Модель в наркотизированных конкретного возбудителя бесплатные куры для изучения вирулентности Clostridium Perfringens перевязаны кишечной петли

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Здесь мы представляем протокол к хирургическим путем создания «кишечной петли перевязаны» в курица тонкий кишечник. Эта процедура позволяет для сравнения нескольких штаммов Clostridium perfringens вирулентности в situ в одном узле. Этот метод значительно уменьшается количество кур, обычно необходимых для подобных экспериментов в естественных условиях .

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Parent, E., Burns, P., Desrochers, A., Boulianne, M. A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence. J. Vis. Exp. (140), e57523, doi:10.3791/57523 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Энтерит Некротический был изучен в КУР, с использованием различных моделей инфекции в естественных условиях . Большинство из них использовать сочетание предрасполагающих факторов, таких как кокцидиоза и диеты, с кормления или администрации через канал, с помощью Clostridium perfringens. В этих моделях сравнение нескольких штаммов C. perfringens вирулентности исследований требуется большое количество хостов для получения значимых результатов. Смертность в ходе исследования может быть высокой зависимости от экспериментальной модели, поэтому повышение этических соображений относительно животных в научных исследованиях. Разработка новых моделей инфекции, требующие меньше животных для изучения патогенеза, пока предоставление статистически существенных и допустимых результатов, имеет важное значение в плане сокращения использования животных в научных исследованиях. Кишечные перевязаны цикла модели были использованы для изучения клостридий инфекции в различных видов, таких как мышей, кроликов и телят. После хирургических процедур для создания сегментов перевязаны цикла штаммы C. perfringens вводят непосредственно в петли, чтобы установить тесный контакт между бактериями и слизистую кишечника. По завершении процедуры после нескольких часов берутся образцы Люминал содержания и тонкой кишки. Несколько штаммов бактерий могут быть привиты в каждое животное, что сокращает количество необходимых предметов в экспериментах. Кроме того процедуры проводятся под общим наркозом для уменьшения боли животных. В КУР эта модель будет более подходящим, чем пероральный для сравнения патогенности штамм C. perfringens , поскольку требуется меньшее количество животных, не предрасполагающие факторы требуются навести болезни и боль контролируется анальгетики . Кишечные петли перевязаны модель плохо описан в кур и стандартизации имеет важное значение для его оптимального использования. Эта рукопись обеспечивает все необходимые шаги для создания многочисленных кишечных петель перевязаны в кур и приносит информацию о критических точек для получения достоверных результатов.

Introduction

Использование животных моделей для изучения инфекционных заболеваний, затрагивающих людей и животных является главным инструментом в оценке Факторы вирулентности, регулирующие патогенеза конкретные условия также в отношении разработки стратегий для предотвращения или лечения заболеваний1. Несмотря на многочисленные преимущества использования животных моделей для изучения различных заболеваний возникают этические соображения относительно этой практики. Исследователи должны свести к минимуму использование животных во время получения существенных и допустимые результаты. Для обеспечения учета вопросов благосостояния в таких исследованиях была разработана концепция 3 Rs принципов (Replace, уменьшить и уточнить). В исследованиях энтерит Некротический курица в естественных условиях курица модели используются для изучения этиологии, профилактики и лечения данного состояния2,3,4,5. Патогенные штаммы C. perfringens проведение конкретных вирулентности факторы, такие как NetB токсин6, находятся в ведении вызывают некротические энтерит в КУР7. Принцип замены, таким образом, трудно достичь в таком случае, поскольку эти факторы вирулентности могут быть не так критично в других видов животных. Большинство моделей для энтерит Некротический в КУР использовать комбинацию факторов риска, таких как кокцидиоза и изменили диету, чтобы побудить некротические энтерит, следуют затравки культуры бульон, содержащий большое количество C. perfringens2. Эти модели будут вызывать заболевания в большое количество кур, и смертности может иметь важное значение в таких испытаний8, таким образом вызывает обеспокоенность по поводу сокращения и уточнения принципов в исследований на животных.

Кишечные петли перевязаны модели являются желательной альтернативой для изучения болезней, вызванных кишечных патогенов отношении принцип сокращения и уточнения. В этих моделях кишечные сегментов, под названием «петли» создаются путем размещения лигатуры вдоль желудочно-кишечного тракта для формирования независимой и герметичных отсеков, где патогены могут быть введены только9 или с другими молекулами, например вакцин-кандидатов 10 , 11. патогенов интереса находятся в тесном контакте с клетками кишечника и после нескольких часов время инфекции, кишечные образцы могут быть восстановлены для дальнейшего анализа. Это позволяет использовать несколько лечения и контрольных групп в то же самое животное. Статистический анализ может выполняться с моделями неоднократные меры, которые увеличивает силу дискриминации между группами и уменьшает количество необходимых кур, по сравнению с пероральная затравка испытания. Кроме того хирургических процедур и последующего заражения раз выполняются под непрерывной общей анестезии и обезболивание, таким образом к минимуму животных боль. Замкнутая перешнуровок являются идеальным шаблон для сокращения числа узлов и создания более гуманной системы исследований на животных.

Кишечные петли перевязаны модели хорошо описаны в различных видов, таких как телят, кроликов и мышей2,9, но плохо описано в КУР7. Для оптимального использования этой хирургической модели правильную технику и выполнения необходимы для создания перевязаны кишечной петли, чтобы избежать повреждения кишечника целостности. Цель этой рукописи должен описать метод шаг за шагом в создании нескольких кишечных петель в модели курица. Этот метод ограничен хирурга мастерство и опыт, как точные процедуры имеют важное значение для успеха проекта.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Все процедуры с использование живого животного были утверждены Комитетом по этическим факультет ветеринарной медицины, Университет Монреаля (CÉUA, «Комите d» этики де использование des Animaux»).

1. соображения до операции

  1. Выбор конкретного возбудителя бесплатно 10 недель (SPF) Ливорно кур для хирургии.
    Примечание: Их вес должен быть между 1.0 и 1.2 кг.
  2. Снять канал 12 ч до процедуры для очистки желудочно-кишечного тракта.
  3. До операции место Куры под общим наркозом после протокол проверены анестезиолога. Premedicate каждый цыпленок 15 мин до операции с внутримышечной инъекции (IM) мидазолама 1 мг/кг и Буторфанол 4 мг/кг. Повторяю, каждые 4 ч, инъекции Буторфанол 4 мг/кг IM или когда изменения характера дыхания и частоты увеличивается во время анестезии. Для общей анестезии во время всех процедур, управление изофлюрановая в концентрации между 1,5 и 2,5% с трахею трубки.
    Примечание: Как они будут значительно улучшить глубины анестезии, уменьшить количество обезболивающих средств, необходимых во время всех процедур, а также включить исследователей для контроля уровня боли рекомендуется использовать премедикации для успокоения и анальгезии.
  4. Контролировать анестезии путем записи температуры тела, частоты пульса и электрокардиограммы (ЭКГ), дыхательных частоту и ритм, насыщение кислородом, истек углекислый (CO2) и неврологических рефлексов.
    Примечание: Человек должен быть назначен для мониторинга этих параметров на протяжении всех процедур.
  5. Следуйте принципам стерильности течение хирургических процедур. Убедитесь, что хирург и помощник хирурга платье с стерильных платья, перчатки, маски и защитные очки согласно институциональных предоперационной протоколы. Убедитесь, что хирург скрабы руки хлоргексидин глюконат пропитанные стерильные щеткой до локтя с упором на ногти и каждый палец поверхности.
  6. Стерилизуйте хирургические инструменты с стерилизатор.

2. Хирургическое сайта подготовка

  1. Во-первых вручную удалите перья из живота с нежной тяги.
  2. Скраб для хирургической сайта хлоргексидин глюконат стиральный порошок пропитанные стерильные щеткой. Аккуратно скраб кожи из центра наружу для общее время контакта 5 мин без возвращаясь к центру.
  3. Выполните 3 альтернативных проходы на хирургическое сайте с раствором хлоргексидина глюконата и изопропиловый спирт с использованием стерильных сетки.
    Примечание: Проход необходимо начинать с середины хирургической сайта на границы, чтобы избежать загрязнения из районов, не вылечить хирургическим сайт.
  4. Место стерильные хирургические драпировка на курицу.

3. Добыча тонкий кишечник из брюшной полости

  1. Надрезать хирургические драпировка с помощью ножниц выставить только хирургическое участок кожи.
  2. Надрезать кожу, выполняя '' L'' формы низкой-средней линии разреза с лезвием скальпеля #3.
    1. Запустите первый разрез 1 см к грудине каудально и заканчивается 1 см черепа в клоаку.
    2. Выполните второй надрез, перпендикулярно первый разрез. Начнем с хвостового конца первого разреза и продолжить 5 см к левой стороне живота, следуя линии таза.
      Примечание: Это открытие создаст лоскут, который позволит упростить извлечение кишечника.
  3. Хирургии ножницами вырежьте брюшины и брюшных мышц с тем же шаблоном формы '' L'' открыть брюшной полости.
    Примечание: Это будет подвергать воздушные мешки. Кишечника расположены под эти структуры. Воздушные мешки должны быть увлажненный с сетки, насыщенных с стерильным физиологическим 0,85% чтобы избежать высыхания и возможного разрыва во всей процедуре.
  4. Вставка, СНУК Шпай крюк в брюшной полости, следуя левой брюшной стенки и работать путь вокруг живота воздушные мешки.
  5. Аккуратно неубранной кишечника и разложить их на операционном поле.
    Примечание: Держать кишечник, увлажняется, часто поливая стерильный физиологический 0,9% на протяжении всей процедуры. Кроме того сеток, увлажненный с стерильного физиологического раствора могут быть размещены на кишечник, чтобы избежать высыхания.
  6. Grab кишечника с помощью сухой стерильной марлей и аккуратно выньте из тонкого кишечника путем ручной тяги подвергать тощей кишки.
    Примечание: Брыжеечных сосудов являются хрупкими и чрезмерная напряженность может разрыва их, которые могут привести к кишечной ишемического поражения и существенно подорвать результаты процедуры.

4. Изготовление кишечной петли

  1. Создание цикла № 1.
    1. Место просто лигатура полиглактин мультифиламентные синтетические рассасывающиеся материалом в проксимальном тощей кишки, избегая лигатура крупных брыжеечных сосудов.
    2. Место дистальной лигатура 2 см от проксимальных лигатур.
      Примечание: Простой лигатуры, сделанные с мультифиламентные шовного материала расположены вдоль желудочно-кишечного тракта для создания герметичных сегментов. Схема (рис. 1) описывает расположение всех лигатуры. Циклы состоят из проксимальных и дистальных лигатур, разделенных на 2 см.
  2. Создание interloop № 1.
    1. Место простой лигатура 0,5 см aborally к дистальной лигатура цикла №1.
      Примечание: Между последовательных циклов, есть interloops 1 см, т.е. сегменты, делая физическое разделение между петлями. Скорее всего уменьшить возможный риск перекрестного заражения от одного цикла к другому, простой лигатура находится посередине interloop (0,5 см от проксимальных и дистальных лигатура 2 смежных циклов). Это уменьшает риск возможной утечка загрязняющих веществ из цикла достичь лигатура прилегающих цикла. Эти сегменты не являются обязательными, но уменьшит риск перекрестного загрязнения.
  3. Создание последующих циклов и interloops.
    1. Повторите шаги 4.1 и 4.2, чтобы получить количество желаемых петель.
      Примечание: В этом эксперименте, 9 петель и 8 interloops были созданы. Общая протяженность составила 26 см. Количество петель могут корректироваться в зависимости от исследования.

5. инъекции штаммов Clostridium perfringens в петли

  1. Придать стерильный шприц и игла 26 G возбудителя в петлю № 1. Аккуратно вставьте иглу на стороне antimesenteric кишечника под углом 45°.
    Примечание: В этом эксперименте, 0,2 мл мозга сердце инфузии (BHI) содержащий 1 x 10-6 кое (колонии формируя единиц) C. perfringens в фазе роста среднего журнала было впрыснуто в каждом цикле. 5 различных штаммов вводили в 5 различных петель и оставшиеся петли 4 вводили с отрицательным элемент управления, содержащий никаких бактерий (стерильные BHI), чередуя патогенов и стерильные BHI петли.
  2. Повторите шаг 5.1 придать все петли.
  3. Аккуратно замените кишечного тракта в спинной области брюшной полости, под воздушные мешки.

6. Закрытие брюшной полости

  1. Шовный материал брюшины и мышц живота.
    1. Шовные брюшины и брюшные мышцы вдоль малого таза (сделанные в шагу 3.3) с простой непрерывный шов выкройку полиглактин мультифиламентные синтетические рассасывающиеся материала.
    2. Шовные брюшины и мышцы живота от грудины в клоаку (в действии 3.3. с простой непрерывный шов выкройку полиглактин мультифиламентные синтетические рассасывающиеся материала.
  2. Шовный материал кожи.
    1. С помощью полиглактин мультифиламентные синтетического материала и шаблон простой непрерывный шов, закройте разрез кожи вдоль малого таза, в пункте 3.2.
    2. Используя тот же материал мультифиламентные лигатур и шаблон простой непрерывный шов, закройте разрез кожи от грудины на шаге 3.2 клоаку.

7. заключение

  1. После хирургических процедур Держите курица под общим наркозом с надлежащее использование анальгетиков для сведения к минимуму животных боль во время инфекции. Далее, анестезиологического мониторинга для обеспечения адекватной анестезии уровня.
  2. После желаемого инфекции время гуманно усыпить курица, шейки матки дислокации под общим наркозом.
    Примечание: Для выполнения этих процедур, необходимое время побудить микроскопических повреждений с патогенные штаммы C. perfringens был 7 h.
  3. С лезвием скальпеля #3 вырезать 0,5 см раздел петля длиной 1 см и поместите его в формалина 10% для фиксации ночи и далее гистопатологические анализа.
  4. С же лезвие скальпеля вырезать оставшиеся петли секции и поместите его в стерильных microcentrifuge трубки для изоляции штаммов C. perfringens далее бактериологическое анализа каждого цикла для их генетических характеристик.
  5. Повторите шаги 7.2 и 7.3 для всех циклов, изменив лезвие скальпеля между каждый цикл.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Схема 9 петель кишечника и 8 interloops показано на рисунке 1. В этой модели в общей сложности 9 петель и 8 interloops создаются с простой лигатуры. Цикл состоит из проксимальных и дистальных лигатуры, расположенных на 2 см, измеренное от проксимальных лигатур. Две смежные циклы разделяются interloop 1 см. Для уменьшения возможного риска перекрестного загрязнения между петлями утечки от лигатуры, interloop лигатура помещается на полпути от дистальной лигатур и проксимальной вязью 2 смежными петлями. Количество петель могут корректироваться в зависимости от требований исследования.

Figure 1
Рисунок 1: Схематическое изображение перевязаны кишечных петель. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Рисунок 2A (HPS пятно) показывает появление микроскопических кишечной петли, вводится с стерильной среды управления. Слизистых оболочек кисть границы нетронутыми и есть не присутствует в разделе некроза. Мягкая заторов может присутствовать в кишечной слоях (слизистой оболочки, подслизистой, мышечной и serosa) сегментов. Рисунок 2B (HPS пятно) показывает Некроз слизистой 7 часов после инъекции патогенный штамм Clostridium perfringens оправился от клинический случай энтерит Некротический на птицеферме. Вилли советы эрозии с некротическими enterocytes окружающих Вилли советы. В материалах некротические окружающих ворсинки кластеры больших палочковидные бактерии наблюдаются (стрелки). Эти бактерии были далее определены как грамположительных бактерий с Twort пятно (не показан). Этот вывод, в сочетании с изоляцией по бактериологии большого числа Clostridium perfringens, указывает на повреждения были вызваны этой бактерии. Рисунок 2 c (HPS пятно) показывает гистологические поражения ишемического цикла, где некроз не связана с инъекций патогенных C. perfringens штаммов, но в результате плохо выполняются процедуры. Это увеличение показывает Некроз свертывания тяжелой, что может быть неправильно истолковано как поражений, вызванных Clostridium perfringens. Однако не бактерии наблюдаются в этом разделе. Кроме того кровеносных сосудов в мышечный слой сильно расширены накопление большого числа вырождающихся эритроцитов (стрелки). Это свидетельствует о сосудистой заторов и в этом случае заторов была вызвана перевязаны брыжеечных сосудов. Ишемическая петли могут быть легко идентифицированы макроскопически во время хирургических процедур; После тяжелая сосудистая перегрузками serosa будет темно-синий вместо его нормальной окраски розовый красноватые.

Figure 2
Рисунок 2: гистопатологические выводы 7 h послеоперационные инфекции. (A) существует не некротических поражений в слизистой оболочке на гистопатология после инъекций инфузии сердце мозга (BHI), стерильной питательной среды. (B) в циклах, вводили в патогенный штамм Clostridium perfringens, там помечен Некроз слизистой оболочки с многочисленных крупных грамположительных палочковидные бактерии охватывающих слизистую оболочку. (C) ишемического поражения могут напоминать некротических поражений, вызванных C. perfringens. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

В этом исследовании петли вводили с стерильных управления культуры среднего (BHI) или один из пяти различных штаммов Clostridium perfringens , извлеченных из различных антибиотиков бесплатные куриные стада пострадавших или не с энтерит Некротический12 . В этом исследовании были использованы десять кур. Патогенности штаммов может определяться на основании способности многократно вызывать поражения совместим с некротическими энтерит слизистой оболочки. Хотя штаммов, оправился от клинических случаев некротические энтерита, показали способность вызывать некроз слизистой 7 h послеоперационные инфекции, штаммы оправился от клинически здоровых курица ферм не вызывают Некроз слизистой и слизистую оболочку был похож на нормальный выводы из контуров управления впрыском с BHI12. С помощью многочисленных циклов в то же самое животное, пяти штаммов C. perfringens и четыре петли управления могут быть использованы в том же птица.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

В многочисленных видов для изучения взаимодействия хост возбудителя и патогенезе заболеваний, вызванных различных кишечных патогенов, таких как Clostridium perfringens, Clostridium несговорчивый и были описаны модели кишечной петли Salmonella enterica7,9,13,14,15. Он также был использован для анализа слизистой иммунной реакции16, эффективность антител для нейтрализации бактериальные токсины, экскретируется кишечных патогенов11 и оценки кандидатов вакцины для профилактики кишечных заболеваний10 . Однако эта модель, используя многочисленные перевязаны петли в один отдельных животных плохо описан в кур и стандартизации этой техники является обязательным для получения действительных результатов, как неадекватные манипуляции могут привести к ложные результаты и недоразумения . Этот манускрипт показывает создание 9 последовательных перевязаны петли, расположенные в тощую и подвздошную курица желудочно кишечного тракта. В настоящем исследовании использованы конкретные патогеном бесплатно (SPF) мужской кур Ливорно весом от 1.0 и 1.2 кг. Максимальное количество циклов, предусмотренных этой породы на этот вес был 9, поскольку 26 см малого кишечника может быть легко печенке из полости целомическую. Не исключено, что с помощью другой породы или тяжелее Ливорно Петушки, общее количество петель создан могут быть разные, даже выше, чем 9. Кишечные петли длиной также может быть изменен, но 2-см Длина считается оптимальным разрешить проб для гистопатология и бактериология при использовании максимальная вместимость имеющиеся длины кишечника.

Кишечные петли перевязаны техника, описанные в этой статье может быть ценной альтернативой для текущей модели, доступных для изучения некротические энтерит в КУР, вызванного Clostridium perfringens. Согласно результатам, описанным в предыдущей статье12Оценка 5 штаммов C. perfringens с 10 кур было достаточно для дифференцировать весьма опасной и синантропных штаммов C. perfringens. Для сравнения другие инфекции моделей с использованием за os прививка воспроизвести энтерит Некротический с C. perfringens потребует большое количество людей, чтобы получить те же результаты. В литературе количество птиц, необходимых для оценки вирулентности C. perfringens штаммов колеблется от 10 до 30 кур в группе17,18,19 до ста хостов на группы20. Что касается уточнения принципа для использования животных в научных исследованиях он бы рекомендовать использовать технику, требующих наименьшее количество хостов для получения значимых результатов. Кишечные петли перевязаны модель описанные в этой статье является скорее требующие наименьшее количество кур для сравнения вирулентности штаммов C. perfringens .

Так как перекрестное загрязнение, утечки из лигатура может оцениваться только после того, как C. perfringens культуры и характеристика, импульсного электрофореза геля поля (PFGE) много дней после процедуры, он имеет крайне важное значение для их минимизации рисков, включая 1 см interloops, содержащий interloop вязь на полпути между двумя смежными петлями. Принимая эти меры предосторожности, можно было избежать возможного перекрестного загрязнения. Действительно в то время как патогенные штаммы вызвало микроскопических некротических поражений, совпадающей с некротическими энтерит, там были не значительные микроскопических повреждений в соседние петли, вводится с непатогенные штаммов C. perfringens или BHI культуры среднего отрицательный контроль. Это свидетельствовало, что различные штаммы могут безопасно вводят в прилегающих кишечных петель же курицы.

Один из самых сложных вопросов с этой моделью был экстериоризации тонкий кишечник без ущерба для вентиляции и кишечные васкуляризации. Птицы имеют разные дыхательной системы, чем млекопитающие. Диафрагма отсутствует, и вентиляции контролируется airsacs, тонкостенных конструкций в брюшной полости. Есть 7 из них кур и они делятся на шейки матки (1), передней грудной (2), задняя грудной (2) и брюшной полости (2) воздушные мешки. Эти структуры шар как подключены непосредственно в легкие и позволяет движение воздуха в дыхательных путях. После открытия брюшной полости между грудиной и клоаку, брюшной airsacs известных и склонны быть легко разрыва, особенно если сухой. По этой причине постоянное увлажнение с сетки, затухают с стерильного физиологического раствора имеет важное значение для облегчения надлежащей вентиляции и анестезии во время процедуры. Кроме того это может быть трудно избежать маленькие проколы в брюшную airsacs при exteriorizing кишечнике из брюшной полости. Это важно для мониторинга анестезии параметров, таких как частота дыхания и шаблон, глазной рефлексов, сердечного ритма и цыпленка движений, чтобы убедиться, что курица остается под самолет адекватной анестезии. Небольшая утечка воздуха менее вероятно повлиять на качество анестезии, но должны быть сведены к минимуму утечки. Это важно для герметично закрыть брюшины после процедур. Это будет восстановить давление внутреннего воздуха и вентиляции вернется к нормальному после этого шага. После закрытия этой структуры должно быть без утечки воздуха из живота. Это может быть проверена путем распыления небольшое количество стерильного физиологического раствора на швы и ищите пузырь формирования указанием воздуха, поступающего из брюшной полости. Если это произойдет, дополнительные простые коже швы могут быть размещены на сайте утечки воздуха.

Еще одним технически сложным аспектом связано с риском ишемического поражения, развивающихся в тонком кишечнике из-за плохо выполняются хирургические процедуры. Ишемия происходит, когда есть ограничение поставок крови в тканях, вызывая дефицит кислорода и других молекул, необходимых для клеточного метаболизма. В этом случае ЖКТ быстро станет макроскопически синий вместо pink красно и кишечные мукозные клетки выродится быстро. Это вызовет ишемического поражения, не связанные с вводят возбудителя и она будет мешать гистопатологические интерпретации. Две проблемные ситуации могут привести к ишемии. Во-первых лигатура брыжеечных сосудов по невнимательности вызовет это условие. По этой причине важно внимательно изучить размещение лигатуры вдоль желудочно-кишечного тракта во избежание включая брыжеечных сосудов. Во-вторых ишемии может произойти, если кровоизлияния брыжеечных сосудов происходят во время процедур. Эти структуры являются тонкими стенками и хрупкой. Чрезмерное напряжение может привести к их разрыву и во время вручную exteriorizing кишечника, внимание следует уделять напряженность на брыжеечных сосудов для обеспечения их целостности во время этого шага. Кроме того брыжеечных сосудов кровотечение может произойти, если эти прокола иглой шовного. Хирург должен внимательно на месте, пронзили через брыжейка с иглой. Кровотечение может быть остановлен в обеих ситуациях, но процесс коагуляции прекратить или значительно сократить поток крови эти кишечные сегментов, таким образом вызывая необратимые повреждения и ущерба для достоверности результатов.

Эта модель полезна для изучения взаимодействий хост возбудителя и патогенез кишечных заболеваний, вызванных инфекционными агентами. Предложенной модели могут быть адаптированы в зависимости от исследования, изменяя количество петель создал или изменяя длину каждого цикла. Перед реализацией таких изменений, рекомендуется стандартизировать метод для обеспечения существенных результатов. Ограничения этой методики ориентированы на мастерство и только должным образом подготовленный персонал должен выполнять эту операцию на живых животных.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgments

Эта работа была поддержана в птицы исследований (M. Boulianne) Председатель факультета ветеринарной медицины Университет Монреаля. DRS. Boulianne и родитель разработали модель. DRS. Boulianne и родитель выполненных операций. Д-р ожоги помощь в разработке протокола анестезии. Д-р родитель редактировать видео и написал рукопись. DRS Бернс, Дероше и Boulianne редактировать рукописи.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
EZ-Scrub 747 Becton Dickinson and Company 4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes 
Isopropyl alcohol 70% USP 4 L Commercial isopropyl alcohol P016IP70 Web address: http://www.comalc.com/products/
Chlorexidine Sigma-Aldrich 282227-1G Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&region=CA&gclid=EAIaIQ
obChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2Z
WQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE
Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration Veterinary Specialty Products 32724 Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.
detail&productgroup_id=15
Scalpel blades #3 Swann-Morton 301 Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php
Sterile saline NaCl 0.9% Sigma-Aldrich S8776-100ML Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&region=CA
Vicryl 3-0 Ethicon D9003 Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture
Syringe 1 ml with 26G needle Becton Dickinson and Company 329652 Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes
Brain Heart Infusion Sigma-Aldrich 1104930500 Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&region=CA&cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1
Eppendorf tube Sigma-Aldrich T9661-500EA Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&region=CA&gclid=EAIaIQ
obChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh
30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE
Formalin solution, buffered neutral, 10% Sigma-Aldrich HT501128-4L Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&region=CA
Clostridium perfringens strains Université de Montréal, Chaire en recherche avicole N/A Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Vitale, A., Chiarotti, F., Alleva, E. The use of animal models in disease research. Rare diseases and orphan drugs. 2, (1), 1-4 (2015).
  2. Uzal, F. A., et al. Animal models to study the pathogenesis of human and animal Clostridium perfringens infections. Veterinary Microbiology. (2015).
  3. Bernier, G., Phaneuf, J. B., Filion, R. Necrotic enteritis in broiler chickens. III. Study of the factors favoring the multiplication of Clostridium perfringens and the experimental transmission of the disease. Canadian Journal of Comparative Medicine. 41, (1), 112-116 (1977).
  4. Al-Sheikhly, F., Truscott, R. B. The pathology of necrotic enteritis of chickens following infusion of broth cultures of Clostridium perfringens into the duodenum. Avian Diseases. 21, (2), 230-240 (1977).
  5. Wicker, D. L., Iscrigg, W. N., Trammell, J. H. The control and prevention of necrotic enteritis in broilers with zinc bacitracin. Poultry Science. 56, (4), 1229-1231 (1977).
  6. Keyburn, A. L., et al. NetB, a new toxin that is associated with avian necrotic enteritis caused by Clostridium perfringens. PLoS Pathog. 4, (2), e26 (2008).
  7. Timbermont, L., et al. Origin of Clostridium perfringens isolates determines the ability to induce necrotic enteritis in broilers. Comp Immunol Microbiol Infect Dis. 32, (6), 503-512 (2009).
  8. Paradis, M. A., et al. Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens. Avian Pathol. 45, (3), 365-369 (2016).
  9. Valgaeren, B., et al. Lesion development in a new intestinal loop model indicates the involvement of a shared Clostridium perfringens virulence factor in haemorrhagic enteritis in calves. Journal of Comparative Pathology. 149, (1), 103-112 (2013).
  10. Goossens, E., et al. The C-terminal domain of Clostridium perfringens alpha toxin as a vaccine candidate against bovine necrohemorrhagic enteritis. Vet Res. 47, (1), 52 (2016).
  11. Goossens, E., et al. Toxin-neutralizing antibodies protect against Clostridium perfringens-induced necrosis in an intestinal loop model for bovine necrohemorrhagic enteritis. BMC Vet Res. 12, (1), 101 (2016).
  12. Parent, E., Archambault, M., Charlebois, A., Bernier-Lachance, J., Boulianne, M. A chicken intestinal ligated loop model to study the virulence of Clostridium perfringens isolates recovered from antibiotic-free chicken flocks. Avian Pathol. 46, (2), 138-149 (2017).
  13. Janvilisri, T., et al. Temporal differential proteomes of Clostridium difficile in the pig ileal-ligated loop model. PLoS One. 7, (9), e45608 (2012).
  14. Aabo, S., et al. Development of an in vivo model for study of intestinal invasion by Salmonella enterica in chickens. Infection and Immunity. 68, (12), 7122-7125 (2000).
  15. Meurens, F., et al. Early immune response following Salmonella enterica subspecies enterica serovar Typhimurium infection in porcine jejunal gut loops. Vet Res. 40, (1), 5 (2009).
  16. Gerdts, V., et al. Multiple intestinal 'loops' provide an in vivo model to analyse multiple mucosal immune responses. J Immunol Methods. 256, (1-2), 19-33 (2001).
  17. Wade, B., et al. The adherent abilities of Clostridium perfringens strains are critical for the pathogenesis of avian necrotic enteritis. Vet Microbiol. 197, 53-61 (2016).
  18. Cooper, K. K., et al. Virulence for chickens of Clostridium perfringens isolated from poultry and other sources. Anaerobe. 16, (3), 289-292 (2010).
  19. Cooper, K. K., Songer, J. G. Virulence of Clostridium perfringens in an experimental model of poultry necrotic enteritis. Veterinary Microbiology. 142, (3-4), 323-328 (2010).
  20. Chalmers, G., Bruce, H. L., Toole, D. L., Barnum, D. A., Boerlin, P. Necrotic enteritis potential in a model system using Clostridium perfringens isolated from field outbreaks. Avian Diseases. 51, (4), 834-839 (2007).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics