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Un modèle ligaturé anse intestinale chez les poulets gratuit anesthésiés pathogène spécifique pour étudier la Virulence de Clostridium Perfringens

Published: October 11, 2018 doi: 10.3791/57523

Eric Parent¹, Patrick Burns², André Desrochers¹, Martine Boulianne¹

¹Department of Clinical Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Université de Montréal, ²University of Bristol

Summary

Nous présentons ici un protocole pour créer chirurgicalement « anses intestinales ligaturées » dans l’intestin grêle de poulet. Cette procédure permet la comparaison de virulence in situ dans un seul hôte plusieurs des souches de Clostridium perfringens . Cette méthode diminue considérablement le nombre de poulets habituellement nécessaires pour in vivo des expériences similaires.

Abstract

Entérite nécrotique a été étudiée chez des poulets à l’aide de divers modèles d’infection in vivo . La plupart d'entre eux utilise une combinaison de facteurs prédisposants, comme la coccidiose et l’alimentation, avec gavage ou administration via le flux à l’aide de Clostridium perfringens. Dans ces modèles, la comparaison de plusieurs souches de c. perfringens pour études de virulence requiert un grand nombre d’hôtes à obtenir des résultats significatifs. Au cours de l’étude, la mortalité peut être élevée selon le modèle expérimental, donc soulevant des préoccupations éthiques concernant le bien-être des animaux dans la recherche. Le développement de nouveaux modèles d’infection nécessitant moins d’animaux pour étudier la pathogenèse, offrant encore des résultats statistiquement significatifs et valides, est important pour réduire l’utilisation des animaux en recherche. Anse intestinale de ligaturé modèles ont servi à étudier les infections clostridiales dans diverses espèces comme la souris, des lapins et des veaux. Suite à des interventions chirurgicales pour créer des segments de boucle ligaturés, les souches de c. perfringens sont injectés directement dans les boucles pour établir un contact étroit entre les bactéries et la muqueuse intestinale. Des échantillons de l’intestin grêle et le contenu luminal sont prises à la fin des procédures après quelques heures. Plusieurs souches bactériennes peuvent être inoculés dans chaque animal, ce qui réduira le nombre de matières obligatoires dans les expériences. En outre, les procédures sont effectuées sous anesthésie générale pour réduire la douleur animale. Chez les poulets, ce modèle serait plus approprié que l’administration orale de comparer la pathogénicité de la souche de c. perfringens car moins d’animaux sont nécessaires, aucun des facteurs prédisposants ne sont nécessaire pour provoquer la maladie et la douleur est contrôlée par des analgésiques . Le modèle de l’anse intestinale de ligaturé est mal décrit chez les poulets et normalisation est essentielle pour son utilisation optimale. Ce manuscrit fournit toutes les mesures nécessaires pour créer de nombreuses anses ligaturés intestinales chez les poulets et apporte des informations sur les points critiques pour obtenir des résultats similaires.

Introduction

L’utilisation de modèles animaux pour l’étude des maladies infectieuses affectant les humains et les animaux est un outil central dans l’évaluation des facteurs de virulence régulant la pathogenèse d’une condition spécifique, aussi bien quant à élaborer des stratégies pour prévenir ou guérir des maladies¹. Malgré les nombreux avantages de l’utilisation de modèles animaux pour étudier diverses maladies, les préoccupations éthiques concernant cette pratique sont présentent. Les chercheurs doivent minimiser l’utilisation des animaux tout en obtenant des résultats importants et valides. Le concept des 3 principes Rs (Replace, Reduce et affiner) a été élaboré pour s’assurer que les questions de bien-être ont été abordées dans ces essais. Dans les études de poulet d’entérite nécrotique, modèles in vivo de poulet sont utilisées pour enquêter sur l’étiologie, prévention et traitements de cette condition²^,³^,⁴^,⁵. Les souches pathogènes de c. perfringens porteurs de facteurs de virulence spécifique, tel que la toxine de NetB⁶, sont administrés pour provoquer l’entérite nécrotique en poulets⁷. Le principe de remplacement est donc difficile à réaliser dans ce cas, que ces facteurs de virulence n’est peut-être pas aussi critiques chez d’autres espèces animales. La plupart des modèles d’entérite nécrotique chez les poulets utilisent une combinaison de facteurs de risque comme la coccidiose et modifié le régime pour provoquer l’entérite nécrotique suivie par gavage du bouillon de culture contenant un grand nombre de c. perfringens². Ces modèles induira la maladie chez un grand nombre de poulets, et la mortalité peut être importante dans ces essais⁸, soulevant ainsi des préoccupations sur les principes de réduction et de raffinement dans la recherche sur les animaux.

Modèles de boucles ligaturé intestinaux sont une alternative souhaitable pour l’étude des maladies causées par des pathogènes intestinaux en ce qui concerne le principe de réduction et raffinement. Dans ces modèles, les segments intestinaux appelés « boucles » sont créés en plaçant des ligatures le long du tractus intestinal pour former des compartiments indépendants et hermétiques où les agents pathogènes peuvent être injectés seuls⁹ ou avec d’autres molécules, telles que des vaccins candidats ¹⁰ ^, ¹¹. les agents pathogènes d’intérêt sont placés en contact étroit avec les cellules intestinales et après quelques heures de temps de l’infection, des échantillons intestinaux peuvent être récupérés pour une analyse ultérieure. Ceci permet l’utilisation de multiples traitements et groupes témoins chez le même animal. Analyse statistique peut être effectuée avec des modèles de mesures répétées, qui augmente la capacité de discrimination entre les groupes et réduit le nombre de poulets nécessaires par rapport aux essais de gavage oral. Aussi, interventions chirurgicales et des fois une infection ultérieure sont effectuées sous anesthésie générale continue et l’analgésie, minimisant ainsi la douleur animale. Boucle fermée des trompes sont un modèle idéal pour réduire le nombre d’hôte et de créer un système plus humain dans la recherche sur les animaux.

Anses intestinales de ligaturé modèles sont bien décrites chez diverses espèces, comme les veaux, les lapins et les souris²^,⁹, mais mal décrit dans poulets⁷. Pour une utilisation optimale de ce modèle chirurgical, l’exécution et la technique appropriée sont essentielles pour la création des anses intestinales ligaturées à éviter tout dommage à l’intégrité intestinale. L’objectif de ce manuscrit est de décrire une méthode étape par étape dans la création de multiples anses intestinales dans un modèle de poulet. Cette technique est limitée par la compétence et l’expérience du chirurgien comme procédures précises sont essentielles pour la réussite du projet.

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Protocol

Toutes les procédures avec l’utilisation des animaux vivant ont été autorisés par le Comité d’éthique de la faculté de médecine vétérinaire, Université de Montréal (CÉUA, « Comité d » éthique de l’utilisation des Animaux »).

1. considérations avant la chirurgie

Sélectionnez 10 semaines agent pathogène spécifique gratuit (SPF) poulets leghorn pour la chirurgie.
Remarque : Leur poids doit être de 1,0 à 1,2 kg.
Retirer l’aliment 12 h avant les procédures pour vider l’intestin.
Avant la chirurgie, placer les poulets sous anesthésie générale selon un protocole vérifié par un anesthésiste. Premedicate chaque poulet 15 min avant la chirurgie avec une injection intramusculaire (IM) de midazolam 1 mg/kg et butorphanol 4 mg/kg. Répète, toutes les 4 h, l’injection de butorphanol 4 mg/kg IM ou quand les changements de modèle de respiration et la fréquence augmente pendant l’anesthésie. Pour l’anesthésie générale, au cours de toutes les procédures, administrer isoflurane à une concentration comprise entre 1,5 et 2,5 % avec un tube par voie intratrachéale.
Remarque : L’utilisation de prémédication pour la sédation et l’analgésie est recommandée car ils seront significativement améliorer la profondeur de l’anesthésie, réduire les quantités d’anesthésiques nécessaires au cours de toutes les procédures, ainsi que permettre aux chercheurs de contrôler les niveaux de douleur.
Surveiller l’anesthésie en enregistrant la température corporelle, rythme cardiaque et électrocardiogramme (ECG), respiratoire et du rythme, saturation en oxygène, expirée le dioxyde de carbone (CO₂) et les réflexes neurologiques.
Remarque : Une personne doit être assignée à surveiller ces paramètres tout au long de toutes les procédures.
Suivre les principes de la stérilité dans les interventions chirurgicales. Veiller à ce que le chirurgien et le chirurgien adjoint habillent avec des robes de chambre stériles, gants, un masque et des lunettes de protection conformément aux protocoles préopératoires institutionnels. Veiller à ce que le chirurgien frotte les mains avec une brosse stérile imprégnée de gluconate de chlorhexidine jusqu’au coude en mettant l’accent sur les ongles et la surface de chaque doigt.
Stériliser les instruments chirurgicaux avec un stérilisateur.

2. champ opératoire préparation

Tout d’abord, supprimez manuellement les plumes de l’abdomen avec une traction douce.
Frotter le site chirurgical avec chlorhexidine gluconate détergent imprégnés stérile pinceau. Frottez doucement la peau du centre vers l’extérieur pour un temps de contact total de 5 min sans revenir vers le centre.
Effectuer 3 passages alternatifs sur le site de la chirurgie avec une solution de gluconate de chlorhexidine et d’alcool isopropylique à l’aide de gaze stérile.
Remarque : Le passage doit commencer à partir du milieu du site chirurgical aux frontières pour éviter la contamination des zones non désinfectés au site chirurgical.
Placez le drapé chirurgical stérile sur le poulet.

3. extraction de l’intestin grêle de la cavité abdominale

Inciser le drapé chirurgical avec des ciseaux à exposer seulement la peau du site chirurgical.
Inciser la peau en effectuant une incision de basse-médiane forme '' L'' avec une lame de bistouri #3.
1. Commencez la première incision 1 cm caudale au sternum et à 1 cm crânienne pour le cloaque.
2. Inciser la deuxième perpendiculaire à la première incision. Démarrez à partir de l’extrémité caudale de la première incision et continuez 5 cm sur le côté gauche de l’abdomen en suivant la ligne de bassin.
  Remarque : Cette ouverture va créer un rabat qui permettra une extraction plus facile des intestins.
Avec la chirurgie, ciseaux, couper le péritoine et des muscles abdominaux avec le même motif de forme '' L'' pour ouvrir la cavité abdominale.
Remarque : Ceci exposera les sacs aériens. Intestins sont situées sous ces structures. Sacs aériens doit être humidifiés avec gazes imprégnées de stérile saline 0,85 % pour éviter la dessiccation et une rupture possible tout au long de la procédure.
Insérer un pied de nez spay accrocher dans la cavité abdominale en suivant la paroi abdominale gauche et travailler le moyen de contourner les sacs aériens abdominaux.
Doucement, extérioriser les intestins et ces étalée sur le champ opératoire.
Remarque : Conservez les intestins humidifiés par pulvérisation souvent stérile saline 0,9 % dans l’ensemble de la procédure. En outre, gazes humidifiés avec du sérum physiologique stérile peuvent être placés sur les intestins pour éviter la dessiccation.
Prenez les intestins à l’aide d’une gaze stérile sèche et retirez doucement l’intestin grêle par traction manuelle pour exposer le jéjunum.
NOTE : Les vaisseaux mésentériques est fragiles et une tension excessive peut entraîner une rupture qui peut entraîner des lésions ischémiques intestinales et grandement compromettre l’issue de la procédure.

4. fabrication des anses intestinales

Création de boucle n ° 1.
1. Placer une ligature simple avec un matériau résorbable synthétique multifilament de polyglactin dans le jéjunum proximal en évitant la ligature des principaux vaisseaux mésentériques.
2. Placer une ligature distale 2 cm de la ligature proximale.
  NOTE : Ligatures Simple faits avec le matériel de suture multifilament sont placés le long du tractus intestinal pour créer des segments hermétiques. Un schéma (Figure 1) décrit l’emplacement de toutes les ligatures. Les boucles se composent d’une ligature proximale et distale, séparée par 2 cm.
Création d’interloop n ° 1.
1. Placer une ligature simple 0,5 cm aborally à la ligature distale de boucle n ° 1.
  Remarque : Entre les boucles successives, il y a interloops de 1 cm, c'est-à-dire des segments qui une séparation physique entre les boucles. Pour probablement diminuer le risque de contamination croisée d’une boucle à l’autre, une ligature simple est placée au milieu de l’interloop (0,5 cm de la ligature distale et proximale de 2 boucles adjacentes). Cela réduit le risque d’un contaminant de fuite éventuelle d’une boucle de rejoindre la ligature d’une boucle adjacente. Ces segments ne sont pas obligatoires, mais diminueront le risque de contamination croisée.
Création de boucles ultérieures et interloops.
1. Répétez les étapes 4.1 et 4.2 pour obtenir le nombre de lignes souhaités.
  Remarque : Dans cette expérience, 9 boucles et 8 interloops ont été créés. Longueur totale s’élevait à 26 cm. Le nombre de lignes peut être ajusté selon l’étude.

5. injection de souches de Clostridium perfringens dans the Loops

Injecter avec une seringue stérile et une aiguille 26 G l’agent pathogène en boucle n ° 1. Insérer délicatement l’aiguille sur le côté antimesenteric de l’intestin à un angle de 45°.
Remarque : Dans cette expérience, 0,2 mL de coeur-cervelle (BHI) contenant 1 x 10⁶ UFC (unités formant colonies) de c. perfringens dans la phase de croissance logarithmique a été injecté dans chaque boucle. 5 différentes souches ont été injectés dans les 5 boucles différentes et les 4 autres boucles ont été injectés avec un contrôle négatif ne contenant aucune bactérie (BHI stérile), alternant des pathogènes et des boucles BHI stériles.
Répétez l’étape 5.1 à injecter toutes les boucles.
Doucement, remplacer le tractus intestinal dans la région dorsale de la cavité abdominale, sous les sacs aériens.

6. fermeture de la cavité abdominale

La suture du péritoine et des muscles abdominaux.
1. Avec un motif simple suture continu à l’aide d’un matériau résorbable synthétique multifilament de polyglactin de suture du péritoine et des muscles abdominaux le long du bassin (effectuée à l’étape 3.3).
2. Suture du péritoine et des muscles abdominaux du sternum pour le cloaque (effectuée à l’étape 3.3. avec un motif simple suture continu à l’aide d’un matériau résorbable synthétique multifilament de polyglactin.
La suture de la peau.
1. À l’aide d’un matériau synthétique multifilament polyglactin et un motif simple suture continue, refermer l’incision de la peau le long du bassin effectuée à l’étape 3.2.
2. En utilisant le même matériau de ligature multifilament et un motif simple suture continue, refermer l’incision de la peau du sternum à la fait à l’étape 3.2 du cloaque.

7. conclusion

Après les interventions chirurgicales, garder le poulet sous anesthésie générale avec l’utilisation adéquate des analgésiques pour minimiser la douleur animale pendant la durée de l’infection. Poursuivre la surveillance anesthésique pour assurer un niveau adéquat de l’anesthésie.
Après l’heure souhaitée de l’infection, humainement euthanasier le poulet par dislocation cervicale sous anesthésie générale.
Remarque : Pour ces procédures, le temps nécessaire pour induire des lésions microscopiques avec des souches pathogènes de c. perfringens a 7 h.
Avec une lame de bistouri #3, couper un 0,5 cm section longue boucle de 1 cm et le placer dans 10 % de formol pour analyse pendant la nuit et encore histopathologiques de fixation.
Avec la même lame de bistouri Swann-Morton, couper la partie restante de la boucle et le placer dans un tube de microcentrifuge stérile pour l’isolement des souches de c. perfringens dans chaque analyse bactériologique plus de boucle pour leur caractérisation génétique.
Répétez les étapes 7.2 et 7.3 pour toutes les boucles en changeant la lame de bistouri entre chaque boucle.

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Representative Results

Un schéma de l’anses intestinales 9 et 8 interloops est illustré à la Figure 1. Dans ce modèle, un total de 9 boucles et 8 interloops sont créés avec des ligatures simples. Une boucle se compose de proximales et distales des ligatures espacées de 2 cm à partir de la ligature proximale. Deux boucles adjacents sont séparés par un interloop de 1 cm. Pour diminuer le risque de contamination croisée entre les boucles par la fuite d’une ligature, une ligature interloop est placé à mi-chemin de la ligature distale et proximale ligature de 2 boucles adjacentes. Le nombre de lignes peut être ajusté selon les besoins de l’étude.

Figure 1 : représentation schématique des anses intestinales ligaturées. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.

Figure 2 a (Tache HPS) montre l’aspect microscopique de l’anse intestinale injecté avec un milieu stérile de contrôle. La bordure en brosse muqueux est intacte et il n’y a aucune nécrose présente dans la section. Congestion légère peut être présente dans les couches intestinales (muqueuse, sous-muqueuse, musculeuse et la séreuse) des segments. Figure 2 b (Tache HPS) montre une nécrose muqueuse 7 heures après l’injection d’une souche pathogène de Clostridium perfringens provenant d’un cas clinique d’entérite nécrotique sur un élevage de poulets. Conseils de villosités sont érodées avec des entérocytes nécrotiques entourant les pointes de villosités. Dans le matériel nécrotique entourant les villosités, grappes de grandes bactéries en forme de tige sont observées (flèches). Ces bactéries ont été jugées plus de bactéries Gram-positives avec tache d’un Twort (non illustré). Ce constat, combiné avec l’isolement de bactériologie d’un grand nombre de Clostridium perfringens, indique que les lésions ont été causées par cette bactérie. Figure 2 (Tache HPS) montre des lésions histologiques d’une boucle ischémique, où la nécrose n’est pas liée à l’injection de pathogènes c. perfringens souches, mais le résultat du mal exécuté les procédures. Cet agrandissement montre une nécrose de coagulation sévères qui puisse être interprétés à tort comme des lésions causées par Clostridium perfringens. Toutefois, aucune bactérie n’est observées dans cette section. En outre, les vaisseaux sanguins dans la couche musculaire sont sévèrement dilatés par l’accumulation d’un grand nombre d’érythrocytes dégénérescentes (flèches). C’est révélateur de la congestion vasculaire et dans ce cas, la congestion a été causée par des vaisseaux sanguins mésentériques ligaturés. Ischémiques boucles peuvent être facilement identifiés macroscopiquement pendant les interventions chirurgicales ; la congestion vasculaire sévère, la séreuse sera bleu foncé au lieu de sa coloration normale de la rose-rougeâtre.

Figure 2 : constatations histopathologiques 7 h après l’infection. (A) il n’y a aucuns lésions nécrotiques dans la muqueuse sur l’histopathologie après l’injection du cerveau coeur Infusion (BHI), un milieu de culture stérile. (B) dans les boucles injectés avec une souche pathogène de Clostridium perfringens, il est marqué nécrose de la muqueuse avec nombreuses grandes bactéries Gram positif en forme de bâtonnet couvrant la muqueuse. (C) les lésions ischémiques peuvent ressembler à des lésions nécrotiques causées par c. perfringens. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.

Dans cette étude, les boucles ont été injectés avec un milieu de culture témoin stérile (BHI) ou l’une des cinq différentes souches de Clostridium perfringens récupérés de divers antibiotiques poulet gratuit troupeaux touchés ou non avec l’entérite nécrotique¹². Dix poulets ont été utilisées dans cette étude. Pathogénicité des souches pourrait être déterminée basé sur la capacité à plusieurs reprises provoque des lésions compatibles avec l’entérite nécrotique de la muqueuse. Tandis qu’extraits des cas cliniques d’une entérite nécrotique a montré la capacité de provoquer une nécrose muqueuse des souches 7 h après l’infection, les souches extraite des élevages de poulets cliniquement sains n’induisent pas de nécrose muqueuse et la muqueuse était semblable à la normale résultats de la boucle de contrôle injecté avec BHI¹². Grâce aux nombreuses boucles chez le même animal, les cinq souches de c. perfringens et quatre boucles de contrôle pourraient servir dans le même oiseau.

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Discussion

Modèles d’anses intestinales ont été décrites chez de nombreuses espèces d’étudier l’interaction hôte-pathogène et la pathogenèse des maladies causées par différents agents pathogènes intestinaux, comme les Clostridium perfringens, Clostridium difficile et Salmonella enterica⁷^,⁹^,¹³^,¹⁴^,¹⁵. Il a également été utilisé pour analyser la réponse immunitaire muqueuse¹⁶, l’efficacité des anticorps pour neutraliser les toxines bactériennes excrétés par les pathogènes intestinaux¹¹ et d’évaluer les candidats vaccins pour prévenir les maladies intestinales¹⁰. Toutefois, ce modèle à l’aide de nombreuses boucles ligaturés en un seul animal individuel est mal décrit chez les poulets et standardisation de cette technique est obligatoire pour l’obtention de résultats valides comme des manipulations inadéquates peuvent conduire à des interprétations erronées et de faux résultats . Ce manuscrit montre la création de 9 boucles ligaturés successifs, situé dans le jéjunum et l’iléon du tractus gastro-intestinal de poulet. Cette étude utilise des poulets mâles spécifiques pathogène gratuit (SPF) leghorn, pesant entre 1,0 et 1,2 kg. Le nombre maximal de lignes autorisées par cette race à ce poids était de 9, étant donné que 26 cm d’intestin grêle pourrait facilement être extériorisée de la cavité coelomique. Il n’est pas exclu qu’à l’aide d’une autre race ou un poulet mâle plus lourd de Livourne, le nombre total de lignes créé peut être différente, même supérieur à 9. Longueur des anses intestinales pourrait aussi être modifiée, mais la longueur de 2 cm a été considéré comme optimale pour permettre le prélèvement d’échantillons pour l’histopathologie et bactériologie tout en utilisant la capacité maximale de la longueur disponible intestinale.

La technique de boucle ligaturé intestinale décrite dans cet article peut être une alternative intéressante aux modèles actuels disponibles afin d’étudier l’entérite nécrotique chez les poulets causée par Clostridium perfringens. Selon les résultats décrits dans un précédent article¹², l’évaluation des 5 souches de c. perfringens avec 10 poulets suffisait différencier les souches très virulentes et commensales de c. perfringens. En comparaison, les autres modèles d’infection à l’aide par l’os de l’inoculation de reproduire une entérite nécrotique avec c. perfringens nécessitera un grand nombre d’individus pour obtenir les mêmes résultats. Dans la littérature, le nombre d’oiseaux nécessaires pour évaluer la virulence des gammes de souches de c. perfringens de 10 à 30 poulets par groupe¹⁷^,¹⁸^,¹⁹ pour une centaine d’hôtes par groupe de²⁰. En ce qui concerne le principe de raffinement pour l’utilisation des animaux en recherche, il feraient d’utiliser la technique nécessitant le plus petit nombre d’hôtes à obtenir des résultats significatifs. Le modèle de l’anse intestinale de ligaturé décrit dans cet article est probablement le modèle exigeant le nombre le plus bas des poulets pour comparer la virulence des souches de c. perfringens .

Étant donné que la contamination croisée par la fuite d’une ligature pourrait être évaluée qu’après que culture de c. perfringens et caractérisation par pulsé électrophorèse en champ (ECP) plusieurs jours après les procédures, il était primordial de minimiser ce risque en incluant 1 cm interloops contenant à mi-chemin entre les 2 boucles adjacentes une ligature interloop. En prenant ces précautions, il était possible d’éviter une possible contamination croisée. En effet, alors que les souches pathogènes causent des lésions nécrotiques microscopiques concordantes avec l’entérite nécrotique, il n’étaient aucuns importantes lésions microscopiques en boucles adjacentes, injectés avec non pathogène des souches de c. perfringens ou le BHI culture moyen contrôle négatif. Ceci témoignait que différentes souches pourraient être injectés en toute sécurité dans des anses intestinales adjacentes de la même poule.

Une des questions plus difficiles avec ce modèle est l’extériorisation de l’intestin grêle sans compromettre la ventilation et la vascularisation intestinale. Les oiseaux ont un système respiratoire différent que les mammifères. Le diaphragme est absent, et la ventilation est contrôlée par entourent, structures à parois minces dans la cavité abdominale. Il y a 7 d'entre eux chez les poulets et les répartir dans le col de l’utérus (1), thoracique antérieure (2), thoracique postérieure (2) et abdominales (2) des sacs aériens. Ces structures ressemblant à des ballons sont connectés directement aux poumons et permettant la circulation d’air dans les voies respiratoires. Lors de l’ouverture de la cavité abdominale entre le sternum et le cloaque, entourent abdominale prédominent et ont tendance à se rompre facilement, surtout si elle est sèche. Pour cette raison, une humidification constante avec des gazes humecté avec une solution saline stérile est importante afin de faciliter une bonne ventilation et une anesthésie au cours de procédures. En outre, il peut être difficile d’éviter les petites perforations dans l’abdomen entourent tandis que l’extériorisation de l’intestin dans la cavité abdominale. Il est important de surveiller les paramètres anesthésiques tels que la fréquence respiratoire et modèle, réflexes palpébrales, fréquence cardiaque et les mouvements de poulet, pour s’assurer que le poulet reste sous un plan adéquat de l’anesthésie. Petite fuite d’air est moins susceptible d’affecter la qualité de l’anesthésie, mais cette fuite doit être réduits au minimum. Il est important de fermer hermétiquement le péritoine après les procédures. Cela va rétablir la pression d’air interne et ventilation reviendra à la normale après cette étape. Après la fermeture de cette structure, il ne devrait y avoir aucune fuite d’air dans l’abdomen. Cela peut être vérifié en pulvérisant une petite quantité de sérum physiologique sur les sutures et recherchez bulle formation indiquant air provenant de la cavité abdominale. Dans ce cas, les sutures de peau simple supplémentaire peuvent être placés sur le site de fuites d’air.

Un autre aspect techniquement difficile est lié au risque de lésions ischémiques développe dans l’intestin grêle due à des interventions chirurgicales mal exécutées. L’ischémie survient quand il y une restriction de la circulation sanguine vers les tissus, provoquant une pénurie d’oxygène et d’autres molécules nécessaires pour le métabolisme cellulaire. Dans ce cas, l’intestin deviendra rapidement macroscopiquement bleu au lieu de rose-rougeâtre et les cellules de la muqueuse intestinales vont rapidement dégénérer. Cela entraînera des lésions ischémiques non liées à l’agent pathogène injecté et il n’interférera pas avec l’interprétation histopathologique. Deux situations problématiques peuvent conduire à une ischémie. Tout d’abord, la ligature des vaisseaux mésentériques par inadvertance provoquera cette condition. Pour cette raison, il est essentiel d’examiner attentivement le placement des ligatures le long du tractus intestinal afin d’éviter notamment les vaisseaux mésentériques. Deuxièmement, ischémie peut se produire si des vaisseaux mésentériques, les hémorragies se produisent pendant les procédures. Ces structures sont mince paroi et fragile. Une tension excessive peut conduire à leur rupture et alors que l’extériorisation manuellement les intestins, une attention particulière à la tension sur les vaisseaux mésentériques pour assurer leur intégrité au cours de cette étape. En outre, hémorragie des vaisseaux mésentériques peut se produire si ceux-ci sont perforés avec une aiguille à suture chirurgicale. Le chirurgien doit examiner attentivement l’emplacement percé à travers le mésentère avec l’aiguille. Les saignements peuvent être enrayés dans les deux situations, mais le processus de coagulation va arrêter ou réduire de façon significative la circulation du sang à ces segments intestinaux, d'où provoquant des lésions irréversibles et compromettre la validité des résultats.

Ce modèle est utile pour l’étude des interactions hôte-pathogène et la pathogenèse des maladies intestinales causées par des agents infectieux. Le modèle proposé peut être adapté selon l’étude, en changeant le nombre de boucles créées ou en modifiant la longueur de chaque boucle. Avant d’implémenter ces changements, il est recommandé de normaliser la méthode pour garantir des résultats significatifs. Les limites de cette technique sont axées sur les compétences et seul le personnel qualifié doit effectuer cette chirurgie sur des animaux vivants.

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Disclosures

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Acknowledgments

Ce travail a été soutenu par la Chair in Poultry Research (M. Boulianne) de la faculté de médecine vétérinaire de l’Université de Montréal. Les Drs Boulianne et Parent a développé le modèle. Drs Boulianne et Parent effectué les interventions chirurgicales. M. Burns a aidé à élaborer le protocole d’anesthésie. M. Parent a édité la vidéo et a écrit le manuscrit. Drs Burns, Desrochers et Boulianne édition le manuscrit.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
EZ-Scrub 747	Becton Dickinson and Company		4% chlorhexidine gluconate detergent impregnated sterile brush. No catalog number available. Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/infection-prevention/surgical-hand-scrubs/ez-scrub-preoperative-surgical-scrub-brushes
Isopropyl alcohol 70% USP 4 L	Commercial isopropyl alcohol	P016IP70	Web address: http://www.comalc.com/products/
Chlorexidine	Sigma-Aldrich	282227-1G	Chlorhexidine gluconate solution, must be diluted to 4%. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/282227?lang=fr&region=CA&gclid=EAIaIQ obChMI8vHr4_OY1wIV3rrACh2Z WQKuEAAYAiAAEgLKx_D_BwE
Surgical Drape Small (27 inch x 24 inch) with 3 x 6 inch Fenestration	Veterinary Specialty Products	32724	Web address: http://www.vetspecialtyproducts.com/index.cfm?fuseaction=ecommercecatalog. detail&productgroup_id=15
Scalpel blades #3	Swann-Morton	301	Web address: https://www.swann-morton.com/product/16.php
Sterile saline NaCl 0.9%	Sigma-Aldrich	S8776-100ML	Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s8776?lang=fr&region=CA
Vicryl 3-0	Ethicon	D9003	Polyglactin multifilament absorbable suture material. Web address: http://www.ethicon.com/healthcare-professionals/products/wound-closure/absorbable-sutures/coated-vicryl-polyglactin-910-suture
Syringe 1 ml with 26G needle	Becton Dickinson and Company	329652	Web address: https://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/diabetes-care/insulin-syringes/bd-1-ml-conventional-insulin-syringes
Brain Heart Infusion	Sigma-Aldrich	1104930500	Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/mm/110493?lang=fr&region=CA&cm_sp=Insite-_-prodRecCold_xorders-_-prodRecCold2-1
Eppendorf tube	Sigma-Aldrich	T9661-500EA	Microcentrifuge tube. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t9661?lang=fr&region=CA&gclid=EAIaIQ obChMI-YizzfiY1wIVRkCGCh 30SQjuEAAYAiAAEgLK5fD_BwE
Formalin solution, buffered neutral, 10%	Sigma-Aldrich	HT501128-4L	Ratio tissue : formalin of 1: 10 for adequate fixation. Web address: http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht501128?lang=fr&region=CA
Clostridium perfringens strains	Université de Montréal, Chaire en recherche avicole	N/A	Specific to each laboratory, available upon request to correspondant author

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References

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Parent, E., Burns, P., Desrochers, A., Boulianne, M. A Ligated Intestinal Loop Model in Anesthetized Specific Pathogen Free Chickens to Study Clostridium Perfringens Virulence. J. Vis. Exp. (140), e57523, doi:10.3791/57523 (2018).

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