Un modelo de asa Intestinal ligados en pollos libre anestesiados patógenos específicos para el estudio de virulencia de Clostridium Perfringens

Medicine

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Summary

Aquí presentamos un protocolo quirúrgico crear «loops ligados intestinales» en intestino de pollo. Este procedimiento permite la comparación de virulencia en situ en un único host de varias cepas de Clostridium perfringens . Este método disminuye marcadamente el número de pollos generalmente necesarios para experimentos similares en vivo .

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Parent, E., Burns, P., Desrochers, A., Boulianne, M. A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence. J. Vis. Exp. (140), e57523, doi:10.3791/57523 (2018).

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Abstract

Enteritis necrótica fue estudiada en pollos utilizando varios en vivo modelos de infección. La mayoría de éstos utiliza una combinación de factores predisponentes, tales como coccidiosis y dieta, con sonda nasogástrica o administración a través de la alimentación usando Clostridium perfringens. En estos modelos, la comparación de múltiples cepas de C. perfringens para estudios de virulencia requiere un gran número de hosts para obtener resultados significativos. Durante el curso del estudio de la mortalidad puede ser alta dependiendo del modelo experimental, por lo tanto, levantando preocupaciones éticas sobre el bienestar de los animales en la investigación. El desarrollo de nuevos modelos de infección que requieran menos animales para estudiar la patogenesia, pero proporciona resultados válidos y estadísticamente significativos, es importante en la reducción del uso de animales en investigación. Modelos de asa intestinal ligados se han utilizado para estudiar las infecciones clostridiales en diversas especies como ratones, conejos y terneros. Después de procedimientos quirúrgicos para crear segmentos ligados lazo, cepas de C. perfringens se inyectan directamente en los lazos para establecer un contacto cercano entre las bacterias y la mucosa intestinal. Se toman muestras de intestino delgado y contenido luminal en la terminación de los procedimientos después de unas horas. Múltiples cepas bacterianas pueden ser inoculadas en cada animal, por lo tanto reduciendo el número de sujetos necesarios en los experimentos. También, los procedimientos se realizan bajo anestesia general para reducir el dolor animal. En los pollos, este modelo sería más adecuado que la administración oral para comparar la patogenicidad de C. perfringens cepa porque se necesitan menos animales, factores predisponentes no deben inducir a la enfermedad y dolor se controla con analgésicos . El modelo de asa intestinal ligados está pobremente descrito en pollos y estandarización es esencial para su uso óptimo. Este manuscrito ofrece todos los pasos necesarios para crear numerosos bucles ligados intestinales en pollos y aporta información sobre los puntos críticos para obtener resultados válidos.

Introduction

El uso de modelos animales para estudiar enfermedades infecciosas que afectan a los seres humanos y animales es una herramienta central en la evaluación de factores de virulencia, regulación de la patogenia de una enfermedad específica, así como a elaborar estrategias para prevenir o curar enfermedades1. A pesar de numerosas ventajas de la utilización de modelos animales para estudiar diversas enfermedades, han surgido preocupaciones éticas con respecto a esta práctica. Los investigadores deben minimizar el uso de animales y obtención de resultados significativos y válidos. El concepto de los 3 principios de Rs (reemplazar, reducir y refinar) fue elaborado para asegurar que en dichos estudios se abordaron temas de bienestar. En estudios de NE de pollo, en vivo pollo modelos se utilizan para investigar la etiología, prevención y tratamientos de esta condición2,3,4,5. Las cepas patógenas de C. perfringens que llevan factores de virulencia específicos, tales como la RedB toxina6, son administradas para causar enteritis necrótica en pollos7. Por lo tanto, el principio de sustitución es difícil de lograr en este caso como estos factores de virulencia pueden no ser tan críticos en otras especies animales. Mayoría de los modelos de enteritis necrótica en los pollos utiliza una combinación de factores de riesgo, tales como coccidiosis y alterado dieta para inducir enteritis necrótica seguida por sonda nasogástrica del caldo de cultivo que contienen grandes cantidades de C. perfringens2. Estos modelos inducirán la enfermedad en un gran número de pollos, y la mortalidad puede ser importante en estos ensayos8, así levantando preocupaciones acerca de los principios de reducción y refinamiento en la investigación animal.

Modelos de lazos ligados intestinal son una alternativa deseable para el estudio de enfermedades inducidas por patógenos intestinales en relación con el principio de reducción y refinamiento. En estos modelos, se crean segmentos de intestino llamados 'loops' mediante la colocación de ligaduras a lo largo del tracto intestinal para formar compartimentos independientes y herméticos donde patógenos pueden inyectar solo9 o con otras moléculas, tales como candidatos vacunales 10 , 11. los patógenos de interés estén en estrecho contacto con las células intestinales y que después de algunas horas de tiempo de infección, las muestras intestinales pueden ser recuperadas para su posterior análisis. Esto permite el uso de múltiples grupos de control y tratamiento en el mismo animal. Análisis estadístico puede realizarse con modelos de medidas repetidas, que aumenta el poder de discriminación entre grupos y reduce el número de gallinas necesarios en comparación con los ensayos orales gavage. También, procedimientos quirúrgicos y los tiempos de infección subsecuente se realizan bajo anestesia general continua y analgesia, por lo tanto, reducir al mínimo el dolor animal. Trompas de lazo cerrado están una plantilla ideal para reducir el número de host y crear un sistema más humano en la investigación animal.

Modelos de lazos ligados intestinal son bien descritos en varias especies, tales como terneros, conejos y ratones2,9, pero mal descritos en pollos7. Para un uso óptimo de este modelo quirúrgico, ejecución y la técnica adecuada son esenciales para la creación de bucles intestinales ligados para evitar daños a la integridad intestinal. El objetivo de este manuscrito es describir un método paso a paso en la creación de múltiples asas intestinales en un modelo de pollo. Esta técnica está limitada por la habilidad del cirujano y la experiencia, como procedimientos precisos son esenciales para el éxito del proyecto.

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Protocol

Todos los procedimientos con el uso de animales vivo fueron autorizados por el Comité de ética de la Facultad de medicina veterinaria de la Université de Montréal (CÉUA, 'Comité d' éthique de Deutsch des Animaux').

1. consideraciones antes de la cirugía

  1. Seleccionar pollos de Livorno (SPF) libres de 10 semanas de edad de patógenos específicos para la cirugía.
    Nota: Su peso debe estar entre 1.0 y 1.2 kg.
  2. Retirar la alimentación 12 horas antes de los procedimientos para vaciar el tracto intestinal.
  3. Antes de la cirugía, poner los pollos bajo anestesia general, siguiendo un protocolo verificado por un anestesiólogo. Premedicate cada pollo 15 minutos antes de la cirugía con una inyección intramuscular (IM) de midazolam 1 mg/kg y butorfanol 4 mg/kg. Repetir cada 4 h, la inyección de butorfanol 4 mg/kg IM o cuando los cambios de patrones de respiración y la frecuencia aumenta durante la anestesia. Para la anestesia general, durante todos los procedimientos, administrar isoflurano con una concentración entre 1.5 y 2.5% con un tubo endotraqueal.
    Nota: El uso de premedicación para sedación y analgesia se recomienda como ellos serán significativamente mejorar la profundidad de la anestesia, reducir la cantidad de anestésicos durante todos los procedimientos, así como permiten a los investigadores controlar los niveles de dolor.
  4. Monitor de la anestesia mediante el registro de la temperatura corporal, frecuencia cardíaca y Electrocardiograma (ECG), respiratorio tasa y ritmo, saturación de oxígeno, vencidos bióxido de carbono (CO2) y reflejos neurológicos.
    Nota: Una persona debe asignarse para controlar estos parámetros a lo largo de todos los procedimientos.
  5. Siga principios de esterilidad a través de los procedimientos quirúrgicos. Asegúrese de que el cirujano y el cirujano asistente vestido con batas estériles, guantes, una máscara y gafas de acuerdo a los protocolos preoperatorios institucionales. Asegúrese de que el cirujano friega las manos con un cepillo estéril de clorhexidina gluconato impregnado hasta el codo con énfasis en cada superficie de dedos y uñas.
  6. Esterilizar los instrumentos quirúrgicos con un esterilizador.

2. preparación del terreno quirúrgico

  1. En primer lugar, eliminar manualmente las plumas del abdomen con una tracción suave.
  2. Limpiar el sitio quirúrgico con un clorhexidina gluconato detergente impregnado estéril cepillo. Frote suavemente la piel desde el centro hacia el exterior para un tiempo total de contacto de 5 minutos sin volver al centro.
  3. Realizar 3 pasos alternativos en el sitio quirúrgico con solución de gluconato de clorhexidina y alcohol isopropílico utilizando gasas estériles.
    Nota: El paso debe comenzar desde el centro del campo quirúrgico a las fronteras para evitar la contaminación de las áreas no desinfectados al sitio quirúrgico.
  4. Coloque el paño quirúrgico estéril sobre el pollo.

3. extracción del intestino de la cavidad Abdominal

  1. Incidir el paño quirúrgico con unas tijeras para exponer sólo la piel del sitio quirúrgico.
  2. Haga una incisión en la piel mediante la realización de una incisión de línea media bajo forma de '' L'' con una hoja de bisturí #3.
    1. Iniciar la primera incisión de 1 cm caudal al esternón y extremo a 1 cm craneal a la cloaca.
    2. Realizar la segunda incisión perpendicular a la primera incisión. Comenzar desde el extremo caudal de la primera incisión y continuar 5 cm en el lado izquierdo del abdomen siguiendo la línea de la pelvis.
      Nota: Esta apertura va a crear un colgajo que permite una fácil extracción de los intestinos.
  3. Con las tijeras de cirugía, cortar el peritoneo y los músculos abdominales con el mismo patrón de forma de '' L'' para abrir la cavidad abdominal.
    Nota: Esto lo expondrá los sacos de aire. Los intestinos se encuentran por debajo de estas estructuras. Sacos de aire debe ser humidificados con gasas saturadas con solución salina estéril 0,85% para evitar la desecación y la posible ruptura durante el procedimiento.
  4. Esterilización de un robalo gancho en la cavidad abdominal después de la pared abdominal izquierda y funcionan de la manera alrededor de los sacos de aire abdominales.
  5. Exteriorizar el intestino y estos repartidos en el campo quirúrgico.
    Nota: Mantenga los intestinos humidificados rociando frecuentemente solución salina estéril 0,9% durante todo el procedimiento. También, pueden colocarse gasas humedecidos con solución salina estéril en los intestinos para evitar desecación.
  6. Agarra los intestinos con una gasa estéril seca y extraiga con cuidado el intestino por la tracción manual para exponer el yeyuno.
    Nota: Los recipientes mesentéricos son frágiles y una tensión excesiva que puede conducir a lesiones isquémicas intestinales y afectar grandemente el resultado del procedimiento puede romperse.

4. fabricación de asas intestinales

  1. Creación de lazo no. 1.
    1. Colocar una ligadura simple con Poliglactina multifilamento absorbible material sintético en el yeyuno proximal, evitando la ligadura de los vasos mesentéricos principales.
    2. Colocar una ligadura distal de 2 cm de la ligadura proximal.
      Nota: Simples ligaduras hechas con material de sutura multifilamento se colocan a lo largo del tracto intestinal para crear segmentos herméticos. Un esquema (figura 1) describe la ubicación de todas las ligaduras. Los lazos consisten en una ligadura proximal y distal, separada por 2 cm.
  2. Creación de interloop Nº 1.
    1. Colocar una ligadura simple 0,5 cm aborally a la ligadura distal de lazo n º 1.
      Nota: Entre los bucles sucesivos, hay interloops de 1 cm, es decir, segmentos que una separación física entre los lazos. Para probablemente reducir el posible riesgo de contaminación cruzada de un circuito a otro, una ligadura simple se coloca en medio del interloop (0,5 cm de la ligadura distal y proximal de 2 bucles adyacentes). Esto reduce el riesgo de un posible contaminante se filtró desde un lazo para llegar a la ligadura de un asa adyacente. Estos segmentos no son obligatorios pero disminuirán el riesgo de contaminación cruzada.
  3. Creación de lazos posteriores y interloops.
    1. Repita los pasos 4.1 y 4.2 para obtener el número de bucles deseados.
      Nota: En este experimento, se crearon lazos de 9 y 8 interloops. Longitud total ascendió a 26 cm. El número de bucles se puede ajustar según el estudio.

5. inyección de cepas de Clostridium perfringens en los lazos

  1. Inyectar con una jeringa estéril y una aguja de 26 G el patógeno en lazo n º 1. Inserte suavemente la aguja en el lado saculaciones del intestino en un ángulo de 45°.
    Nota: En este experimento, se inyectó 0,2 mL de infusión de cerebro corazón (BHI) que contiene 1 x 106 UFC (unidades formadoras de colonias) de C. perfringens en la fase de crecimiento de registro medio en cada bucle. se inyectaron 5 cepas diferentes en 5 circuitos diferentes y los 4 restantes loops fueron inyectadas con un control negativo que contiene ningunas bacterias (BHI estéril), alternancia de patógenos y bucles BHI estériles.
  2. Repita el paso 5.1 para inyectar todos los bucles.
  3. Vuelva a colocar el tracto intestinal en la zona dorsal de la cavidad abdominal, por debajo de los sacos de aire.

6. cierre de la cavidad Abdominal

  1. La sutura del peritoneo y los músculos abdominales.
    1. Suturar el peritoneo y los músculos abdominales a lo largo de la pelvis (hecho en el paso 3.3) con un patrón de sutura continua simple con Poliglactina multifilamento absorbible material sintético.
    2. Suturar el peritoneo y los músculos abdominales desde el esternón a la cloaca (hecha en el paso 3.3. con un patrón de sutura continua simple con Poliglactina multifilamento absorbible material sintético.
  2. La sutura de la piel.
    1. Usando un material multifilamento sintético de Poliglactina y un patrón de sutura continua simple, cerrar la incisión de la piel a lo largo de la pelvis hecha en el paso 3.2.
    2. Usando el mismo material de ligadura multifilamento y un patrón de sutura continua simple, cerrar la incisión de la piel desde el esternón a la cloaca hecha en el paso 3.2.

7. conclusión

  1. Después de los procedimientos quirúrgicos, mantenga el pollo bajo anestesia general con el uso apropiado de analgésicos para minimizar el dolor animal durante el tiempo de infección. Continuar la vigilancia anestésica para asegurar un nivel adecuado de anestesia.
  2. Después de la hora deseada infección, eutanasia humanamente el pollo por dislocación cervical bajo anestesia general.
    Nota: Para estos procedimientos, el tiempo requerido para inducir lesiones microscópicas con cepas patógenas de C. perfringens fue 7 h.
  3. Con una hoja de bisturí #3, corte un cm 0,5 a sección de bucle largo de 1 cm y colocarla en formol al 10% para fijación durante la noche e histopatológicos más análisis.
  4. Con la misma hoja de bisturí, cortar la sección de bucle restante y colocar en un tubo de microcentrífuga estéril para el aislamiento de las cepas de C. perfringens en cada análisis bacteriológicos más lazo para su caracterización genética.
  5. Repita los pasos 7.2 y 7.3 para todos los bucles cambiando la hoja de bisturí entre cada lazo.

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Representative Results

Figura 1muestra un esquema de las asas intestinales 9 y 8 interloops. En este modelo, se crean un total de 9 circuitos y 8 interloops con ligaduras simples. Un bucle consiste en ligaduras proximales y distales, separadas por 2 cm de la ligadura proximal. Dos bucles adyacentes están separados por un interloop de 1 cm. Para disminuir el posible riesgo de contaminación cruzada entre bucles por la fuga de una ligadura, una ligadura interloop se coloca a medio camino de la ligadura distal y ligadura proximal de 2 bucles adyacentes. El número de bucles puede ser ajustado según los requerimientos del estudio.

Figure 1
Figura 1: representación esquemática de los lazos intestinales ligados. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figura 2A (Mancha HPS) muestra el aspecto microscópico de un asa intestinal inyectado con un medio de control estéril. El borde en cepillo mucosa está intacta y hay no hay necrosis presente en la sección. Congestión leve puede estar presente en las capas intestinales (mucosa, submucosa, muscular y serosa) de los segmentos. Figura 2B (Mancha HPS) muestra necrosis de la mucosa 7 horas después de la inyección de una cepa patógena de Clostridium perfringens se recuperó de un caso clínico de enteritis necrótica en una granja de pollos. Puntas de las vellosidades están erosionados con enterocitos necróticos alrededor de las puntas de las vellosidades. En el material necrótico que rodean las vellosidades, los racimos de bacterias barra-formadas grandes se observan (flechas). Estas bacterias más fueron identificadas como bacterias Gram-positivas con la mancha de Twort (no mostrada). Este hallazgo, combinado con el aislamiento por bacteriología de grandes cantidades de Clostridium perfringens, indica que las lesiones fueron causadas por esta bacteria. Figura 2 (Mancha HPS) muestra las lesiones histológicas de un asa isquémica, donde la necrosis no está relacionado con la inyección de patógeno C. perfringens cepas sino el resultado del mal ejecutado procedimientos. Este aumento muestra necrosis de coagulación grave que podría ser malinterpretada como las lesiones causadas por Clostridium perfringens. Sin embargo, no hay bacterias se observan en esta sección. También, los vasos sanguíneos en la capa muscular están severamente dilatados por la acumulación de grandes cantidades de eritrocitos degeneración (flechas). Esto es indicativo de la congestión vascular y en este caso, la congestión fue causada por vasos mesentéricos ligados. Lazos isquémicas pueden ser fácilmente identificados macroscópicamente durante los procedimientos quirúrgicos; congestión vascular severa, la serosa será azul oscuro en lugar del normal color rosa rojizo.

Figure 2
Figura 2: infección posterior de los resultados histopatológicos 7 h. (A) no hay lesiones necróticas en la mucosa en la histopatología, después de la inyección de cerebro corazón infusión (BHI), un medio de cultivo estéril. (B) en lazos inyectados con una cepa patógena de Clostridium perfringens, allí está marcada necrosis de la mucosa con numerosos grandes barra-formado bacterias grampositivas que cubre la mucosa. (C) lesiones isquémicas pueden asemejarse a las lesiones necróticas causadas por C. perfringens. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

En este estudio, los bucles se inyectaron con un medio de cultivo control estéril (BHI) o uno de las cinco diferentes cepas de Clostridium perfringens se recuperó de varias bandadas de pollo gratis antibióticos afectados o no a NE12 . Diez gallinas fueron utilizadas en este estudio. Patogenicidad de las cepas podría ser determinado basado en capacidad de causar varias veces lesiones compatibles con ne a la mucosa. Mientras que las cepas recuperadas de casos clínicos de la NE, mostró la capacidad de causar necrosis de la mucosa cepas de 7 h post-infección, recuperaron de granjas de pollo clínicamente sanos no indujo necrosis de la mucosa y la mucosa fue similar a la normal resultados de los lazos de control inyectados con BHI12. Mediante el uso de lazos numerosos en el mismo animal, cinco cepas de C. perfringens y cuatro lazos de control podrían utilizarse en el mismo pájaro.

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Discussion

Modelos de asas intestinales se han descrito en numerosas especies para estudiar la interacción huésped-patógeno y patogenia de las enfermedades causadas por varios patógenos intestinales, como Clostridium perfringens, Clostridium difficile y Enterica de las salmonelas7,9,13,14,15. También se ha utilizado para analizar la respuesta inmune mucosa16, la eficacia de los anticuerpos para neutralizar las toxinas bacterianas excretadas patógenos intestinales11 y para evaluar a los candidatos de vacunas para prevenir enfermedades intestinales10 . Sin embargo, este modelo con numerosos bucles ligados en un solo animal individual está pobremente descrito en pollos y estandarización de esta técnica es obligatoria para obtener resultados válidos como manipulaciones inadecuadas pueden conducir a malas interpretaciones y falsos . Este manuscrito muestra la creación de 9 sucesivos lazos ligados situados en el yeyuno y el íleon del tracto gastro-intestinal del pollo. Este estudio utilizó pollos machos de Free de patógeno específico (SPF) Livorno entre 1,0 y 1,2 kg de peso. El número máximo de lazos permitidos por esta raza en este peso era 9, puesto que 26 cm de intestino delgado podría ser fácilmente exteriorizada de la cavidad celómicas. No se excluye que mediante el uso de otra raza o un pollo macho de leghorn más pesado, el número total de bucles creados puede ser diferentes, incluso superior a 9. Longitud de los bucles intestinales también podría modificarse, pero la longitud de 2 cm se considera óptima para permitir la recogida de muestras para histopatología y bacteriología durante el uso de la capacidad máxima de la longitud intestinal disponible.

La técnica del asa intestinal ligados descrita en este artículo puede ser una valiosa alternativa a los modelos actuales disponibles para el estudio de la enteritis necrótica en pollos causada por Clostridium perfringens. Según los resultados descritos en un anterior artículo12, la evaluación de 5 cepas de C. perfringens con 10 pollos era suficiente para distinguir las cepas altamente virulentas y comensales de C. perfringens. En comparación, otros modelos de infección mediante inoculación por os reproducir enteritis necrótica con C. perfringens requieren un gran número de individuos para obtener los mismos resultados. En la literatura, el número de aves necesita para evaluar la virulencia de las gamas de cepas de C. perfringens de 10 a 30 pollos por grupo17,18,19 100 hosts por grupo20. En relación con el principio de refinamiento para el uso de animales en la investigación, se haría con la técnica que requiere el menor número de hosts para obtener resultados significativos. El modelo de asa intestinal ligados descrito en este artículo es probablemente el modelo que requiere el menor número de pollos para comparar la virulencia de las cepas de C. perfringens .

Dado que la contaminación por la fuga de una ligadura podría evaluarse sólo después de que C. perfringens cultura y caracterización por electroforesis del gel del campo (PFGE) pulsada muchos días después de los procedimientos, es de suma importancia para minimizar este riesgo mediante la inclusión de 1 cm interloops que contiene una ligadura interloop a medio camino entre 2 asas adyacentes. Tomando estas precauciones, era posible evitar una posible contaminación cruzada. De hecho, mientras que las cepas patógenas causaron microscópicas lesiones necróticas concordantes con enteritis necrótica, no se fueron significativas lesiones microscópicas en bucles adyacentes inyectados no patógenas las cepas de C. perfringens o el BHI cultura medio control negativo. Esto era indicativo de que diferentes cepas podrían ser inyectadas con seguridad en los bucles intestinales adyacentes del mismo pollo.

Uno de los temas más difíciles con este modelo era la exteriorización del intestino sin comprometer la ventilación y la vascularización intestinal. Las aves tienen un sistema respiratorio diferentes de mamíferos. El diafragma está ausente, y la ventilación es controlada por airsacs, estructuras de pared delgada en la cavidad abdominal. Hay 7 de estos en los pollos y se dividen en la cervical (1), anterior torácica (2), torácico posterior (2) y abdominales (2) sacos de aire. Estas estructuras de globo-como se conectan directamente a los pulmones y permitan la circulación de aire en las vías respiratorias. Al abrir la cavidad abdominal entre el esternón y cloaca, airsacs abdominales son prominentes y tienden a ser fácilmente roto, sobre todo si es seco. Por esta razón, es importante para facilitar la ventilación y anestesia durante los procedimientos humidificación constante con gasas humedecida con solución salina estéril. También, puede ser difícil evitar punciones pequeñas en la airsacs abdominal mientras exteriorizar los intestinos fuera de la cavidad abdominal. Es importante supervisar parámetros anestésicos, tales como la frecuencia respiratoria y patrón, reflejos palpebrales, frecuencia cardíaca y movimientos de la gallina, para asegurarse de que el pollo se queda en un plano adecuado de anestesia. Pequeña fuga de aire es menos probable que afectan a la calidad de la anestesia, pero esta salida debe ser minimizada. Es importante cerrar herméticamente el peritoneo después de los procedimientos. Esto será restablecer la presión del aire interior y ventilación volverá a la normalidad después de este paso. Tras el cierre de esta estructura, no debe haber ninguna fuga de aire desde el abdomen. Esto puede verificarse rociando una pequeña cantidad de solución salina estéril en las suturas y buscar aire indicando de burbuja formación procedente de la cavidad abdominal. Si esto sucede, las suturas de la piel simple adicionales pueden colocarse en el sitio de salida de aire.

Otro aspecto un desafío técnico se relaciona con el riesgo de lesiones isquémicas en el intestino delgado debido a procedimientos quirúrgicos mal ejecutados. La isquemia ocurre cuando hay una restricción del suministro de sangre a los tejidos, causando una escasez de oxígeno y otras moléculas necesarias para el metabolismo celular. En este caso, el intestino se convertirá rápidamente en macroscópico azul en lugar de color de rosa rojizo y las células de la mucosa intestinales se degeneran rápidamente. Esto puede causar lesiones isquémicas no relacionado con el patógeno inyectado e interfiera con la interpretación histopatológica. Dos situaciones problemáticas pueden llevar a isquemia. En primer lugar, la ligadura de los vasos mesentéricos por inadvertencia causa esta afección. Por esta razón, es crucial prestar atención a la colocación de las ligaduras a lo largo del tracto intestinal para evitar incluyendo los recipientes mesentéricos. En segundo lugar, la isquemia puede ocurrir producirse hemorragias de los vasos mesentéricos durante los procedimientos. Estas estructuras son frágiles y finas paredes. Una tensión excesiva puede conducir a su ruptura y al mismo tiempo manualmente exteriorizar el intestino, debe prestarse atención a la tensión en los recipientes mesentéricos para asegurar su integridad durante este paso. También, la hemorragia de los vasos mesentéricos puede ocurrir si éstos se pinchan con una aguja de sutura quirúrgica. El cirujano debe buscar cuidadosamente en el lugar perforado a través del mesenterio con la aguja. Sangrado se puede detener en ambas situaciones, pero el proceso de coagulación se detener o reducir significativamente el flujo de sangre a estos segmentos intestinales, por lo tanto, causando lesiones irreversibles y comprometer la validez de los resultados.

Este modelo es útil para el estudio de las interacciones huésped-patógeno y patogénesis de enfermedades intestinales causadas por agentes infecciosos. El modelo propuesto puede ser adaptado según el estudio cambiando el número de lazos creados o modificando la longitud de cada lazo. Antes de implementar dichos cambios, se recomienda estandarizar el método para obtener resultados significativos. Limitaciones de esta técnica están orientados a la habilidad y únicamente el personal debidamente capacitado debe realizar esta cirugía en animales vivos.

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Disclosures

Los autores no tienen nada que revelar.

Acknowledgments

Este trabajo fue financiado por la Cátedra de investigación de aves de corral (M. Boulianne) de la Facultad de medicina veterinaria de la Université de Montréal. Padres y los doctores Boulianne desarrollaron el modelo. Drs. Boulianne y padres realizaron las cirugías. El Dr. Burns ayudó a desarrollar el protocolo de anestesia. Dr. Parent había editado el video y escribió el manuscrito. DRS de Burns, Desrochers y Boulianne editan el manuscrito.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
EZ-Scrub 747 Becton Dickinson and Company 4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes 
Isopropyl alcohol 70% USP 4 L Commercial isopropyl alcohol P016IP70 Web address: http://www.comalc.com/products/
Chlorexidine Sigma-Aldrich 282227-1G Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&region=CA&gclid=EAIaIQ
obChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2Z
WQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE
Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration Veterinary Specialty Products 32724 Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog.
detail&productgroup_id=15
Scalpel blades #3 Swann-Morton 301 Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php
Sterile saline NaCl 0.9% Sigma-Aldrich S8776-100ML Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&region=CA
Vicryl 3-0 Ethicon D9003 Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture
Syringe 1 ml with 26G needle Becton Dickinson and Company 329652 Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes
Brain Heart Infusion Sigma-Aldrich 1104930500 Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&region=CA&cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1
Eppendorf tube Sigma-Aldrich T9661-500EA Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&region=CA&gclid=EAIaIQ
obChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh
30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE
Formalin solution, buffered neutral, 10% Sigma-Aldrich HT501128-4L Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&region=CA
Clostridium perfringens strains Université de Montréal, Chaire en recherche avicole N/A Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author

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