मक उपकरण पहनते हैं ।
    1. का वजन २.५ ग्राम 2, 2, 2-tribromoethanol और 2-मिथाइल-2-buthanol को 5 मिलीलीटर की अंतिम मात्रा में डालें । समाधान प्रकाश से दूर रखें ( जैसे , एक काले कंटेनर या पंनी में लपेटो का उपयोग करें) ।
    2. ४० & #176; सी पर हीटिंग द्वारा पूरी तरह से भंग करने के लिए एजेंट की अनुमति दें और 10-30 min.
    3. के लिए सरगर्मी
    4. २०० मिलीलीटर की अंतिम मात्रा में आसुत जल जोड़ें और जब तक मिश्रित अच्छी तरह से हलचल ।
    5. Store aliquots 4 & #176; ग और अंधेरे में रखो । दो हफ्तों के बाद, संवेदनाहारी नए aliquots के साथ प्रतिस्थापित किया जाना चाहिए.
    6. 1 g शरीर के वजन के अनुसार 20 & #181; L का एक मात्रा इंजेक्षन उदाहरण के लिए, यदि माउस का शरीर भार 25 ग्राम है, तो दे ५०० & #181; समाधान का L. इस संज्ञाहरण की विशिष्ट अवधि 1 ज.
      है नोट: यह समाधान विषाक्त हो जाएगा जब प्रकाश और/या गर्मी से अवगत कराया तो प्रकाश और गर्मी के लिए जोखिम से बचने के लिए सावधान रहना होगा । एक आईपी इंजेक्शन मार्ग अत्यधिक की सिफारिश की है ।
  3. जब माउस गहरी संज्ञाहरण में गिर जाता है, यह पृष्ठीय पक्ष के साथ ऑपरेटिंग मेज पर जगह ( अर्थात् , प्रवण स्थिति) और एक ७०% शराब झाड़ू के साथ दाईं ओर के बाहरी मध्य जांघ क्षेत्र निष्फल ।
    नोट: हिंद पंजे या पूंछ पर चुटकी या दबाव उत्तेजना के लिए प्रतिक्रिया की कमी की जांच द्वारा गहरी संज्ञाहरण की पुष्टि करें
  4. माउस के सही sciatic तंत्रिका पर सीसीआई प्रेरित ।
    1. एक स्केलपेल ब्लेड के साथ मध्य जांघ क्षेत्र १.०-१.५ सेमी लंबाई के आसपास त्वचा पर एक चीरा बनाओ ।
    2. कुंदा टुकड़े को सूक्ष्म मच्छर hemostat के साथ जांघ की मांसपेशियों को sciatic तंत्रिका बेनकाब ।
    3. Ligate एक 4-0 क्रोमिक catgut टांका का उपयोग १.०-१.५ mm अंतराल के साथ उजागर sciatic तंत्रिका 3 बार ।
      नोट: हल्के मिलाते जब तक sciatic तंत्रिका को बांधने से ढीला ligations ipsilateral हिंद पंजा पर प्रकट होता है बनाओ । चूहों के अन्तर्वासना ग्रुप को बिना तंत्रिका बंधाव के छोड़कर इसी तरह की परिस्थितियों के तहत ही शल्य खोलने का अवसर प्राप्त हुआ.
  5. 3-4 सरल बाधित टांके 5-0 रेशम का उपयोग और सर्जरी के बाहरी क्षेत्र के संक्रमण के लिए povidone आयोडीन के साथ बंध्याकरण के साथ शल्य खोलने बंद ।
  6. सर्जरी के बाद, एक हीटिंग पैड पर एक साफ पिंजरे में माउस जगह है । जब जानवरों संज्ञाहरण से बरामद कर रहे हैं, उन्हें उनके घर पिंजरे में वापस ।
    नोट: इस अध्ययन में एंटीबायोटिक दवाओं का इस्तेमाल नहीं किया गया । सीसीआई + gbp समूह एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में एक बार दैनिक ५० मिलीग्राम/kg की एक खुराक पर आईपी gabapentin (gbp) प्राप्त किया ।
< p class = "jove_title" > 2. यांत्रिक Allodynia का मापन (वॉन Frey टेस्ट)

< p class = "jove_content" > नोट: ipsilateral हिंद पंजा की तल की सतह के लिए वॉन Frey रेशा के 1 जी का उपयोग करके यांत्रिक उत्तेजनाओं के लिए वापसी की प्रतिक्रिया की आवृत्ति का आकलन करें ।

प्रत्येक परीक्षा के दिन
  1. , चूहों को व्यवहार परीक्षण कक्ष में लाएं और परीक्षण से पहले चूहों को अपने ही घर के पिंजरे में कम-से-अधिक 30 मिनट तक acclimate ।
    नोट: ऐसे सर्जिकल गाउन, दस्ताने के रूप में व्यक्तिगत सुरक्षात्मक उपकरण पहनते हैं, और मुखौटा ।
  2. धातु मेष फर्श पर एक पारदर्शी एक्रिलिक बॉक्स में माउस डाल दिया और 30 मिनट
  3. के लिए माउस acclimate
  4. धीरे हिंद पंजा के तल सतह के लिए वॉन Frey रेशा के 1 जी लागू रेशा झुकता तक ।
  5. ipsilateral हिंद पंजा करने के लिए रेशा उत्तेजना लागू 10 बार कम से 10 s अंतराल के साथ और परिणाम रिकॉर्ड.
    नोट: इस अध्ययन में 10 परीक्षणों से पंजा वापसी प्रतिक्रियाओं की संख्या पंजा वापसी आवृत्ति के प्रतिशत के रूप में दिखाया गया है (PWF,%) । वॉन Frey टेस्ट के लिए हर दो दिन बाद सीसीआई सर्जरी का प्रदर्शन किया गया.
< p class = "jove_title" > 3. स्वचालित चाल का प्रदर्शन विश्लेषण

< p class = "jove_content" > नोट: चाल विश्लेषण प्रणाली प्रत्येक पंजा प्रिंट visualizes जबकि जानवर चल रहा है और स्वचालित रूप से इस तरह के पंजा प्रिंट, पंजा तीव्रता, डग लंबाई, रुख के रूप में विभिन्न चाल मापदंडों, विश्लेषण करती है चरण, चरण अनुक्रम, झूले, झूले की गति, आदि इस अध्ययन में, हम contralateral वाम बनाम ipsilateral अधिकार हिंद पंजा के बीच प्रतिशत परिवर्तन में डेटा परिवर्तित करने के बाद पंजा प्रिंट क्षेत्र और एकल रुख दिखाया । इस प्रकार, ५०% का परिणाम इंगित करता है कि पंजा प्रिंट के आकार और फर्श के साथ संपर्क में पंजा क्षेत्र की अवधि, बाएं और दाएं पक्ष के बीच ही हैं । इसके अलावा, कम डेटा मान आ 0% संकेत मिलता है कि दोनों के आकार और संपर्क की अवधि ipsilateral हिंद पंजा में कम कर रहे है के रूप में contralateral की ओर (< मजबूत वर्ग के पैनल बी देखें = "xfig" > चित्रा 2
और < मजबूत वर्ग = "xfig" > चित्रा 3 ).

  1. acclimation के लिए, 10 मिनट के लिए एक बार शुरुआत सीसीआई सर्जरी से पहले 5 दिन के लिए चाल विश्लेषण डिवाइस के भीतर चूहों रखें ।
    नोट: acclimation सहित चाल विश्लेषण परीक्षण अंधेरे में प्रदर्शन किया जाना चाहिए ।
  2. परीक्षण के लिए चूहों को ले जाने के परीक्षण के लिए कमरे में जांच से पहले और acclimate के लिए अपने घर पिंजरे में ंयूनतम 30 मिनट ।
    1. प्रोग्राम मेनू के सेटअप टैब में, सेट करें & #34; रास्ता लंबाई & #34; से 30 सेमी, और सेट & #34; अधिकतम रन अवधि & #34; को 5 स s र द & #34; अधिकतम रन भिन्नता & #34; को ५०%.
    2. & #39 से एक पंजीकृत कैमरे का चयन करें; setup & #39; टैब का & #39;p प्रोग्रा & #39; menu.
    3. Select & #34; ओपन अर्ज & #34; से & #39; मोल & #39; tab का & #39;p प्रोग्रा & #39; menu.
    4. स्थिति संदेश का अनुसरण
    5. , खाली ( यानी , blank) रास्ता की पृष्ठभूमि चित्र लेने के लिए & #39; स्नैप बैकग्राउंड & #39; बटन पर क्लिक करें.
  3. क्लिक करें & #39; प्रारंभ अर्जन & #39; बटन और रास्ता पर एक चूहा जगह; रिकॉर्डिंग माउस के आंदोलन के अनुसार स्वचालित रूप से शुरू होता है ।
    नोट: जब माउस स्पष्ट रास्ता भर में चलता है, कार्यक्रम स्वचालित रूप से इस कदम के रूप में वर्गीकृत & #34; अनुरूप भागो & #34; एक हरे रंग की आइकन के साथ । यदि सॉफ़्टवेयर पैर प्रिंट का पता लगाने में विफल रहा, तो experimenter एक लाल चिह्न दिखाई देगा और रिकॉर्डिंग दोहराना होगा. विश्लेषण के लए कम से कम पांच सफल कये गये रन की जरूरत है.
  4. परीक्षण के बाद
  5. का चयन & #39; वर्गीकृत रन & #39; के मोल टैब से & #39;p प्रोग्रा & #39; menu.
  6. विश्लेषण के लिए रन का चयन करें और क्लिक करें & #39; स्वत: वर्गीकृत & #39; बटन.
    नोट: वर्गीकरण के बाद, सभी सांख्यिकीय पैरामीटर्स स्वचालित रूप से सहेजे जाते हैं और experimenter क्लिक करके परिणाम ढूँढ सकते हैं & #34; विश्लेषण करें मेनू पर चलाएँ आँकड़े & #34; देखें

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Representative Results

सीसीआई सर्जरी के बाद 10 दिनों तक सीसीआई चूहों में हम वॉन Frey परीक्षण और स्वचालित चाल विश्लेषण प्रदर्शन किया है । सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए, दो तरह के विचरण का दोहराया उपाय (ANOVA) समग्र प्रभाव निर्धारित करता है, और Dunnett के बाद हॉक विश्लेषण प्रयोगात्मक समूहों के बीच पी-मूल्य निर्धारित करने के लिए किया गया था ।

चित्र 1 में दिखाए गए परिणाम शास्त्रीय वॉन Frey परीक्षण डेटा के समय पाठ्यक्रम का संकेत देते हैं । सीसीआई चूहों की PWF (%) सीसीआई सर्जरी के बाद 2 दिनों में वृद्धि हुई और अन्तर्वासना ग्रुप के मुकाबले 10 दिनों तक टिकता रहा । सीसीआई सकारात्मक नियंत्रण समूह में, GBP (५० मिलीग्राम/किग्रा, IP, एक बार दैनिक 10 दिनों के लिए शुरू होता है 1 सर्जरी के बाद दिन) काफी कम सीसीआई-बढ़ाया PWF । पैनल ए के अन्तर्वासना ग्रुप में PWF (%) ८.०० ± ५.८३ पर timepoint प्री-सर्जरी (प्री), ६.०० ± २.४५ दिन पर 2, ४.०० ± २.४५ दिन पर 4, २.०० ± २.०० दिन पर 6, ४.०० ± २२.४५ दिन पर 8, और ६.०० ± २.४५ दिन पर 10 । सीसीआई समूह में, PWF (%) २.८६ ± १.८४ पर पूर्व, ६१.४३ ± ५.९५ दिन पर 2, ६८.५७ ± ४.५९ दिन पर 4, ७२.८६ ± ५.२२ दिन 6 पर, ७५.७१ ± ६.४९ दिन 8 पर, और ७५.७१ ± ३.६९ दिन पर 10 । सीसीआई + GBP समूह में, PWF (%) था २.५० ± १.४३ पर पूर्व, ५७.५० ± ५.२२ दिन पर 2, ५०.०० ± ४.०४ दिन पर 4, ४५.०० ± ४.८१ दिन पर 6, ४६.२५ ± ५.६५ दिन 8 पर, और ४७.५० ± ४.८८ दिन पर 10 । पैनल बी में, वक्र (ईमेज) के तहत क्षेत्र में २३.०० ± ६.०० में अन्तर्वासना, ३१७.८६ ± १७.०४ में सीसीआई, और सीसीआई में २२३.७५ ± १७.०५ + GBP समूह था ।

चित्रा 2 में दिखाया परिणाम सीसीआई सर्जरी के बाद पंजा प्रिंट क्षेत्र के एक समय पाठ्यक्रम परिवर्तन का संकेत मिलता है । डेटा बाएं और दाएं हिंद पंजे के बीच पंजा प्रिंट क्षेत्र के प्रतिशत परिवर्तन के रूप में दिखाया जाता है । यदि पंजा प्रिंट क्षेत्र एक सामांय स्थिति में छोड़ दिया और सही पक्षों में एक ही है, डेटा ५०% हो जाएगा । सीसीआई काफी कम पंजा प्रिंट क्षेत्र ipsilateral हिंद पंजा सर्जरी के बाद 2 दिन और 10 दिनों के लिए बनाए रखा गया था । GBP उल्लेखनीय कम पंजा प्रिंट क्षेत्र बरामद किया । में अन्तर्वासना समूह के पैनल बी, पंजा प्रिंट क्षेत्र (%) ५०.१३ ± २.१३ पर पूर्व, ५०.३० ± १.४५ दिन पर 2, ५३.२४ ± ०.८० दिन पर 4, ५०.३० ± १.६८ दिन पर 6, ५२.०८ ± १.७९ दिन पर 8, और ४९.६६ ± २.२४ दिन पर 10 । सीसीआई समूह में, पंजा प्रिंट क्षेत्र (%) था ५०.७१ ± ३.१७ पर पूर्व, 0 ± 0 दिन पर 2, 0 ± 0 दिन पर 4, ८.८६ ± ३.२७ दिन 6 पर, ६.६ ± ३.२० दिन 8 पर, और १०.३० ± ५.६० दिन पर 10 । सीसीआई + GBP समूह में, पंजा प्रिंट क्षेत्र (%) ५५.५९ ± २.०१ पर पूर्व, 4.65 ± 4.17 दिन 2 पर, 15.18 ± 5.57 दिन पर 4, २०.२० ± ४.०० दिन 6 पर, २६.०१ ± ५.५३ दिन पर 8, और 10 दिन पर २८.४० ± ६.०४ था ।

चित्रा 3 में दिखाए गए परिणाम सीसीआई सर्जरी के बाद एक भी रुख के समय पाठ्यक्रम परिवर्तन का संकेत देते हैं । डेटा की गणना की गई और प्रतिशत परिवर्तन (पंजा मुद्रण क्षेत्र डेटा के समान) के रूप में दिखाया गया. सीसीआई ने ipsilateral पक्ष के एकल रूख को कम कर दिया और GBP काफी इसे बरामद किया । पैनल बी के अन्तर्वासना समूह में, एकल रूख (%) ४९.३१ ± २.१५ पर पूर्व, ५०.७१ ± ०.६७ दिन पर 2, ५०.७६ ± ०.४४ दिन पर 4, ५०.६० ± १.११ दिन पर 6, ५१.५० ± ०.९६ दिन पर 8, और 10 दिन पर ४९.०० ± २.३५ । सीसीआई समूह में, एकल रुख (%) था ५०.३६ ± ३.१७ पर पूर्व, 0 ± 0 दिन पर 2, 0 ± 0 दिन पर 4, ११.५ ± ३.२५ दिन पर 6, १३.६१ ± ५.०४ दिन 8 पर, और १२.९४ ± ६.४० दिन पर 10 । सीसीआई + GBP समूह में, एकल रुख (%) ५२.३५ ± ०.९१ पर पूर्व, ५.४४ ± ४.८७ दिन पर 2, १८.६६ ± ४.३३ दिन पर 4, २५.४८ ± ४.१० दिन 6 पर, ३०.२६ ± २.१७ दिन 8 पर, और ३२.२४ ± ४.९५ दिन पर 10 ।

Figure 1
चित्रा 1: allodynia सीसीआई चूहों में वॉन Frey परीक्षण द्वारा मूल्यांकन यांत्रिक । () वॉन Frey परीक्षण में पंजा आहरण आवृत्ति (PWF,%) सीसीआई सर्जरी के बाद २ दिन बढ़ाई गई और शम समूह के मुकाबले १० दिनों के लिए दीर्घकाल तक कायम रही. Gabapentin (GBP, ५० मिलीग्राम/kg, IP) गौरतलब है सीसीआई प्रेरित यांत्रिक allodynia उलट । (B) PWF का संचित डेटा वक्र के अंतर्गत क्षेत्र के रूप में दिखाया जाता है । * * p & #60; ०.०१ और * * * p & #60; ०.००१ बनाम सीसीआई समूह । त्रुटि सलाखों के संकेत मतलब ± एसडी. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: सीसीआई चूहों में स्वचालित चाल विश्लेषण द्वारा पंजा प्रिंट क्षेत्र । () अन्तर्वासना के समूहों से हिंद पंजे की छवियों पर कब्जा कर लिया, सीसीआई, और सीसीआई + GBP (gabapentin, ५० मिलीग्राम/किग्रा, IP) विश्लेषण सॉफ्टवेयर द्वारा । सफेद आयत हिंद पंजा के संकेतक विश्लेषण प्रणाली द्वारा पाया जाता है । सीसीआई का सबसे छोटा पंजा आकार नोट और इस कमी आंशिक रूप से GBP उपचार द्वारा बरामद किया गया था । () पंजा प्रिंट क्षेत्र का समय पाठ्यक्रम (%) । डेटा को बाएँ और दाएँ हिंद पंजा के बीच मुद्रण क्षेत्र के प्रतिशत परिवर्तन के रूप में गणना कर रहे हैं (उदा., ५०% बाएँ और दाएँ पक्षों में एक ही पंजा प्रिंट क्षेत्रों को इंगित करता है). * p & #60; ०.०५ और * * p & #60; ०.०१ बनाम सीसीआई समूह । त्रुटि सलाखों के संकेत मतलब ± एसडी ।

Figure 3
चित्रा 3: सीसीआई चूहों में स्वचालित चाल विश्लेषण द्वारा एकल रुख । () प्रत्येक पंजा के लिए विभिन्न रंगों द्वारा हाइलाइट किए गए एकल रुख के कैप्चर किए गए और परिवर्तित की गई छवियाँ. ध्यान दें कि ipsilateral हिंद पंजा के लिए गुलाबी ट्रेस सीसीआई समूह में छोटा है और gabapentin (GBP, ५० मिलीग्राम/गौरतलब है कि यह अन्तर्वासना स्तर पर इसी तरह बरामद हुआ. (B) एकल रूख का समय पाठ्यक्रम (%) । डेटा छोड़ दिया और सही हिंद पंजा के बीच एकल रुख के प्रतिशत परिवर्तन की गणना के बाद एक लाइन ग्राफ के रूप में संक्षेप हैं (उदा., ५०% बाएं और दाएं पक्षों में एक ही रुख को इंगित करता है) । * p & #60; ०.०५, * * p & #60; ०.०१ और * * * p & #60; ०.००१ बनाम सीसीआई समूह. त्रुटि सलाखों के संकेत मतलब ± एसडी. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.

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Discussion

वर्तमान में, वॉन Frey रेशा का उपयोग करके यांत्रिक allodynia का मापन दर्द पशु मॉडल में सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया विधि स्पर्श अतिसंवेदनशीलता प्रदर्शित करने के लिए है । neuropathic दर्द के लिए पशु मॉडल के रूप में विकसित किया जाना जारी रखा है, संवेदी समारोह के लिए मूल्यांकन की कार्यप्रणाली में भी सुधार किया गया है8,9,10,15। उन रिपोर्टों में, यह इन संशोधनों के पुराने तरीकों के लिए एक और अधिक सटीक, तेज और उपयोगकर्ता के अनुकूल प्रतिस्थापन प्रदान कर सकते है सुझाव दिया गया है । हालांकि, उन विधियों से डेटा अभी भी इसके मनोवाद द्वारा सीमित किया जा सकता है और विधि करने के लिए कौशल या अनुभव की आवश्यकता है । इसके अलावा, जब वॉन Frey परीक्षण प्रदर्शन कर पशुओं को रोका नहीं जा सकता है, और इसलिए संयम से संबंधित पशुओं के तनाव दर्द प्रतिक्रिया परिणाम को प्रभावित कर सकते हैं ।

स्वचालित चाल विश्लेषण प्रणाली स्वचालित रूप से पशु चलने के विभिन्न मापदंडों के उपाय (उदा., फर्श के लिए पंजा संपर्क के कुल क्षेत्र, पंजा प्रिंट के कोण, रुख समय, आदि), और इसलिए प्रयोगकर्ता अधिक उद्देश्य डेटा का उपयोग कर सकते हैं विश्लेषण12,13,14,16,17,18। इसके अलावा, इस विधि किसी भी उत्तेजना के बिना किया जा सकता है; इस प्रकार, यह कम इनवेसिव है और स्वतंत्र रूप से चलती कुतर से डेटा प्राप्त किया जा सकता है । के रूप में इस अध्ययन के परिणामों में दिखाया गया है, पैर प्रिंट आकार और ipsilateral हिंद पंजा का रुख समय सीसीआई सर्जरी द्वारा कम कर रहे है और GBP उपचार द्वारा बरामद; इसी तरह के परिणाम वॉन Frey टेस्ट में भी मिले हैं. पिछले टिप्पणियों के साथ संगत14, neuropathic दर्द पशु मॉडल में चाल विश्लेषण के परिणाम है कि वॉन Frey परीक्षण से सकारात्मक संबंध के एक उच्च डिग्री है, यह दर्शाता है कि सीसीआई से संबंधित बदल मापदंडों डिग्री को प्रतिबिंबित कर सकते है यांत्रिक allodynia, neuropathic दर्द के सबसे परेशान लक्षणों में से एक ।

यहां, हम कैसे विस्तार से स्वचालित चाल विश्लेषण प्रणाली और सीसीआई neuropathic चूहों में शास्त्रीय वॉन Frey परीक्षण के साथ डेटा की एक संक्षिप्त तुलना संचालित करने के लिए पर एक विधि प्रदान करते हैं । अंत में, स्वचालित चाल विश्लेषण क्योंकि यह उपयोगकर्ता के अनुकूल, उद्देश्य है neuropathic दर्द के अध्ययन के लिए सबसे बेहतर सुलभ उपकरण हो सकता है, और संवेदनशील ।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस शोध Chungnam राष्ट्रीय विश्वविद्यालय, कोरिया ओरिएंटल मेडिसिन (KIOM) और कोरिया स्वास्थ्य प्रौद्योगिकी R & #38;D परियोजना के माध्यम से कोरिया स्वास्थ्य उद्योग विकास संस्थान (खिडी), स्वास्थ्य मंत्रालय द्वारा वित्त पोषित के माध्यम से अनुदान का समर्थन किया था & #38; कल्याण, कोरिया गणराज्य (अनुदान संख्या: HI15C0007).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
0.9% Saline JW Pharmaceutical N/A Vehicle for drugs
1ml syringe BD Plastipak 300013 Injecting device
2, 2, 2-tribromoethanol (97% purity) Sigma T48402 Anesthetic
2-methyl-2-buthanol (99% purity) Sigma 152463 Solvent for 2, 2, 2-tribromoethanol
Catwalk Automated gait analysis system Noldus N/A Automatic analysis software of aniaml gait
Chromic catgut (4-0 thickness) AILEE C442 Ligature to make chronic constriction injury on the sciatic nerve
Gabapentin Sigma Y0001280 Analgeisc, Used as a positive control drug in this study
Graefe Forceps F.S.T 11051-10 Surgical instrument
Heating Pad DAESHIN ELECTRONICS M-303AT Regulation of body temperature
ICR Mouse Samtaco N/A Experimental animal
Mersilk (3-0 thickness) ETHICON W598H Suture material for surgical closure of skin
Micro-Mosquito F.S.T 13010-12 Surgical instrument
Micro-scissors F.S.T 14090-09 Surgical instrument
Needle holder F.S.T 12002-12 Surgical instrument
Povidone Iodine Firson N/A Disinfectant to prevent infection after surgery
Scalpel blade F.S.T 10010-00 (#10) Surgical instrument to make an incision
Scalpel handle F.S.T 10003-12 (#3) Surgical instrument to make an incision
Von-Frey filaments North Coast NC12775-99 Measurement device to test sensory function for mechanical stimulation

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References

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