An in vivo Østrogenmangel Mouse modell for screening eksogene østrogen behandlinger av kardiovaskulær dysfunksjon etter overgangsalder

Biochemistry

Your institution must subscribe to JoVE's Biochemistry section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Klinisk, Østrogenmangel i overgangsalderen kvinner kan forverre forekomsten av lipid forstyrrelser og aterosklerose. Vi etablerte en in vivo østrogen-mangel modell av bilaterale ovarieektomi via en dobbel rygg-lateral snitt i apoE-/- mus. Musa modellen gjelder for screening eksogene østrogenbehandling av kardiovaskulær dysfunksjon etter overgangsalderen.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Sun, B., Yin, Y. z., Xiao, J. An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause. J. Vis. Exp. (150), e59536, doi:10.3791/59536 (2019).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Postmenopausale kvinner har større risiko for å utvikle hjerte-og karsykdommer enn premenopausale kvinner. Kvinnelige mus ovariectomized (OVX) på avvenning vise økt aterosklerotiske lesjoner i aorta sammenlignet med kvinnelige mus med intakt eggstokkene funksjon. Men, laboratorie modeller som involverer østrogen-mangelfull mus med aterosklerose utsatt status mangler. Dette underskuddet er avgjørende fordi klinisk Østrogenmangel i overgangsalderen kvinner kan forverre forekomsten av pre-eksisterende eller pågående lipid avbrudd og aterosklerose. I denne studien etablerer vi en in vivo østrogen-mangelfull musemodell av bilaterale ovarieektomi via en dobbel rygg-lateral snitt i Apolipoprotein E (apoE)-/- mus. Deretter sammenligner vi effekten av 17β-østradiol og pseudoprotodioscin (PPD) (en phytoestrogen) perorally administrert via hasselnøtt spredning. Vi finner at selv om PPD utøver en viss effekt på å redusere den endelige kroppsvekten og plasma TG i OVX apoE-/- mus, har den anti-aterosklerotiske og CARDIAC-beskyttende kapasitet sammenlignbare med sin 17β-østradiol motstykke. PPD er en phytoestrogen som har blitt rapportert å utøve anti-tumor egenskaper. Dermed er den foreslåtte metoden gjelder for screening fytoøstrogener via peroral administrasjon til erstatning for tradisjonelle Hormone erstatning terapi i postmenopausale kvinner, som har blitt rapportert å ha potensielt skadelige tumorigenetic Kapasitet. Peroral administrasjon via hasselnøtt spredning er ikke-invasiv, slik at den kan brukes mye for mange pasienter. Denne artikkelen inneholder trinn-for-trinn demonstrasjon av bilaterale ovarieektomi via dobbel rygg-lateral snitt i apoE-/- mus og peroral 17β-østradiol eller phytoestrogen hormon erstatning via hasselnøtt spredt. Plasma lipid og hjerte-funksjon analyser ved hjelp ekkokardiografi følge.

Introduction

Epidemiologiske og kliniske studier har vist at postmenopausale kvinner er betydelig større risiko for hjerte-og karsykdommer enn premenopausale kvinner1,2. Hormone erstatning terapi (HRT) kan redusere den relative risikoen for hjerte-og karsykdommer til 0.37-0.793. Blant andre komplikasjoner, aterosklerose forårsaket av kardiovaskulære sykdommer er den ledende dødsårsaken over hele verden4. Men, laboratorie modeller som involverer østrogen-mangelfull mus presentere aterosklerose utsatt status mangler. Denne protokollen gir en in vivo Østrogenmangel mus modell for screening eksogene østrogenbehandling av kardiovaskulær dysfunksjon etter overgangsalderen.

Tidligere studier viser at anvendelsen av OVX i aterosklerotiske gnagere matet en høy-kolesterol diett kan etterligne postmenopausale kvinner lider av åreforkalkning5,6,7,8. En reproduserbar og praktisk dyremodell som likner den aterosklerotiske staten i overgangsalderen kvinner er grunnlaget for eksogene østrogen forskning. Her ble en dobbel rygg-lateral snitt av bilaterale ovarieektomi brukt i aterosklerose utsatt Apolipoprotein E knockout (apoE-/-) mus9,10. Sammenlignet med midtre buk eller rygg snitt, dobbel rygg-lateral snitt er en enklere, mindre tidkrevende metode som kan unngå alvorlig abdominal hulrom vedheft og betennelse. Peroral administrering via hasselnøtt spredning (se tabell over materialer) er ikke-invasiv og praktisk, slik at den kan brukes som en langsiktig administrasjonsmodus11. Pellet-implantat med langsom utløsning er også populært6. Implantater mayaggravate imidlertid forekomsten av infeksjon, spesielt hos mus som utsettes for OVX. Andre ikke-invasive administrasjons moduser, som oral gavage og vann administrasjon, har også mange ulemper. Oral gavage vanligvis stress mus og kan forårsake esophageal skade. Administrering av hormonet via drikkevann er svært gunstig; Men, er å legge til DMSO som en emulgator uunngåelig som eksogene østrogen er uløselig i vann. Her valgte vi peroral 17β-østradiol eller phytoestrogen hormon erstatning via hasselnøtt spredt for langsiktig administrasjon.

Nylig har den gunstige effekten av HRT på det kardiovaskulære systemet av postmenopausale kvinner vært omstridt i kvinners helse initiativ (WHI) prøvelser12. På den ene side, eksogene østrogen alene utøver en gunstig effekt på det kardiovaskulære systemet; på den annen side, det kan kombineres med metohydroxyprogesterone acetate å øke risikoen for kardiovaskulære hendelser. Mer alvorlig, HRT kan føre til bryst og livmor tumorprogresjon, og denne effekten har markert begrenset bruken13,14. Mer interesse har vært fokusert på det kardiovaskulære-beskyttende effekter av eksogene østrogen mangler mitotisk aktivitet i tumorceller15,16,17. Flere studier hos mennesker og dyr tyder på at fytoøstrogener med strukturer som ligner på østrogen kan spille en gunstig rolle i kardiovaskulær beskyttelse15,18.

Dermed er målene for dagens arbeid (i) for å bygge en in vivo Østrogenmangel mus modell av bilaterale ovarieektomi via en dobbel rygg-lateral snitt i apoE-/- mus og (II) for å sammenligne den kardiovaskulære beskyttende effekten av perorally administrert 17β-østradiol og pseudoprotodioscin (PPD), via hasselnøtt spredt. 17β-østradiol er en slags eksogene østrogen som tilhører kvinnelige seksuelle hormoner6,11,19. PPD, et steroid saponin og phytoestrogen fra dioscorea planter, har tidligere blitt rapportert å utøve anti-tumor egenskaper20.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle dyr bekymre og eksperimentelle protokoller var anerkjent av det institusjonell dyr bekymre og bruk komité av det kinesiske akademiet av legeundersøkelse vitenskap og Peking forening legeundersøkelse universitet (tillatelse nei.: SYXK (Beijing) 2013-0023). Opprinnelsen til apoE-/- mus er C57BL/6J9,10.

1. bilateral Ovarieektomi via en dobbel rygg-lateral snitt i apoE-/- mus

  1. På avvenning (alder 28 dager), bedøve kvinnelige apoE-/- C57BL/6J mus med avertin (tribromoethanol; 200 mg/kg; intraperitonealt).
    Merk: 32 apoE-/- mus ble tilfeldig delt inn i 4 grupper: SHAM, OVX, OVX/E2 og OVX/PPD-gruppe (n = 8 per gruppe).
  2. Plasser dyret i liggende posisjon på en varmepute. Påfør øye smøremiddel for øyebeskyttelse under anestesi.
  3. Oppretthold kroppstemperaturen innenfor 36 ± 0,5 ° c. Administrer 5 mg/kg kroppsvekt av smertestillende karprofen subkutant til side aspektet ved muse nakken.
  4. Barbere en 3 x 5 cm2 muse området cephalic fra iliaca Crest. Før dekker dyret med en 3 x 5 cm2 blenderåpning kirurgisk ark, rengjøre barberte området grundig med jod og deretter 70% etanol. Bruk sterile instrumenter og hansker under eksperimentet.
  5. Bruk saks og tang for å gjøre et snitt 1 cm lateral til midtlinjen og 1 cm lateral til Costal ribbeina.
  6. Rett ut analysere subkutan vev ved hjelp av tang.
  7. Bruk dissekere vernebriller (se tabell over materialer) for å identifisere det hvite fettvevet i bukhulen.
  8. Bruk microscissors og microforceps å lage en 0,5-1 cm snitt gjennom konseptet til bukhulen er nådd.
    Merk: For humbug-opererte gruppen, lukke sårene direkte. Sutur muskellaget og huden separat ved hjelp av en monofilament Sutur.
  9. Når det hvite fettvevet i bukhulen kan sees, grip fettvevet ved hjelp av microforceps og trekk den forsiktig ut. En rosa Mulberry-formet eggstokk innpakket av fettvev i bukhulen kan sees.
  10. Ombinde 0,5-1 cm proksimale fartøy og livmor Hornet ved hjelp av en monofilament Sutur. Fjern eggstokken ved hjelp av microscissors, og plasser det resterende vevet tilbake i bukhulen.
    Merk: De viktigste negative symptomene for OVX operasjonen er urinleder ligation som fører til høy dødelighet i OVX-opererte mus. Dette kan unngås ved å identifisere vev ved hjelp av en dissekere stirre.
  11. Steng sårene. Sutur muskellaget og huden separat ved hjelp av en monofilament Sutur.
  12. Bruk saks og tang for å gjøre et annet snitt 1 cm lateral til midtlinjen og 1 cm lateral til Costal ribbeina på den andre siden. Gjenta fremgangsmåten ovenfor (1,5 til 1,11).
  13. La dyret våkne fra anestesi. Separat holde musen på den første dagen etter operasjonen.
  14. Rengjør eller bytt ut buret ofte under gjenopprettings fasen.
  15. Ca 24 h etter operasjonen, administrere en annen 5 mg/kg kroppsvekt av smertestillende karprofen subkutant.

2. peroral administrasjon av 17β-østradiol eller PPD via hasselnøtt Spread

  1. Grundig oppløse 17β-østradiol eller PPD i sesamfrø olje, og deretter blande sesam olje med hasselnøtt spredt (se tabell over materialer). En daglig porsjon for hver 30 g mus inneholder 3 μg av 17β-østradiol eller 15 μg av PPD, 4 μL av sesamfrø olje og 60 mg hasselnøtt spredt. Forbered en placebo for hver 30 g musen inneholder 4 μL av sesamfrø olje og 60 mg av hasselnøtt spredt.
    Merk: Den daglige administrasjonsdelen av 17β-østradiol eller PPD-en var basert på tidligere studier6,11 og foreløpige eksperimenter.
  2. En uke etter OVX, fôrer mus med høy kolesterol diett (1,25% kolesterol, 0% cholate) i 12 uker. En typisk eksperimentell behandling ordningen, som brukes i denne studien, er illustrert i figur 1.
  3. 5 dager før peroral administrasjon av hasselnøtt spredt på uke 4, tog musene å spise placebo som inneholder ca 30 mg hasselnøtt spredt for 2-5 mus i 5 dager. Tren musene i grupper i deres hjem bur i løpet av de første 3 dagene. Plasser mus i separate bur på den fjerde og femte dager med trening og tjene den daglige delen til å ligne den eksperimentelle situasjonen.
  4. I løpet av de siste 9 ukene, plassere mus i separate bur og deretter tjene en daglig del av hasselnøtt spredt del for hver fôring anledning.
    Merk: Serve en daglig porsjon som inneholder 17β-østradiol (0,1 mg · kg-1) eller PPD (0,5 mg · kg-1) via hasselnøtt spredt i OVX/E2 og OVX/PPD-gruppe henholdsvis; serverer en daglig porsjon som inneholder hormon-fri hasselnøtt spredt i SHAM og OVX gruppe.

3. fastsettelse av intima-medie tykkelse og hjerte dysfunksjon ved hjelp av et Microultrasound system

  1. Ultrasonografisk biomikroskopi
    1. En dag før oppsigelsen undersøker du intima-tykkelsen og hjerte dysfunksjon ved hjelp av et microultrasound system (se tabell over materialer) som tidligere beskrevet21.
    2. Før eksamen, gi hver mus en 200 mg/kg intraperitoneal injeksjon av avertin (tribromoethanol) som anestesi (n = 8 mus per gruppe).
    3. Barbere halsen håret av hver mus nøye. Påfør varmt ultralyd overføring gel rikelig for å sikre optimal bildekvalitet.
    4. Få tak i Baseline-ultrasonografisk bilder av aorta roten og stigende aorta med skannehodet på 30 MHz ved et 12,7 mm fokus og en oppløsning på 40 μm.
    5. Bruk elektrokardiografi med en Lead II-konfigurasjon for overvåking.
    6. Fang høyre parasternal lang-akse bilder av stigende aorta, aorta buen, og truncus brachiocephalicus arterien gren i ett plan i Systolen (Figur 3).
  2. Målinger av intima og maksimal plakk tykkelse
    1. Juster avstanden mellom svingeren og arterie området lett for å få klare bilder.
    2. Lagre en 10 s Cine loop digitalt for offline undersøkelse på et bildeanalyse system.
    3. Velg en optimal fryse ramme ultrasonografisk bilde manuelt for ytterligere målinger. Sjekk bildene i mindre krumning av stigende aorta. Hvis plakk i stigende aorta kan sees, måle maksimal plakk tykkelse. Hvis plakk i stigende aorta ikke kan ses, måle maksimal IMT.
    4. Mål IMT (avstanden mellom det vaskulære luminal-intimal grensesnittet og det midtre adventitial grensesnittet). Mål maksimal plakk tykkelse (den største avstanden mellom grensen av vaskulær lumen og adventitial lag).
    5. Gjennomsnittlig data fra tre områder for lesjon (Figur 3).
  3. Fastsettelse av hjerte dysfunksjon ved hjelp av ekkokardiografi
    Merk:
    Undersøk hjertefunksjon gjennom ekkokardiografi ved hjelp av et microultrasound system, som tidligere beskrevet22.
    1. Direkte en ultralyd stråle mot hjertet, nær papillær musklene.
    2. Oppnå todimensjonal elektro-basert kilohertz visualisering.
    3. Utfør in vivo transthoracic ekkokardiografi av venstre ventrikkel med et 30 MHz skanne hode.
    4. Måle parametre knyttet til hjertefunksjon digitalt fra M-modus tracings.
    5. Gjennomsnittlig data fra tre til fem CARDIAC sykluser (tabell 1).
  4. Intra-og interobserver variasjon
    1. For validering av intraobserver variasjon, analysere dataene med én operator ved to forskjellige anledninger.
    2. Hvis du vil evaluere interobserver variasjon, analyserer du dataene ved en annen operator.

4. ukentlig kroppsvekt måling og plasma total kolesterol (TC) og triglyserider (TG) bestemmelse

  1. Ukentlig kroppsvekt måling
    1. Mål kropps vekter en gang i uken fra uke-1 til uke 12.
      Merk: n = 8 mus per gruppe.
  2. Plasma forberedelse
    1. Før du samler blodprøver gjennom intrakardielle punktering, forberede sprøyter og rør. Bruk EDTA som en antikoagulerende. Tilsett 10 μL av 0,5 M EDTA til hver 2 mL sprøyte, og tilsett 8 μL av 0,5 M EDTA til hvert 1,5 mL rør.
    2. Ved uke 12, etter en overnatting fort, bedøve musene med avertin (tribromoethanol; 200 mg/kg; intraperitonealt).
      Merk: n = 3 mus per gruppe.
    3. Forbered ventrale bryst område med 70% etanol.
    4. Bruk saks og tang for å åpne bryst hulen og kutte ribbeina til det bankende hjertet er eksponert.
    5. Sett den 25 G nålen inn i høyre ventrikkel. Aspirer langsomt til blodet begynner å strømme inn i sprøyten.
      Merk: Vi bruker engangssprøyter i steril tilstand med 25 G nåler (se tabell over materialer).
    6. Fortsett å aspirer med stødig, jevnt trykk. Hvis ingen blod blir sett, Omplasser nålen og gjenta aspirasjon.
    7. Hold mus dypt anesthetized før du samler inn det nødvendige blod volumet. Normalt kan opp til 1 mL blod samles. Euthanize musene ved cervical forvridning under denne dype anestesi tilstand.
    8. Pipetter blodprøver i 1,5 mL rør og invertere blodet grundig for å sikre blanding EDTA i blodet. Deretter plasserer blodprøver på isen umiddelbart.
    9. Sentrifuge prøver for 20 min ved 400 x g ved 4 ° c innen 30 min av kolleksjonen.
    10. Samle supernatanten forsiktig. Alikvot og oppbevar plasmaprøver ved-80 ° c.
  3. Konstruere standard kurver for TC eller TG-innholds måling
    1. For TC standard kurve, utarbeide ulike konsentrasjoner av kolesterol standarder: 0 mmol/L, 0,52 mmol/L, 1,03 mmol/L, 2,07 mmol/L, 4,14 mmol/L, 6,20 mmol/L, 8,27 mmol/L og 10,34 mmol/L. mål OD for hver kolesterol standard. Sett gjennomsnittlig OD for hver kolesterol standard. Som verdien for den loddrette aksen (Y) angir du konsentrasjonen som verdien for X-aksen. Opprett en standard kurve ved hjelp av en statistisk programvare.
    2. For TG standardkurven, utarbeide ulike konsentrasjoner av TG standarder: 0 mmol/L, 0,45 mmol/L, 0,90 mmol/L, 1,81 mmol/L, 3,62 mmol/L, 5,42 mmol/L, 7,23 mmol/L og 9,04 mmol/L. mål OD for hver TG-standard. Sett gjennomsnittlig OD for hver TG-standard som verdien for vertikal (Y) akse; Angi konsentrasjon som verdien for horisontal (X) akse. Opprett en standard kurve ved hjelp av en statistisk programvare.
      Merk: En fire-parameter logistikk kurve montering (4-pl) ble brukt for standard kurve konstruksjonen i denne studien. Kontroller standardkurven før du måler plasma prøvene og sørg for at r2 er større enn 0,995.
  4. Måling av TC-innhold
    1. Merk flasken med farge reagens (25 mL) fra TC-analyse settet som "TC Working Solution".
    2. Vortex kjøle prøvene kort. Forbered fortynninger: 20 μL av plasma i 80 μL av destillert vann. Vortex kort fortynninger.
    3. Tilsett 2,5 μL av kolesterol standarder (5,17 mmol/L) eller 2,5 μL av fortynnet plasma eller 2,5 μL av destillert vann (blank) til de riktige brønnene til en 96-brønn plate. Triplication anbefales.
    4. Til alle brønner, tilsett 250 μL av farge reagens.
    5. Ruge ved 37 ° c i 10 min.
    6. Slå mikroplate leseren på og la en 10 min varme opp.
    7. Fjern platen (e) fra inkubator og lese mikroplate leseren på 510 NM. Sørg for at ingen bobler eller støv er til stede i mikrotiterbrønnene brønner eller på bunnen av platen, henholdsvis.
    8. Beregn TC konsentrasjonen som følger:
      TC CONT. = kolesterol standarder CONT. × (plasma sample OD-blank O. D)/(kolesterol standarder OD-blank O. D)
  5. VS innholds måling
    1. Merk flasken med farge reagens (25 mL) fra TG-analysen kit som "vs arbeids løsning".
    2. Vortex kjøle prøvene kort.
    3. Tilsett 2,5 μL av TG-standarder (2,26 mmol/L) til eller 2,5 μL av fortynnet plasma eller 2,5 μL av destillert vann (blank) til de riktige brønnene til en 96-brønn plate. Triplication anbefales.
    4. Til alle brønner, tilsett 250 μL av farge reagens.
    5. Ruge ved 37 ° c i 10 min.
    6. Slå mikroplate leseren på og la en 10 min varme opp.
    7. Fjern platen (e) fra inkubator og lese mikroplate leseren på 510 NM.
      Merk: Sørg for at ingen bobler eller støv er til stede i mikrotiterbrønnene brønner eller på undersiden av platen.
    8. Beregn TG-konsentrasjonen på følgende måte:
      VS. × = TG-standarder (Plasma prøve OD-blank O. D)/(TG standarder OD-blank O. D)

5. en Face analyse av aorta aterosklerotiske lesjoner

  1. Aorta isolasjon og forbruker
    1. Ved uke 12, etter en overnatting fort, bedøve musene med avertin (tribromoethanol; 200 mg/kg; intraperitonealt). Euthanize musene ved cervical forvridning under denne dype anestesi tilstand.
      Merk: Vi brukte 3 mus per gruppe.
    2. Forbered ventrale bryst område med 70% etanol. Bruk saks og tang for å åpne bryst hulen og kutte ribbeina til det bankende hjertet er eksponert.
    3. Fyll en 50 mL sprøyte med fosfat bufret saltvann ved pH 7,4 (se tabell over materialer). Sett en 25 G av nålen inn i venstre ventrikkel og skjær høyre Atrium for å unngå høyt trykk fra blod.
    4. Utfør in situ ved en strømningshastighet på 0,05-0.08 mL/min. Absorber væske med vev.
    5. Fjern ribber og lunger i bryst hulrom med saks og tang. Deretter åpner bukhulen og fjerne organene inne for en bedre utsikt over aorta.
    6. Fjern aorta ved å holde hjertet med microforceps og skille aorta fra ryggraden dorsalt med microscisssors til iliaca bifurkasjonen.
      Merk: Ved dissekere nær renal atrieflimmer, kutt dypt ved hjelp av microscissors for å unngå aorta skader.
    7. Fix hjertet og aorta for 48 h i 4% paraformaldehyde. Oppbevar aortas i saltvann ved romtemperatur eller ved 2-8 ° c i noen timer.
      Merk: Denne prosedyren vil lette rengjøringen.
  2. Utarbeidelse av aorta
    1. Fjern hjertet. Fjern forsiktig det adventitial vevet fra aortas ved hjelp av microforceps og microscisssors under en stereomikroskopet. Bruk saltvann for å holde vevet fuktig under rengjøringen.
      Merk: Vær forsiktig med å ikke rive eller Nick i aorta og noen viktige grener, slik som Innominate arterien, venstre felles hals puls arterien, og venstre arteria arterien.
    2. La det være 1 mm Innominate og venstre vanlige hals puls arterier, og klipp av hele venstre arteria arterie.
    3. Skjær åpne den ytre krumning gjennom Innominate arterien, deretter til venstre felles hals puls arterien, og deretter til venstre arteria arterien.
    4. Skjær åpne langs den indre krumning av den stigende delen til bunnen av abdominal delen.
    5. PIN aorta flatt på en svart plast ark og påfør saltvann for å holde aortas fra tørking.
  3. Bilde av intimal regionen av aorta
    1. Ta bilder av en ansikts aortas med et stereo mikroskop. Ta med en millimeter skala linjal i bildene for å kalibrere målingene.
    2. Inkluder buen og bryst regioner i samme bilde og abdominal regionen i en annen. Lagre bilder som JPEG eller TIFF.
      Merk: Buen regionen er fra krysset av myokard til 3 mm fra venstre arteria arterien, er bryst regionen 3 mm til venstre arteria arterien til den siste interkostalrom arterien, og abdominal regionen er den siste interkostalrom arterien til iliaca Bifurkasjonen.
  4. Kvantifisering av aterosklerotiske lesjon-en ansikts metode
    1. Kalibrering
      1. Åpne bildet med bildeanalyse programvare (se tabell over materialer), gå til romlig kalibrering og følg instruksjonene.
      2. Endre referanse enheter til mm ved å plassere linjalen over linjen.
    2. Måling
      1. Still inn riktig kalibrering for hvert bilde.
      2. Mål 3 mm på linjalen.
      3. Bue og bryst region måling: Outline buen regionen fra krysset av myokard til 3 mm fra venstre arteria arterien og bryst regionen fra 3 mm til venstre arteria arterien til den siste interkostalrom arterien. Spor lesjoner i buen og bryst regionen og se på aorta gjennom mikroskopet.
      4. Abdominal region måling: skissere abdominal regionen fra slutten av bryst regionen til iliaca bifurkasjonen. Spor lesjoner i mageregionen og se på aorta gjennom mikroskopet.
      5. Beregn lesjon området i forhold til den indre overflaten av aorta.
      6. Bekreft kvantifisering gjennom en annen observatør som er blind for studiegruppene.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

En typisk eksperimentell behandling ordningen, som brukes i denne studien, er illustrert i figur 1. På avvenning (alder 28 dager), kvinnelige apoE-/- C57BL/6J mus var anesthetized withavertin (tribromoethanol; 200 mg/kg; intraperitonealt). Mus ble bilateralt OVX eller humbug operert gjennom et 1 cm rygg snitt. En uke etter bilaterale OVX, musene ble matet en høy-kolesterol diett (1,25% kolesterol, 0% cholate) i 12 uker. 17β-østradiol (0,1 mg · kg-1) eller PPD (0,5 mg · kg-1) ble perorally administrert parallelt via hasselnøtt som ble spredt i løpet av de siste 9 ukene av behandlingen. Alle mus ble veid ukentlig. Som vist i figur 2, effekten av både eksogene østrogen (17β-ØSTRADIOL og PPD) på plasma lipider og ukentlig kroppsvekt av apoE-/- mus etter Østrogenmangel ble evaluert. Etter 12 uker med høy kolesterol diett, OVX mus viste en bemerkelsesverdig økning i plasma TC og TG konsentrasjoner. OVX mus perorally administreres med 17β-østradiol eller PPD via hasselnøtt spredt utstilt betydelig lavere plasma TC konsentrasjoner enn humbug-opererte mus (figur 2a). Plasma TG nivåer redusert i OVX mus perorally administreres med 17β-østradiol, men ikke med PPD (figur 2b). Som vist i figur 2C, mens en tendens til økt kroppsvekt (BW) ble OBSERVERT i OVX mus sammenlignet med humbug-opererte mus, BW i OVX mus perorally administreres med 17β-ØSTRADIOL eller PPD via hasselnøtt spres etter en høy-kolesterol diett viste en tendens motsatt at i OVX mus. Men den endelige kroppsvekten av mus i ulike grupper viste ingen vesentlige endringer.

Kardiovaskulær funksjon ble evaluert ved hjelp av ekkokardiografi. Som vist i Figur 3, ble maksimal plakk eller IMT av den stigende aorta målt i OVX mus perorally administrert med 17β-østradiol eller PPD via hasselnøtt spredning. Aorta buen av høy-kolesterol-diett-matet apoE-/- mus ble observert av B-modus ekkokardiografi. Representative langsgående bilder av stigende aorta ble fanget opp av ultrasonografisk biomikroskopi. De røde pilene angir plakk. OVX-mus viste økt maksimal plakk eller IMT av stigende aorta sammenlignet med humbug-opererte mus. Etter peroral administrering av 17β-østradiol eller PPD via hasselnøtt spredning, ble maksimal plakk eller IMT i stigende aorta bemerkelsesverdig redusert sammenlignet med OVX mus. (Figur 3). Vi har også observert CARDIAC dysfunksjon som svar på OVX i apoE-/- mus etter en 12-ukers høy kolesterol-diett fôring (tabell 1). Hjertefunksjonen ble undersøkt gjennom ekkokardiografi. I OVX mus, peroral administrering av 17β-østradiol eller PPD via hasselnøtt spredning kan delvis dempe parametre som viser hjerte dysfunksjon.

Deretter brukte vi en ansikts analyse for å fastslå aorta aterosklerotiske lesjoner. Som tidligere rapportert, etter 12 uker, en høy-kolesterol diett førte til aterosklerotiske plakk dannelse på luminal overflaten av aorta. Som vist i Figur 4, den gjennomsnittlige prosentandelen av aorta lesjon område i forhold til hele aorta området betydelig økt i OVX mus. Etter peroral administrasjon med 17β-østradiol eller PPD via hasselnøtt spredt, den aorta lesjon området bemerkelsesverdig redusert sammenlignet med at av OVX mus motstykke. Dette resultatet er konsistent med beskyttelse av 17β-østradiol eller PPD fra utvikling av aterosklerose presentert i Figur 3.

I konklusjonen, den foreslåtte prosedyren, som bruker bilaterale ovarieektomi via en dobbel rygg-lateral snitt i apoE-/- mus, gjelder for screening ikke-invasiv eksogene østrogenbehandling av kardiovaskulær dysfunksjon etter overgangsalderen. Det er også spesielt nyttig for å unngå skadelige tumorigenetic kapasitet.

Figure 1
Figur 1. Mouse behandling ordningen. Ved avvenning (alder, 28 dager), kvinnelige apoE-/- C57BL/6J mus ble anesthetized med avertin (tribromoethanol; 200 mg/kg; intraperitonealt). Mus var bilateralt ovariectomized (OVX) eller humbug operert gjennom en 1 cm rygg snitt. En uke etter OVX ble musene matet en høy-kolesterol diett (1,25% kolesterol, 0% cholate) i 12 uker. 17β-østradiol (0,1 mg · kg-1) eller PPD (0,5 mg · kg-1) ble perorally administrert parallelt via hasselnøtt som ble spredt i løpet av de siste 9 ukene av behandlingen. Alle musene ble veid hver uke. Ved uke 12, kardiovaskulær funksjon analyse ble evaluert ved hjelp ekkokardiografi. Etter 12 uker med høy kolesterol diett, alle mus var euthanized, og blodprøver og vev ble høstet for videre etterforskning. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2. Effekter av ulike eksogene østrogen på plasma lipider og ukentlig kroppsvekt i apoE-/- mus. Sham mus gjennomgikk en mock operasjon og fikk en høy-kolesterol diett. OVX mus gjennomgikk bilaterale ovarieektomi og deretter tilfeldig delt inn i følgende grupper: den OVX gruppen, som ble behandlet med en høy-kolesterol diett; den OVX/E2 (17β-østradiol) gruppe, som fikk en høy-kolesterol diett for 12 uker pluss 0,1 mg/kg E2 gjennom peroral administrasjon via hasselnøtt spredt for de siste 9 ukers behandling; og OVX/PPD-gruppen, som fikk en høy-kolesterol diett for 12 uker pluss 0,5 mg/kg PPD gjennom peroral administrasjon via hasselnøtt spredt for de siste 9 ukers behandling. Den totale kolesterol og triglyserider nivåer av plasma ble målt via enzymatisk metoder (A-B). Data uttrykkes som middel ± SEM av n = 5 mus per gruppe. Ukentlig kroppsvekt ble målt fra uke til 1 til uke 12 (C). Data uttrykkes som middel ± SEM av n = 8 mus per gruppe. Enveis ANOVA etterfulgt av Dunnett ' s post hoc test ble utført for flere sammenligninger. *p < 0,05 sammenlignet med humbug gruppen; # p < 0,05 SAMMENLIGNET med OVX gruppen. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3. IMT eller maksimal plakk tykkelse målinger i apoE-/- mus. B-modus bilder som viser aorta buen av apoE-/- mus er presentert. De langsgående bilder av stigende aorta ble oppnådd ved ultrasonografisk biomikroskopi. Maksimal plakk eller IMT av stigende aorta (mm) ble målt. De ultrasonografisk bildene viser plakk i den mindre krumning av stigende aorta; de røde pilene viser plaketter. Data uttrykkes som gjennomsnittet ± SEM av n = 8 mus per gruppe. Enveis ANOVA etterfulgt av Dunnett ' s post hoc test ble utført for flere sammenligninger. *p < 0,05 sammenlignet med humbug gruppen; # p < 0,05 SAMMENLIGNET med OVX gruppen. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 4
Figur 4. En ansikt analyse av aorta aterosklerotiske lesjoner i apoE-/- mus. Den gjennomsnittlige prosentandelen av aorta lesjon område i forhold til hele aorta området ble kvantifisert i alle grupper. Representative micrographs av intimal lesjoner (en ansikt) av aorta er vist. Data uttrykkes som gjennomsnittet ± SEM av n = 3 mus per gruppe. Enveis ANOVA etterfulgt av Dunnett ' s post hoc test ble utført for flere sammenligninger. *p < 0,05 sammenlignet med humbug gruppen; # P < 0,05 sammenlignet med OVX-gruppen. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Humbug OVX OVX/E2 OVX/PPD
LVIDd (mm) 3,72 ± 0,10 3,74 ± 0. 24 3,68 ± 0,16 3,88 ± 0,16
LVIDs (mm) 2,34 ± 0,11 2,16 ± 0,22 2,12 ± 0,13 2,55 ± 0,12#
IVSd (mm) 0,83 ± 0,09 0,84 ± 0,07 0,91 ± 0,05 0,74 ± 0,06#
IVSs (mm) 1,24 ± 0,02 1,35 ± 0,06 * 1,45 ± 0,04# 1,09 ± 0,04#
PWTd (mm) 0,7 ± 0,10 0,68 ± 0,04 0,72 ± 0,07 0,58 ± 0,07#
PWTs (mm) 1,10 ± 0,12 1,17 ± 0,08 1,24 ± 0,04 0,98 ± 0,08#
EDV (mm3) 58,89 ± 3,74 59,88 ± 9,02 57,39 ± 5,79 65,11 ± 6,13
ESV (mm3) 18,86 ± 2,17 15,75 ± 4,00 14,85 ± 2,37 23,45 ± 2,64#
EF (%) 67,84 ± 1,52 73,91 ± 3.63 * 74,23 ± 1,50 63,91 ± 3,61#
FS (%) 37,19 ± 1,53 42,22 ± 1,17 * 42,36 ± 1,21 34,28 ± 2,69#
LVIDd = LV intern diameter under diastolen; LVIDs = LV intern diameter under Systolen; IVSd = indre ventrikkel septum under diastolen; IVSs = indre ventrikkel septum under Systolen; PWTd = bakre veggtykkelse under diastolen; PWTs = bakre veggtykkelse under Systolen; EF = utstøting brøk; FS = brøk forkortelse; EDV = ende-diastolisk volum; ESV = slutt systolisk volum.

Tabell 1: hjertefunksjon evaluering ved hjelp av ekkokardiografi. Parametre knyttet til hjertefunksjon digitalt fra M-modus tracings ble kvantifisert i alle grupper. Data uttrykkes som gjennomsnittet ± SEM av n = 8 mus per gruppe. Enveis ANOVA etterfulgt av Dunnett ' s post hoc test ble utført for flere sammenligninger. *p < 0,05 sammenlignet med humbug gruppen; # p < 0,05 SAMMENLIGNET med OVX gruppen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Metodikken beskrevet her er en mus modell som likner lipid avbrudd og aterosklerose sett i overgangsalderen kvinner. Det er godt dokumentert at Østrogenmangel i postmenopausale kvinner kan forverre forekomsten av pre-eksisterende eller pågående hyperkolesterolemi med progressivt komplekse og utbredte atherosclerostic lesjoner1. Å etterligne aterosklerose utsatt status i klinikken, apoE-mangelfull mus, en reproduserbar og praktisk kilde til dyr som å studere atherogenesis23,24,25, ble brukt. Som vist i denne studien, kvinnelige OVX apoE-/- mus på avvenning viste en økning i aterosklerotiske lesjoner i aorta sammenlignet med kvinnelige apoE-/- mus med intakt eggstokkene funksjon. I dette dyret modellen, vi også sammenlignet effekten av ulike eksogene østrogen erstatning terapier på aterosklerotiske lesjon størrelse under en kontrollert kosttilskudd tilstand.

Den doble rygg-lateral snitt av bilaterale ovarieektomi presentert i denne artikkelen er teknisk enklere, mindre tidkrevende, og sikrere sammenlignet med midten rygg-lateral snitt eller middels abdominal snitt av bilaterale ovarieektomi i apoE-/- mus. Bilaterale ovarieektomi via midten abdominal snitt presenterer en stor ulempe: det kan føre til alvorlige abdominal hulrom vedheft, som i sin tur kan påvirke legemiddel absorpsjon. Nylige rapporter viser at peroral administrering av lav dose 17β-østradiol beskytter mot cerebral iskemi26. Dermed valgte vi peroral administrasjon via hasselnøtt spredt i den foreliggende studien. Kommersiell langsom-Release pellets er en ofte brukt administrasjonsmodus for testing farmakologiske effekter i en musemodell, men kan forårsake skadelige cerebral skade27. Implantater er utsatt for infeksjoner, spesielt hvis mus utsettes for bilaterale OVX via en dobbel rygg-lateral snitt. Selv om forsiktig desinfeksjon av huden før snittet er utført, er infeksjon vanskelig å unngå. Vann administrasjon og orale gavage er to mindre brukte metoder som er testet. Administrering av hormonet via drikkevann er svært gunstig på grunn av sin tilværelse ekstremt ikke-invasiv fordi nesten ingen dyr håndtering er nødvendig. Imidlertid er 17β-østradiol ikke løselig i vann uten en emulgator. Derfor brukte vi DMSO på en konsentrasjon på mindre enn 0,5% for å lette sin løsning i drikkevann. Men denne tilnærmingen for langsiktig administrasjon av lav dose DMSO er vanskelig å kontrollere og giftig for mus eller mennesker. Mus kan også drikkevann over hele 24 h av overvåking, noe som gjør faktisk narkotika forbruk vanskelig å fastslå. En annen ulempe med denne tilnærmingen er at den enkeltes vanninntak er vanskelig å kontrollere. Den største ulempen med oral gavage er at det er stressende for dyr og kan forårsake Esophageal skader og påvirker spise atferd. I metodikken beskrevet her, en 5 dagers opplæring av spise hormon-fri hasselnøtt spredt før eksperimentet ble gjennomført. Ca mer enn 95% av musene vil akseptere hasselnøtt spredning hvis det blir trent som det som er nevnt i protokollen delen. Når fullt habituated, de fleste av musene vil forbruke det i løpet av sekunder. I samsvar med en tidligere studie6,11, plasma E2 nivåer redusert i OVX mus sammenlignet med humbug-opererte motstykke ved uke 4 (data ikke vist). Ved uke 12 etter besluttsomhet, observerte vi livmor atrofi i OVX-opererte mus. Men, sirkulerende østrogennivået ble ikke overvåket etter OVX i den foreliggende studien.

I fravær av påvisning av aterosklerotiske lesjoner i den stigende aorta kan aorta-IMT evalueres ved å måle avstanden mellom lumen-intimal grensesnittet og adventitial-grensesnittet. Denne målingen er basert på en tidligere validert protokoll hos mennesker28. Gjennomsnittlig data fra tre områder som er omtrent 100 μm fra hverandre. CARDIAC arbeidsbelastningen øker etter OVX i apoE-/- mus kan skyldes kompenserende hypertrofisk vekst av individuelle cardiomyocytes som til slutt kan føre til økt CARDIAC output (tabell 1). Mens, ved peroral administrasjon av PPD i 9 uker, den kompenserende hjerte-hypertrofi ble svekket med en EF% sammenlignbare med humbug motstykket. For validering av variasjon i intra-eller Inter-observatør, analyser koeffisienter av variasjon for aterosklerotiske tykkelse målinger og parametre knyttet til hjertefunksjon av en operatør ved to forskjellige anledninger eller av en annen operatør.

Som presentert i vår studie, OVX mus perorally administreres med 17β-østradiol eller PPD via hasselnøtt spredt tendens til å hindre kroppsvekt gevinst og redusere Østrogenmangel-assosiert lipid avbrudd, selv om ingen vesentlige forskjeller i endelig kroppsvekt var Observert. Tidligere studier har også vist at lipid parametre variasjon kan være for mindre til å forklare antiatherosclerotic effekter av hormoner29. Den gunstige effekten av østrogen er ikke begrenset til endringer i lipid protein egenskaper. Noen nonlipid effekter av østrogen30,31, som betennelser, endothelial dysfunksjon, og hemodynamisk stasis, kan tilrettelegge kardiovaskulær beskyttelse i menneskelig sykdom. Tatt i betraktning resultatene observert i denne studien, beskyttelse av eksogene østrogen fra aterosklerose utvikling er delvis uavhengig av systemiske lipid nivåer. I endothelial celler, hemmet PPD uttrykk for vedheft molekyl og inflammatoriske meglere (data ikke vist). Videre kan PPD undertrykke inflammasjon fett dannelse som er nært korrelert med endothelial anti-contractility. Dermed ble handlingen av PPD og 17β-østradiol annerledes og den underliggende mekanismen er å bli ytterligere utforsket. Utvilsomt, overdreven inntak av energi-rik mat, slik som hasselnøtt spredning, kan føre til vektøkning. Men den lille mengden av hasselnøtt spredning (200 mg · kg-1· dag-1) som nevnt i denne studien kan bare være ansvarlig for mindre enn 5% av dyrenes daglige energiinntak. Også, ingen åpenbar vektøkning ble oppdaget ved hjelp av denne mengden av hasselnøtt spredning. Bruken av 17β-østradiol og PPD var hovedsakelig for behandling av hjerte-og karsykdommer. Fordi, under progresjon av aterosklerose i OVX-opererte aopE-/- mus, fra uke 4 til uke 12, 17β-ØSTRADIOL eller PPD ble perorally administreres.

En ikke-ubetydelig punkt av klinisk bruk av HRT er dens ødeleggende bivirkninger, som inkluderer eggstokkene og brystkreft13,14. Phytoestrogen testet i denne studien er et steroid saponin sammensatte funnet i dioscorea planter. PPD-en har blitt rapportert å ha en hemmende effekt på noen kreftceller linjer20. I tillegg viser PPD antiatherosclerotic egenskaper som kan sammenlignes med 17β-østradiol. Modellen vi presenterer her kan hjelpe skjermen potensielle kandidaten forbindelser, inkludert phytoestrogen, som utøver en minimal effekt på tumor spredning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter.

Acknowledgments

Dette arbeidet ble støttet av National Natural Science Foundation i Kina (81202526 til J.X.), National Natural Science Foundation i Kina (81302769 til BS), Beijing Municipal Natural Science Foundation (47144226 til BS), den kinesiske postdoktor Science Foundation (20110490325 til J.X.), og Ph.D. programmer stiftelsen av utdanningsdepartementet i Kina (20121106120031 til BS).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
17β-estradiol, >98% Sigma-Aldrich E8875-250MG Estrogen
Disposable syringes (with 25 G needles) Hunan Luzhou Huikang Development Co., Ltd 0.5*19TWLB Cardiac bleeding
High-cholesterol mouse diet Huafukang Bio-Technology N/A 1.25% cholesterol, 0% cholate
High-Resolution In Vivo Micro-Imaging System VisualSonics Vevo®770 Measurements of intima-media thickness and cardiac dysfunction
2-Methyl-2-butanol Sigma-Aldrich 152463-250ML Preparation of avertin
Micro Dissecting forceps, Curved 8mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Micro Dissecting forceps, Straight 8 mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Micro Dissecting Scissors, Curved/Sharp 8 mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Micro Dissecting Scissors, Straight/Sharp 8 mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Monofilament suture 4-0 1/2 5 x 12 19 mm Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd R413 Suture and ligation of the tissues
Nut cream (Nutella) Ferrero N/A Medium for peroral 17β-estradiol or PPD
OptiVisor optical glass binocular magnifier Dohegan Optical Company Inc. N/A Assistant of identifying the tissues during ovariectomy
Phosphate-buffered saline at pH 7.4 SIGMA P3813 Preparing 1 L saline
Pro MultiLabel Microplate Reader Tecan Infinite M1000 Plasma TC and TG determination
Pseudoprotodioscin Shanghai Winherb Medical S & T Development W-0427 CAS registry no. 102115-79-7
Rimadyl, 50 mg/mL Pfizer Pharma GmbH 462986 Postoperative analgesia after ovariectomy
Sesame oil Sigma-Aldrich S3547-1L Dissolving the 17β-estradiol or PPD
Solcoseryl Eye-Gel Menarini, Solco Basle Ltd. Eye protection during anesthesia
Stereo microscope MCALON MCL-6STV Image of the intimal region of aorta
Table model high speed centrifuge SIGMA 1-14K Preparation of plasma
Scissors, slight Curve (14 cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Scissors, straight Flat (14 cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Tissue forceps, serrated, slight Curve (14 cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Tissue forceps, serrated, straight Flat (14 cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Tribromoethanol Sigma-Aldrich T48402-5G Preparation of avertin
Triglycerides (TG) assay kit Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering A110-1 Plasma TG determination
Total cholesterols (TC) assay kit Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering A111-1 Plasma TC determination

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mozaffarian, D., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 133, (4), e38-e360 (2016).
  2. Packard, B. L. Cardiovascular health and disease in women. The New England Journal of Medicine. 329, (4), 247-256 (1993).
  3. Samaan, S. A., Crawford, M. H. Estrogen and cardiovascular function after menopause. Journal of the American College of Cardiology. 26, (6), 1403-1410 (1995).
  4. Libby, P. Inflammation in atherosclerosis. Nature. 420, (6917), 868-874 (2002).
  5. Tremollieres, F. A., et al. Effect of hormone replacement therapy on age-related increase in carotid artery intima-media thickness in postmenopausal women. Atherosclerosis. 153, (1), 81-88 (2000).
  6. Bourassa, P. A., Milos, P. M., Gaynor, B. J., Breslow, J. L., Aiello, R. J. Estrogen reduces atherosclerotic lesion development in apolipoprotein E-deficient mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93, (3), 10022-10027 (1996).
  7. Squadrito, F., et al. Genistein supplementation and estrogen replacement therapy improve endothelial dysfunction induced by ovariectomy in rats. Cardiovascular Research. 45, (2), 454-462 (2000).
  8. Wang, D., et al. Endothelial dysfunction and enhanced contractility in microvessels from ovariectomized rats: roles of oxidative stress and perivascular adipose tissue. Hypertension. 63, (5), 1063-1069 (2014).
  9. Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. Spontaneous Hypercholesterolemia and Arterial Lesions in Mice Lacking Apolipoprotein E. Science. 258, (5081), 468-471 (1992).
  10. Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. ApoE-Deficient Mice Develop Lesions of All Phases of Atherosclerosis Throughout the Arterial Tree. Arteriosclerosis and Thrombosis. 14, (1), 133-140 (1994).
  11. Ström, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. Ovariectomy and 17-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration. Journal of Visualized Experiments. 64, (e4013), 1-4 (2012).
  12. Rossouw, J. E., et al. Risks and benefits of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women: principal results From the Women's Health Initiative randomized controlled trial. The Journal of the American Medical Association. 288, (3), 321-333 (2002).
  13. Kumle, M. Declining breast cancer incidence and decreased HRT use. Lancet. 372, (9639), 608-610 (2008).
  14. Jager, W., et al. A randomized comparison of triptorelin and tamoxifen as treatment of progressive ovarian cancer. Anticancer Research. 15, (6B), 2639-2642 (1995).
  15. Bhathena, S. J., Velasquez, M. T. Beneficial role of dietary phytoestrogens in obesity and diabetes. The American Journal of Clinical Nutrition. 76, (6), 1191-1201 (2002).
  16. Wang, L., Qiu, X. M., Hao, Q., Li, D. J. Anti-inflammatory effects of a Chinese herbal medicine in atherosclerosis via estrogen receptor beta mediating nitric oxide production and NF-kappaB suppression in endothelial cells. Cell Death and Disease. 4, (e551), 1-13 (2013).
  17. Xiao, J., Wang, N. L., Sun, B., Cai, G. P. Estrogen receptor mediates the effects of pseudoprotodiocsin on adipogenesis in 3T3-L1 cells. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299, (1), C128-C138 (2010).
  18. Guivarc'h, E., et al. Predominant Role of Nuclear Versus Membrane Estrogen Receptor alpha in Arterial Protection: Implications for Estrogen Receptor alpha Modulation in Cardiovascular Prevention/Safety. Journal of the American Heart Association. 7, (13), 1-17 (2018).
  19. Osako, M. K., et al. Estrogen inhibits vascular calcification via vascular RANKL system: common mechanism of osteoporosis and vascular calcification. Circulation Research. 107, (4), 466-475 (2010).
  20. Ivanova, A., et al. Screening of some saponins and phenolic components of Tribulus terrestris and Smilax excelsa as MDR modulators. In vivo. 23, (4), 545-550 (2009).
  21. Xiao, J., Zhu, T., Yin, Y. Z., Sun, B. Notoginsenoside R1, a unique constituent of Panax notoginseng, blinds proinflammatory monocytes to protect against cardiac hypertrophy in ApoE(-/-) mice. European Journal of Pharmacology. 833, (15), 441-450 (2018).
  22. Sun, B., Xiao, J., Sun, X. B., Wu, Y. Notoginsenoside R1 attenuates cardiac dysfunction in endotoxemic mice: an insight into oestrogen receptor activation and PI3K/Akt signalling. British Journal of Pharmacology. 168, (7), 1758-1770 (2013).
  23. Adams, M. R., et al. Inhibition of coronary artery atherosclerosis by 17-beta estradiol in ovariectomized monkeys. Lack of an effect of added progesterone. Arteriosclerosis. 10, (6), 1051-1057 (1990).
  24. Keaney, J. F. Jr, et al. 17 beta-estradiol preserves endothelial vasodilator function and limits low-density lipoprotein oxidation in hypercholesterolemic swine. Circulation. 89, (5), 2251-2259 (1994).
  25. Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 14, (1), 133-140 (1994).
  26. Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats. American Journal of Physiology- Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 281, (5), R1531-R1539 (2001).
  27. Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 25, (3), 414-420 (2005).
  28. Pignoli, P., Tremoli, E., Poli, A., Oreste, P., Paoletti, R. Intimal plus medial thickness of the arterial wall: a direct measurement with ultrasound imaging. Circulation. 74, (6), 1399-1406 (1986).
  29. Hodgin, J. B., Maeda, N. Minireview: estrogen and mouse models of atherosclerosis. Endocrinology. 143, (12), 4495-4501 (2002).
  30. Bush, T. L., et al. Cardiovascular mortality and noncontraceptive use of estrogen in women: results from the Lipid Research Clinics Program Follow-up Study. Circulation. 75, (6), 1102-1109 (1987).
  31. Marsh, M. M., Walker, V. R., Curtiss, L. K., Banka, C. L. Protection against atherosclerosis by estrogen is independent of plasma cholesterol levels in LDL receptor-deficient mice. Journal of Lipid Research. 40, (5), 893-900 (1999).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics