In Vivo Эстроген Дефицит мыши Модель для скрининга экзрогена Эстроген Лечение сердечно-сосудистой дисфункции после менопаузы

Biochemistry

Your institution must subscribe to JoVE's Biochemistry section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Клинически, дефицит эстрогена у женщин менопаузы может усугубить частоту нарушения липидов и атеросклероза. Мы создали модель дефицита эстрогена in vivo путем двусторонней овариэктомии с помощью двойного торсалово-бокового разреза у апоЭ-/- мышей. Мышь модель применима для скрининга экзрогена эстроген лечения сердечно-сосудистой дисфункции после менопаузы.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Sun, B., Yin, Y. z., Xiao, J. An In Vivo Estrogen Deficiency Mouse Model for Screening Exogenous Estrogen Treatments of Cardiovascular Dysfunction After Menopause. J. Vis. Exp. (150), e59536, doi:10.3791/59536 (2019).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Постменопаузальные женщины подвергаются большему риску развития сердечно-сосудистых заболеваний, чем женщины в пременопаузе. Самки мышей ovariectomized (OVX) при отлятке дисплей увеличение атеросклеротических поражений в аорте по сравнению с самками мышей с нетронутой функции яичников. Тем не менее, лабораторные модели с участием эстроген-дефицитных мышей с атеросклерозом подверженных статусу отсутствуют. Этот дефицит имеет решающее значение, поскольку клинический дефицит эстрогена у женщин в период менопаузы может усугубить заболеваемость уже существующими или продолжающимися нарушениями липидов и атеросклерозом. В этом исследовании мы устанавливаем in vivo эстроген-дефицитной мыши модели двусторонней овразиэктомии через двойной престоченно-боковой разрез в аполипопротеин E (apoE)-/- мышей. Затем мы сравниваем эффекты 17-эстрадиола и псевдопротодиоскина (PPD) (фитоэстрогена) перорально вводят через фундук распространения. Мы находим, что, хотя PPD оказывает определенное влияние на снижение конечной массы тела и плазмы TG в OVX apoE-/- мышей, он имеет анти-атеросклеротические и сердечно-защитные возможности сопоставимы с его 17 "эстрадиол коллега. PPD является фитоэстрогена, который, как сообщается, оказывают противоопухолевые свойства. Таким образом, предлагаемый метод применим для скрининга фитоэстрогенов через пероральный администрации, чтобы заменить традиционную заместительную гормональную терапию у женщин в постменопаузе, которая, как сообщается, потенциально вредных tumorigenetic Емкость. Пероральная администрация с помощью распространения фундука является неинвазивным, что делает его широко применимым для многих пациентов. Эта статья содержит пошаговые демонстрации двусторонней овариэктомии через двойной торсал-боковой разрез в апоЕ-/- мышей и пероральных 17-эстрадиол или фитоэстроген гормона замены через фундук распространения. Плазменные липидные и сердечно-сосудистые функции анализируют сяокардиографию.

Introduction

Эпидемиологические и клинические исследования показали, что женщины в постменопаузе подвергаются значительно большему риску сердечно-сосудистых заболеваний, чем женщины в пременопаузе1,2. Заместительная гормональная терапия (ГрЗ) может снизить относительный риск сердечно-сосудистых заболеваний до 0,37-0,793. Среди других осложнений, атеросклероз, вызванный сердечно-сосудистыми заболеваниями является ведущей причиной смерти во всем мире4. Тем не менее, лабораторные модели с участием эстроген-дефицитных мышей, представляющих атеросклероз подверженных статусне отсутствуют. Этот протокол обеспечивает in vivo эстроген дефицит мыши модель для скрининга экзрогена эстроген лечения сердечно-сосудистой дисфункции после менопаузы.

Предыдущие исследования показывают, что применение OVX у атеросклеротических грызунов кормили высоким содержанием холестерина диета может имитировать женщин в постменопаузе женщин, страдающих атеросклерозом5,6,7,8. Воспроизводимая и удобная модель животных, напоминающая атеросклеротическое состояние у женщин в период менопаузы, является основой исследований экзогенного эстрогена. Здесь двойной торсал-боковой разрез двусторонней овариэктомии был применен в подверженных атеросклерозу аполипопротеина E нокаутом (apoE-/-) мышей9,10. По сравнению со средним разрезом брюшной полости или стрижкой, двойной терзательный разрез является более легким, менее трудоемким методом, который может избежать тяжелой адгностии и воспаления. Пероральный администрации через фундук распространения (см. Таблица материалов) является неинвазивным и удобным, что делает его широко применимы множеству в качестве долгосрочного режима администрирования11. Медленно-релиз гранулы имплантации также популярен6. Тем не менее, имплантаты могутуго усугублять заболеваемость инфекцией, особенно у мышей, подвергаемых OVX. Другие неинвазивные режимы администрирования, такие как устные gavage и управление водой, также имеют много недостатков. Устные gavage обычно стресс мышей и может привести к травмам пищевода. Администрирование гормона через питьевую воду является весьма полезным; однако, добавление DMSO как эмульгатор неизбежно по мере того как экзогенные эстрогены нерастворены в воде. Здесь мы выбрали пероральный 17-эстрадиол или фитоэстрогена заместительной гормональной книжки через распространение фундука для длительного введения.

В последнее время благотворное влияние ЗГТ на сердечно-сосудистую систему женщин в постменопаузе было оспорено в инициативе по охране здоровья женщин (WHI) испытаний12. С одной стороны, экзогенный эстроген сам по себе оказывает благотворное влияние на сердечно-сосудистую систему; с другой стороны, он может сочетаться с ацетатом метогидрогестерона для повышения риска сердечно-сосудистых событий. Более серьезно, ЗГТ может привести к прогрессии опухоли молочной железы и матки, и этот эффект заметно ограничил его использование13,14. Больше интереса было сосредоточено на сердечно-сосудисто-защитных эффектов экзогенных эстрогенов, не хватает митотической активности в опухолевых клетках15,16,17. Многочисленные исследования на людях и животных показывают, что фитоэстрогены со структурами, похожими на эстрогены могут играть полезную роль в сердечно-сосудистой защиты15,18.

Таким образом, целью настоящей работы является (i) построить in vivo эстроген дефицит мыши модели двусторонней ovariectomy с помощью двойного розн-бокового разреза в apoE-/- мышей и (ii) для сравнения сердечно-сосудистых защитных эффектов перорально вводят 17-эстрадиол и псевдопротодиосин (PPD), с помощью фундука распространения. 17 "эстрадиол является одним из видов экзогенного эстрогена, который принадлежит к женским половым гормонам6,11,19. PPD, стероидный сапонин и фитоэстрогены из растений Dioscorea, ранее сообщалось, оказывают противоопухолевые свойства20.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Все протоколы по уходу за животными и экспериментальные протоколы были одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных Китайской академии медицинских наук и Пекинским союзом медицинского колледжа (разрешение No.: SYXK (Пекин) 2013-0023). Происхождение apoE-/- мышей C57BL/6J9,10.

1. Двусторонняя обариэктомия через двойной торсально-боковой разрез в апое-/- Мыши

  1. При отъеме (возраст 28 дней) анестезируют самку апоэ-/- C57BL/6J мышей с авертином (трибромоэтанол; 200 мг/кг; интраперитонеалли).
    ПРИМЕЧАНИЕ: 32 apoE-/- мыши были случайным образом разделены на 4 группы: SHAM, OVX, OVX/E2, и группа OVX/PPD (n - 8 в группе).
  2. Поместите животное в положение на грелку. Нанесите глазную смазку для защиты глаз во время анестезии.
  3. Поддерживайте температуру тела в пределах 36 и 0,5 градусов по Цельсию. Администрирование 5 мг/кг массы тела обезболиващее карпрофен подкожно боковой аспект шеи мыши.
  4. Бритье 3 х 5 см2 мыши области цефалика от подвздошной гребень. Перед покрытием животного с 3 х 5 см2 диафрагмы хирургический лист, очистить бритую область тщательно с йодом, а затем 70% этанола. Используйте стерильные инструменты и перчатки во время эксперимента.
  5. Используйте ножницы и щипцы, чтобы сделать разрез 1 см боковой к средней линии и 1 см боковой к костным ребрам.
  6. Грубо вскрыть подкожную ткань с помощью щипков.
  7. Используйте рассекающие очки (см. таблицуматериалов) для выявления белой жировой ткани в брюшной полости.
  8. Используйте микроскиссоры и микросиловые, чтобы сделать разрез 0,5-1 см через фасцию до тех пор, пока брюшная полость не будет достигнута.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Для фиктивной группы, закрыть раны непосредственно. Шов мышечного слоя и кожи отдельно с помощью монофиломента шов.
  9. Когда белая жировая ткань в брюшной полости можно увидеть, захватить жировой ткани с помощью микроусилит и осторожно вытащить его. Розовый шелковицы формы яичника, завернутые жировой ткани в брюшной полости можно увидеть.
  10. Свайга 0,5-1 см проксимального сосуда и рог матки с помощью шва монофиламента. Удалить яичников с помощью микроскиссоров и поместить оставшиеся ткани обратно в брюшной полости.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Основными неблагоприятными симптомами операции OVX является перевязка мочеточника, которая приводит к высокой смертности у мышей, работающих на OVX. Этого можно избежать, идентифицируя ткани с помощью рассекающего очка.
  11. Закройте раны. Шов мышечного слоя и кожи отдельно с помощью монофиломента шов.
  12. Используйте ножницы и щипцы, чтобы сделать еще один разрез 1 см боковой к средней линии и 1 см боковой к костным ребрам на другой стороне. Повторите вышеупомянутую процедуру (1,5 - 1,11).
  13. Пусть животное проснется от анестезии. Отдельно держите мышь в первый день после операции.
  14. Очистите или замените клетку часто во время фазы восстановления.
  15. Приблизительно 24 ч после операции, управлять еще 5 мг/кг массы тела обезболиваще карпрофен подкожно.

2. Пероральная администрация 17-эстрадиола или PPD через спред фундука

  1. Тщательно растворите 17-эстрадиол или PPD в кунжутном масле, а затем смешайте кунжутное масло с распространением фундука (см. Таблицаматериалов). Ежедневная порция на каждые 30 г мыши содержит 3 мкг 17-эстрадиола или 15 мкг PPD, 4 л кунжутного масла и 60 мг распространения фундука. Приготовьте плацебо для каждого 30 г мыши содержит 4 л кунжутного масла и 60 мг фундука.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Ежедневная административная часть 17-эстрадиола или PPDбыла основана на предыдущих исследованиях 6,11 и предварительных экспериментах.
  2. Через неделю после OVX, кормить мышей с высоким содержанием холестерина диеты (1,25% холестерина, 0% холата) в течение 12 недель. Типичная экспериментальная схема лечения, используемая в данном исследовании, иллюстрируется на рисунке 1.
  3. За 5 дней до перорального введения фундука распространяется на 4 неделе, поезд мышей есть плацебо, содержащее примерно 30 мг фундука распространения на 2-5 мышей в течение 5 дней. Тренируйте мышей группами в их домашних клетках в течение первых 3 дней. Поместите мышей в отдельные клетки на четвертый и пятый дни обучения и служить ежедневной части напоминают экспериментальную ситуацию.
  4. В течение последних 9 недель, место мышей в отдельных клетках, а затем служить ежедневночасть фундука распространения части для каждого случая кормления.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Подавать дневную порцию, содержащую 17-эстрадиол (0,1 мг-кг-1) или PPD (0,5 мг кг-1) через фундук распространяется в OVX/E2 и OVX/PPD группы соответственно; служить ежедневной порции, содержащей гормонов, свободного фундука распространения в группе SHAM и OVX.

3. Определение толщины Интима-медиа и сердечной дисфункции с помощью микроультрасистемы

  1. Ультрасонографическая биомикроскопия
    1. За день до прекращения, изучить интима-медиа толщина и сердечной дисфункции с помощью микроультрасистемы (см. Таблица материалов), как ранее описано21.
    2. Перед обследованием, дать каждой мыши 200 мг/кг интраперитонеальной инъекции авертина (трибромоэтанол) в качестве анестезии (n - 8 мышей на группу).
    3. Тщательно брить волосы на шее каждой мыши. Нанесите теплый гель ультразвуковой передачи либерально, чтобы обеспечить оптимальное качество изображения.
    4. Получить базовые ультрасонографические изображения корня аорты и восходящей аорты с 30 МГц сканировать голову на 12,7 мм фокус и разрешение 40 мкм.
    5. Используйте электрокардиографию с конфигурацией свинца II для мониторинга.
    6. Захват правой парастернальной длинной оси изображения восходящей аорты, аорты арки, и брахиоцефалической ветви артерии в одной плоскости в систоле(Рисунок 3).
  2. Измерения интима-медиа и максимальной толщины налета
    1. Отрегулируйте расстояние между преобразователем и артериальным местом легко получить четкие изображения.
    2. Храните 10 s cine петлю в цифровом виде для автономного рассмотрения в системе анализа изображений.
    3. Выберите оптимальное ультрасонографическое изображение замораживания кадра вручную для дальнейших измерений. Проверьте изображения в незначительной кривизне восходящей аорты. Если можно увидеть бляшки в восходящей аорте, измерьте максимальную толщину бляшки. Если бляшки в восходящей аорте не видно, измерьте максимальный IMT.
    4. Измерьте IMT (расстояние между сосудистым светило-интимным интерфейсом и медиально-авантюрным интерфейсом). Измерьте максимальную толщину налета (самое максимальное расстояние между границей сосудистого просвета и авантюрного слоя).
    5. Средние данные с трех сайтов поражения(рисунок 3).
  3. Определение сердечной дисфункции с помощью эхокардиографии
    ПРИМЕЧАНИЕ:
    Изучите сердечную функцию с помощью эхокардиографии с помощью микроультрасистемы, как описано ранее22.
    1. Направьте ультразвуковой луч к сердцу, вблизи папиллярных мышц.
    2. Достижение двухмерной визуализации килогерца на основе электрокардиограммы.
    3. Выполните в vivo трансторакальной эхокардиографии левого желудочка с помощью 30 МГц сканировать голову.
    4. Измерьте параметры, связанные с сердечной функцией в цифровом виде с помощью трассировки M-mode.
    5. Среднее значение данных от трех до пяти сердечных циклов(таблица 1).
  4. Вариабельность внутри- и интернаблюдателя
    1. Для проверки изменчивости intraobserver проанализируйте данные одним оператором в двух разных случаях.
    2. Для оценки изменчивости интернаблюдателя проанализируйте данные другим оператором.

4. Еженедельное измерение веса тела и гласного общего холестерина (TC) и триглицеридов (TG) Определение

  1. Еженедельное измерение массы тела
    1. Измеряйте массу тела один раз в неделю с недели -1 до недели 12.
      ПРИМЕЧАНИЕ: n 8 мышей на группу.
  2. Плазменный препарат
    1. Перед сбором образцов крови через внутрикардийный прокол, подготовить шприцы и трубки. Используйте EDTA в качестве антикоагулянта. Добавьте 10 юл 0,5 М EDTA к каждому шприцу 2 мл, и добавьте 8 л 0,5 М EDTA к каждой трубке 1,5 мл.
    2. На 12-й неделе, после ночного поста, анестезируйте мышей с авертином (трибромоэтанол; 200 мг/кг; интраперитоненалически).
      ПРИМЕЧАНИЕ: n - 3 мышей на группу.
    3. Подготовка брюшной области груди с 70% этанола.
    4. Используйте ножницы и щипцы, чтобы открыть грудной полости и сократить ребра, пока бьющееся сердце подвергается.
    5. Вставьте 25 G иглу в правый желудочек. Медленно аспирировать, пока кровь не начнет поступать в шприц.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Мы используем одноразовые шприцы в стерильном состоянии с 25 G иглы (см. Таблица материалов).
    6. Продолжайте аспиратовать с устойчивым, даже давление. Если кровь не видна, перемещайте иглу и повторите устремление.
    7. Держите мышей глубоко обезвраженный перед сбором необходимого объема крови. Как правило, до 1 мл крови могут быть собраны. Эвтаназия мышей путем вывиха шейки матки при этом глубоком анестетике.
    8. Pipette образцы крови в 1,5 мл труб и инвертировать кровь тщательно, чтобы обеспечить смешивание ЭДТА в крови. Затем поместите образцы крови на лед немедленно.
    9. Образцы центрифуги в течение 20 мин при 400 х г при 4 кв. м в пределах 30 минут от сбора.
    10. Соберите супернатант тщательно. Aliquot и хранить образцы плазмы при -80 градусах Цельсия.
  3. Построить стандартные кривые для измерения содержимого ТС или ТГ
    1. Для стандартной кривой ТК подготовьте различные концентрации холестериновых стандартов: 0 ммоль/л, 0,52 ммоль/л, 1,03 ммоль/л, 2,07 ммоль/л, 4,14 ммоль/л, 6,20 ммоль/л, 8,27 ммоль/л и 10,34 ммоль/л. Установите средний O.D. для каждого стандарта холестерина. Как вертикальное значение (Y) оси, установите концентрацию в качестве горизонтального значения оси (X). Создайте стандартную кривую с помощью статистического программного обеспечения.
    2. Для стандартной кривой TG подготовьте различные концентрации стандартов TG: 0 ммоль/л, 0,45 ммоль/л, 0,90 ммоль/л, 1,81 ммоль/л, 3,62 ммоль/л, 5,42 ммоль/л, 7,23 ммоль/л и 9,04 ммоль/л. Установите средний O.D. для каждого стандарта TG в качестве вертикального значения оси (Y); установленная концентрация в качестве горизонтального значения оси (X). Создайте стандартную кривую с помощью статистического программного обеспечения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Для построения стандартной кривой в настоящем исследовании для стандартной кривой была использована четырехпопарамическая кривая (4-пл). Проверьте стандартную кривую перед измерением образцов плазмы и убедитесь, что r2 больше, чем 0,995.
  4. Измерение содержания ТС
    1. Этикетка бутылку цветного реагента (25 мл) из Комплекта TC анализ, как "TC Рабочее решение".
    2. Vortex рефрижераторные образцы кратко. Подготовка разбавления: 20 л плазмы в 80 л дистиллированной воды. Кратко разбавления вихрей.
    3. Добавьте 2,5 л холестериновых стандартов (5,17 ммоль/л) или 2,5 л разбавленной плазмы или 2,5 л дистиллированной воды (пустой) к соответствующим скважинам 96-хорошей пластины. Рекомендуется трипликация.
    4. Ко всем скважинам добавьте 250 л цветного реагента.
    5. Инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение 10 мин.
    6. Включите микроплиту и дайте 10 минут согреться.
    7. Удалите пластину (ы) из инкубатора и прочитайте считыватель микроплит на 510 нм. Убедитесь, что пузырьки или пыль не присутствуют в скважинах микротитера или в нижней части пластины, соответственно.
    8. Рассчитайте концентрацию ТС следующим образом:
      TC cont. - холестериновые стандарты cont. (плазменный образец O.D.-blank O.D)/(холестериновые стандарты O.D.-blank O.D)
  5. Измерение содержания TG
    1. Этикетка бутылку цветного реагента (25 мл) из TG анализ комплекта как "TG Рабочее решение".
    2. Vortex рефрижераторные образцы кратко.
    3. Добавьте 2,5 л стандартов TG (2,26 ммоль/л) к 2,5 л разбавленной плазмы или 2,5 л дистиллированной воды (пустой) к соответствующим скважинам 96-хорошей пластины. Рекомендуется трипликация.
    4. Ко всем скважинам добавьте 250 л цветного реагента.
    5. Инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение 10 мин.
    6. Включите микроплиту и дайте 10 минут согреться.
    7. Удалите пластину (ы) из инкубатора и прочитайте считыватель микроплит на 510 нм.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что пузырьки или пыль не присутствуют в скважинах микротитера или на дне пластины.
    8. Рассчитайте концентрацию TG следующим образом:
      TG cont. - TG стандарты cont. (плазменный образец O.D.-пустой O.D)/(TG стандарты O.D.-пустой O.D)

5. Ан анализ лица атеросклеротических поражений

  1. Изоляция аорты и иссечение
    1. На 12-й неделе, после ночного поста, анестезируйте мышей с авертином (трибромоэтанол; 200 мг/кг; интраперитоненалически). Эвтаназия мышей путем вывиха шейки матки при этом глубоком анестетике.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Мы использовали 3 мышей на группу.
    2. Подготовка брюшной области груди с 70% этанола. Используйте ножницы и щипцы, чтобы открыть грудной полости и сократить ребра, пока бьющееся сердце подвергается.
    3. Заполните 50 мл шприц с фосфатбуферным сольниковприпа при рН 7.4 (см. Таблицаматериалов). Вставьте 25 G иглы в левый желудочек и вырезать правое предсердие, чтобы избежать высокого давления от перфузии.
    4. Выполняйте на месте перфузию при скорости потока 0,05-0,08 мл/мин. Абсорбить перфузийную жидкость с тканями.
    5. Удалить ребра и легкие в грудной полости с ножницами и щипками. Затем откройте брюшную полость и удалите органы внутри для лучшего обзора аорты.
    6. Удалите аорту, удерживая сердце с микрофорспы и отделяя аорту от позвоночника дорсально с microscisssors до подвздошной бифуркации.
      ПРИМЕЧАНИЕ: При вскрытии вблизи почечной ветви предсердий, вырезать глубоко с помощью микросциссоров, чтобы избежать повреждения аорты.
    7. Исправить сердце и аорту на 48 ч в 4% параформальдегида. Храните аорты в сольнике при комнатной температуре или при температуре 2-8 градусов по Цельсию в течение нескольких часов.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Эта процедура облегчит очистку.
  2. Подготовка аорты
    1. Удалите сердце. Тщательно удалите авантюрные ткани из аорты с помощью микрощипнов и микросциссоров под стереомикроскоп. Используйте солин, чтобы сохранить ткань влажной во время очистки.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Будьте осторожны, чтобы не рвать или ник аорты и некоторых важных ветвей, таких как неназначенная артерия, оставил общую сонную артерию, и левой подклавиане артерии.
    2. Оставьте 1 мм неноминности и оставьте общие сонных артерий и отрежьте всю левую подклавианную артерию.
    3. Отрежьте внешнюю кривизну через неназначенную артерию, затем в левую общую сонную артерию, а затем в левую подклавианную артерию.
    4. Разрежьте вдоль внутренней кривизны восходящей части к нижней части брюшной части.
    5. Прикрепите аорту на черный пластиковый лист и нанесите солен, чтобы аорты не высыхать.
  3. Изображение интимной области аорты
    1. Сфотографируйте ан лицо аорты со стерео микроскопом. Включите линейку миллиметровой шкалы в изображения для калибровки измерений.
    2. Включите арки и грудной области в том же изображении и брюшной области в другой. Сохранение изображений как JPEG или TIFF.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Область арки находится от стыка миокарда до 3 мм дистальной от левой подклавской артерии, грудная область 3 мм дистальная к левой субклавианской артерии до последней межреуальной артерии, а брюшная область является последней межреберной артерией до подвздошной артерии до подвздошной артерии Бифуркации.
  4. Количественная оценка атеросклеротического метода поражения лица
    1. Калибровки
      1. Откройте изображение с помощью программного обеспечения для анализа изображений (см. ТаблицуМатериалов), перейдите к пространственной калибровке и следуйте инструкциям.
      2. Измените эталонные единицы на мм, позиционируя линейку над линией.
    2. Измерения
      1. Установите правильную калибровку для каждого изображения.
      2. Мера 3 мм на линейке.
      3. Измерение арочной и грудной области: Очертивай область арки от стыка миокарда до 3 мм дистальной от левой субклавианской артерии и грудной области от 3 мм дистальной до левой субклавианской артерии до последней межреберной артерии. Следы поражений в арке и грудной области и смотреть на аорту через микроскоп.
      4. Измерение брюшной области: Очертание области брюшной полости от конца грудной области до подвздошной бифуркации. Следы поражения в области брюшной полости и смотреть на аорту через микроскоп.
      5. Рассчитайте область поражения относительно внутренней поверхности аорты.
      6. Проверить количественную оценку через второго наблюдателя, который слеп к исследовательским группам.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Типичная экспериментальная схема лечения, используемая в данном исследовании, иллюстрируется на рисунке 1. При отъеме (возраст 28 дней) самки апоэ-/- C57BL/6J мышей обезболилили савертином (трибромоэтанол; 200 мг/кг; интраперитонена). Мыши были двусторонние OVX или фиктивных работает через 1 см торсальный разрез. Через неделю после двустороннего OVX, мышей кормили высоким содержанием холестерина диеты (1,25% холестерина, 0% холата) в течение 12 недель. 17-Эстрадиол (0,1 мг-кг-1) или PPD (0,5 мг кг-1) был перорально вводили параллельно через распространение фундука в течение последних 9 недель лечения. Все мыши взвешивались еженедельно. Как показано на рисунке 2, влияние как экзогенных эстрогенов (17 -эстрадиол и PPD) на липиды плазмы и еженедельный вес тела apoE-/- мышей после дефицита эстрогена были оценены. После 12 недель диеты с высоким содержанием холестерина, OVX мышей показали значительное увеличение концентрации ТС плазмы и ТГ. OVX мышей перорально вводят с 17 "эстрадиол или PPD через фундук распространения выставлены значительно ниже концентрации ТС плазмы, чем фиктивные мыши (Рисунок 2A). Уровни ТГ плазмы снизились у OVX мышей перорально вводят с 17 "эстрадиол, но не с PPD (Рисунок 2B). Как показано на рисунке 2C, в то время как тенденция к увеличению массы тела (BW) наблюдалась у мышей OVX по сравнению с фиктивными мышами, BW у мышей OVX перорально вводят с 17-эстрадиола или PPD через фундук распространения после высокой холестериновой диеты показал тенденцию напротив, что в OVX мышей. Однако окончательный вес тела мышей в разных группах не показал никаких существенных изменений.

Сердечно-сосудистая функция оценивалась с помощью эхокардиографии. Как показано на рисунке 3, максимальный налет или IMT восходящей аорты был измерен в OVX мышей перорально вводят с 17-эстрадиол или PPD через фундук распространения. Аортальная арка высокохолестерин-диета кормили apoE-/- мышей наблюдались B-режим эхокардиографии. Представительные продольные изображения восходящей аорты были захвачены ультрасонографической биомикроскопией. Красные стрелки указывают на бляшки. OvX мышей выставлены увеличение максимального налета или IMT восходящей аорты по сравнению с фиктивными мышей. После перорального введения 17-эстрадиола или PPD через распространение фундука, максимальный налет или IMT восходящей аорты заметно уменьшился по сравнению с OVX мышей. (Рисунок 3). Мы также наблюдали сердечную дисфункцию в ответ на OVX в apoE-/- мышей после 12-недельного кормления с высоким содержанием холестерина диеты (Таблица 1). Сердечная функция была обследована с помощью эхокардиографии. У мышей OVX пероральная администрация 17-эстрадиола или PPD с помощью распространения фундука может частично утихать параметры, показывающие сердечную дисфункцию.

Далее, мы использовали АН анализ лица для определения аортических атеросклеротических поражений. Как сообщалось ранее, после 12 недель, с высоким содержанием холестерина диета привела к образованию атеросклеротических бляшек на световой поверхности аорты. Как показано на рисунке 4, средний процент области поражения аорты по отношению ко всей области аорты значительно увеличилось в OVX мышей. После перорального введения с 17-эстрадиол или PPD через фундук распространения, аортального поражения области удивительно снизилась по сравнению с OVX мышей коллегой. Этот результат согласуется с защитой 17-эстрадиола или PPD от развития атеросклероза, представленного на рисунке 3.

В заключение, предлагаемая процедура, которая использует двустороннюю овариэктомию через двойной торсальный боковой разрез у апоЭ-/- мышей, применима для скрининга неинвазивного экзрогена эстрогенного лечения сердечно-сосудистой дисфункции после менопаузы. Это также особенно полезно для избежания вредных опухолевых способностей.

Figure 1
Рисунок 1. Схема лечения мышью. При отъеме (возраст, 28 дней) самка апоэ-/- C57BL/6J мышей обезболяли с авертином (трибромоэтанол; 200 мг/кг; интраперитонена). Мыши были двусторонней ovariectomized (OVX) или фиктивных работает через 1 см торсальный разрез. Через неделю после OVX, мышей кормили высоким содержанием холестерина диеты (1,25% холестерина, 0% холата) в течение 12 недель. 17-Эстрадиол (0,1 мг-кг-1) или PPD (0,5 мг кг-1) был перорально вводили параллельно через распространение фундука в течение последних 9 недель лечения. Все мыши взвешивались каждую неделю. На 12-й неделе анализ сердечно-сосудистой функции оценивался с помощью эхокардиографии. После 12 недель диеты с высоким содержанием холестерина, все мыши были усыплены, и образцы крови и тканей были собраны для дальнейшего исследования. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Figure 2
Рисунок 2. Воздействие различных экзрогенов на липиды плазмы и еженедельный вес тела у апоэ-/- мышей. Шам-мышей перенесли инсценировку и получили высокохолестериновую диету. OVX мышей прошли двустороннюю овариэктомию, а затем случайным образом разделить на следующие группы: группа OVX, которая лечилась с высоким содержанием холестерина диеты; группа OVX/E2 (17-эстрадиол), которая получала диету с высоким содержанием холестерина в течение 12 недель плюс 0,1 мг/кг E2 через пероральный адиз через распространение фундука в течение последних 9 недель лечения; и группы OVX/PPD, которая получала диету с высоким содержанием холестерина в течение 12 недель плюс 0,5 мг/кг PPD через пероральный адизвена через распространение фундука в течение последних 9 недель лечения. Общий уровень холестерина и триглицеридов плазмы измерялся с помощью ферментативных методов(A-B). Данные выражаются в качестве средства , SEM n и 5 мышей на группу. Еженедельные веса тела измерялись от недели-1 до недели 12 (C ). Данные выражаются в качестве средства, которые являются средствами для НЕ 8 мышей на группу. Односторонний ANOVA, за которым последовал пост-специальный тест Даннетта, был проведен для нескольких сравнений. - р-р злт; 0,05 по сравнению с фиктивной группой; # p злт; 0,05 по сравнению с группой OVX. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Figure 3
Рисунок 3. IMT или максимальные измерения толщины налета у апоэ-/- мышей. Представлены B-режимные изображения, показывающие аортированную арку апоэ-/- мышей. Продольные изображения восходящей аорты были получены с помощью ультрасонографической биомикроскопии. Измерялся максимальный бляшки или IMT восходящей аорты (мм). Ультрасонографические изображения показывают бляшку в минорной кривизне восходящей аорты; красные стрелки указывают на бляшки. Данные выражаются в виде среднего значения - SEM n - 8 мышей на группу. Односторонний ANOVA, за которым последовал пост-специальный тест Даннетта, был проведен для нескольких сравнений. - р-р злт; 0,05 по сравнению с фиктивной группой; # p злт; 0,05 по сравнению с группой OVX. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Figure 4
Рисунок 4. Ан анализ лица атеросклеротических поражений у апоэ-/- мышей. Средний процент аорты области поражения по отношению ко всей области аорты была количественно во всех группах. Показаны репрезентативные микрографы интимальных поражений (ан-лицо) аорты. Данные выражаются в виде среднего значения - SEM n - 3 мышей на группу. Односторонний ANOVA, за которым последовал пост-специальный тест Даннетта, был проведен для нескольких сравнений. - р-р злт; 0,05 по сравнению с фиктивной группой; # P злт; 0,05 по сравнению с группой OVX. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Шам OVX OVX/E2 OVX/PPD
LVIDD (мм) 3,72 х 0,10 евро 3,74 и 0. 24 3,68 и 0,16 3,88 и 0,16
LVIDs (мм) 2,34 и 0,11 2,16 и 0,22 2,12 и 0,13 2,55 и 0,12евро
IVSd (мм) 0,83 и 0,09 0,84 и 0,07 0,91 и 0,05 0,74 и 0,06евро
ИВС (мм) 1,24 и 0,02 1,35 х 0,06 1,45 и 0,04евро 1,09 и 0,04евро
PWTd (мм) 0,7 евро 0,10 0,68 и 0,04 0,72 и 0,07 0,58 и 0,07евро
PWTs (мм) 1,10 и 0,12 1,17 и 0,08 1,24 и 0,04 0,98 и 0,08
EDV (мм3) 58,89 х 3,74 59,88 х 9,02 57,39 х 5,79 65,11 и 6,13
ESV (мм3) 18,86 и 2,17 15,75 х 4,00 14,85 х 2,37 23.45 - 2,64
EF (%) 67,84 х 1,52 73.91 (3 .63) 74,23 х 1,50 63,91 и 3,61
FS (%) 37.19 - 1,53 42.22 - 1,17 42,36 х 1,21 34.28 - 2,69
LVIDd - LV внутренний диаметр во время диастолии; LVIDs - LV внутренний диаметр во время систолы; IVSd - внутренняя желудочковая перегородка во время диастоли; ИВС - внутренняя желудочковая перегородка во время систолы; PWTd - толщина задней стены во время диастоли; PWTs - толщина задней стены во время систолы; EF - фракция выброса; FS - дробное сокращение; EDV - конечный диастолический объем; ESV - конечный систолический объем.

Таблица 1: Оценка сердечной функции с помощью эхокардиографии. Параметры, связанные с сердечной функцией в цифровом виде из трассировки M-mode, были количественно определены во всех группах. Данные выражаются в виде среднего значения - SEM n - 8 мышей на группу. Односторонний ANOVA, за которым последовал пост-специальный тест Даннетта, был проведен для нескольких сравнений. - р-р злт; 0,05 по сравнению с фиктивной группой; # p злт; 0,05 по сравнению с группой OVX.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Методология, описанная здесь, представляет собой модель мыши, напоминающую нарушение липидов и атеросклероз, наблюдаемый у женщин в период менопаузы. Хорошо документировано, что дефицит эстрогена у женщин в постменопаузе может усугубить заболеваемость уже существующих или текущих гиперхолестеринемии с постепенно сложными и широко распространенными атеросклерозными поражениями1. Для имитации атеросклероза подверженного статусу в клинике, апоэ-дефицитных мышей, воспроизводимый и удобный источник животных, с которым для изучения атерогенеза23,24,25, были применены. Как показано в настоящем исследовании, самка OVX apoE-/- мышей при отлучении отображала увеличение атеросклеротических поражений в аорте по сравнению с женским апое-/- мышами с нетронутой функцией яичников. В этой животной модели, мы также сравнили влияние различных экзогенных эстрогенов заместительной терапии на атеросклеротических размер поражения при контролируемом диетическое состояние.

Двойной торсал-боковой разрез двусторонней овариэктомии, представленный в данной статье, технически проще, меньше времени и безопаснее по сравнению со средним торсалом-боковом разрезом или средним разрезом брюшной полости двусторонней овариэктомии в апоЕ-/- мышей. Двусторонняя овариэктомия через средний разрез брюшной полости представляет собой серьезный недостаток: она может вызвать серьезные сцепление полости живота, что, в свою очередь, может повлиять на усвоение наркотиков. Последние отчеты показывают, что пероральный введение низкой дозы 17 "эстрадиол защищает от церебральной ишемии26. Таким образом, мы выбрали пероральный администрации через распространение фундука в настоящем исследовании. Коммерческие медленно-релиз гранулы часто используется режим администрирования для тестирования фармакологических эффектов в мышиной модели, но может привести к пагубным повреждениям головного мозга27. Имплантаты подвержены инфекциям, особенно если мыши подвергаются двусторонней OVX через двойной локотевой боковой разрез. Хотя тщательная дезинфекция кожи до разреза выполняется, инфекции трудно избежать. Управление водными ресурсами и устные gavage два менее часто используемых методов, которые были протестированы. Администрирование гормона через питьевую воду является весьма полезным из-за его чрезвычайно неинвазивным, потому что почти не животных обработки не требуется. Тем не менее, 17-эстрадиол не растворим в воде без эмульгатора. Таким образом, мы использовали DMSO в концентрации менее 0,5% для облегчения его решения в питьевой воде. Однако такой подход к долгосрочному администрированию низкодозного ДМСО трудно контролировать и токсичен для мышей или людей. Мыши могут также пить воду в течение всего 24 ч наблюдения, что делает фактическое потребление наркотиков трудно определить. Другим недостатком такого подхода является то, что потребление воды человека трудно контролировать. Самый большой недостаток устные gavage является то, что это стресс для животных и может привести к травмам пищевода и повлиять на пищевое поведение. В методологии, описанной здесь, 5-дневная тренировка еды гормон-свободно фундука спреда перед экспериментом была дирижирована. Приблизительно более 95% мышей примут распространение фундука, если их обучают как то, что упоминается в разделе протокола. После того, как полностью привыкли, большинство мышей будет потреблять его в течение нескольких секунд. В соответствии с предыдущим исследованием6,11, уровень плазмы E2 снизился в OVX мышей по сравнению с фиктивным аналогом на неделе 4 (данные не показаны). На 12-й неделе после определения мы наблюдали атрофию матки у мышей, управляемых OVX. Однако, циркулирующие уровни эстрогена не были проверены после OVX в настоящем исследовании.

При отсутствии обнаружения атеросклеротических поражений в восходящей аорте, аортальный IMT можно оценить путем измерения расстояния между люмен-интимным интерфейсом и медиаль-авантюриальным интерфейсом. Это измерение основано на ранее проверенном протоколе у людей28. Средние данные с трех сайтов, которые примерно 100 мкм друг от друга. Сердечная рабочая нагрузка увеличивается после OVX в apoE-/- мышей может из-за компенсационного гипертрофического роста отдельных кардиомиоцитов, которые в конечном итоге может привести к увеличению сердечного выхода (Таблица 1). Принимая во то время, что при пероральной администрации PPD в течение 9 недель, компенсационная сердечная гипертрофия была ослаблена с EF% сопоставимы с фиктивным аналогом. Для проверки изменчивости внутри- или межнаблюдателя проанализируйте коэффициенты вариации для измерений атеросклеротической толщины и параметров, связанных с сердечной функцией одним оператором в двух разных случаях или другим оператором.

Как представлено в нашем исследовании, OVX мышей перорально вводят с 17"-эстрадиол или PPD через фундук распространения, как правило, для предотвращения увеличения веса тела и уменьшить дефицит эстрогена связанных липидных нарушения, хотя никаких существенных различий в окончательной массы тела были Наблюдается. Предыдущие исследования также показали, что изменение параметров липидов может быть слишком незначительным, чтобы объяснить антиатеросклеротические эффекты гормонов29. Благотворное воздействие эстрогена не ограничивается изменениями в свойствах липидного белка. Некоторые нелипидные эффекты эстрогена30,31, такие как воспаление, эндотелиальная дисфункция, и гемодинамический застой, может облегчить сердечно-сосудистой защиты при болезни человека. Учитывая результаты, наблюдаемые в настоящем исследовании, защита экзогенного эстрогена от развития атеросклероза частично не зависит от системного уровня липидов. В эндотелиальных клетках PPD ингибирует выражения молекулы адгезии и воспалительных посредников (данные не показаны). Кроме того, PPD может подавлять образование периваскулярной жировой ткани, которая тесно связана с эндотелиальной антиконтрактной. Таким образом, действие PPD и 17-эстрадиола было различным, и основной механизм должен быть дополнительно изучен. Несомненно, чрезмерное потребление богатых энергией продуктов питания, таких как распространение фундука, может привести к набору веса. Тем не менее, небольшое количество фундука распространения (200 мг кг-1день-1), как упоминалось в настоящем исследовании может быть только ответственность за менее чем 5% от ежедневного потребление энергии животных. Кроме того, не очевидное увеличение веса было обнаружено с помощью этого количества фундука распространения. Использование 17-эстрадиола и PPD было главным образом для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Потому что, во время прогрессирования атеросклероза в OVX-управляемый aopE-/- мышей, от недели 4 до недели 12, 17-эстрадиола или PPD был perorally administered.

Один незначительный момент клинического использования ЗГТ является его пагубные побочные эффекты, которые включают рак яичников и молочной железы13,14. Фитоэстроген, проверенный в настоящем исследовании, является стероидным соединением сапонина, найденным в растениях Dioscorea. PPD, как сообщается, оказывает ингибирующее воздействие на некоторые линии раковых клеток20. Кроме того, PPD показывает антиатеросклеротические свойства, сопоставимые с свойствами 17-эстрадиола. Модель, которую мы представляем здесь, может помочь экранировать потенциальные соединения-кандидаты, включая фитоэстрогены, который оказывает минимальное влияние на пролиферацию опухоли.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторы не заявляют о конфликте интересов.

Acknowledgments

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (81202526 до J.X.), Национальным фондом естественных наук Китая (81302769 до B.S.), Пекинским муниципальным фондом естественных наук (47144226 до B.S.), Китайским постдокторским Научный фонд (20110490325 до J.X.), и Ph.D. Программы Фонда Министерства образования Китая (20121106120031 до B.S.).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
17β-estradiol, >98% Sigma-Aldrich E8875-250MG Estrogen
Disposable syringes (with 25 G needles) Hunan Luzhou Huikang Development Co., Ltd 0.5*19TWLB Cardiac bleeding
High-cholesterol mouse diet Huafukang Bio-Technology N/A 1.25% cholesterol, 0% cholate
High-Resolution In Vivo Micro-Imaging System VisualSonics Vevo®770 Measurements of intima-media thickness and cardiac dysfunction
2-Methyl-2-butanol Sigma-Aldrich 152463-250ML Preparation of avertin
Micro Dissecting forceps, Curved 8mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Micro Dissecting forceps, Straight 8 mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Micro Dissecting Scissors, Curved/Sharp 8 mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Micro Dissecting Scissors, Straight/Sharp 8 mm Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Monofilament suture 4-0 1/2 5 x 12 19 mm Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd R413 Suture and ligation of the tissues
Nut cream (Nutella) Ferrero N/A Medium for peroral 17β-estradiol or PPD
OptiVisor optical glass binocular magnifier Dohegan Optical Company Inc. N/A Assistant of identifying the tissues during ovariectomy
Phosphate-buffered saline at pH 7.4 SIGMA P3813 Preparing 1 L saline
Pro MultiLabel Microplate Reader Tecan Infinite M1000 Plasma TC and TG determination
Pseudoprotodioscin Shanghai Winherb Medical S & T Development W-0427 CAS registry no. 102115-79-7
Rimadyl, 50 mg/mL Pfizer Pharma GmbH 462986 Postoperative analgesia after ovariectomy
Sesame oil Sigma-Aldrich S3547-1L Dissolving the 17β-estradiol or PPD
Solcoseryl Eye-Gel Menarini, Solco Basle Ltd. Eye protection during anesthesia
Stereo microscope MCALON MCL-6STV Image of the intimal region of aorta
Table model high speed centrifuge SIGMA 1-14K Preparation of plasma
Scissors, slight Curve (14 cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Scissors, straight Flat (14 cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Tissue forceps, serrated, slight Curve (14 cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Tissue forceps, serrated, straight Flat (14 cm) Kanghua Medical Equipment Co., Ltd Surgical tools
Tribromoethanol Sigma-Aldrich T48402-5G Preparation of avertin
Triglycerides (TG) assay kit Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering A110-1 Plasma TG determination
Total cholesterols (TC) assay kit Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering A111-1 Plasma TC determination

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mozaffarian, D., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 133, (4), e38-e360 (2016).
  2. Packard, B. L. Cardiovascular health and disease in women. The New England Journal of Medicine. 329, (4), 247-256 (1993).
  3. Samaan, S. A., Crawford, M. H. Estrogen and cardiovascular function after menopause. Journal of the American College of Cardiology. 26, (6), 1403-1410 (1995).
  4. Libby, P. Inflammation in atherosclerosis. Nature. 420, (6917), 868-874 (2002).
  5. Tremollieres, F. A., et al. Effect of hormone replacement therapy on age-related increase in carotid artery intima-media thickness in postmenopausal women. Atherosclerosis. 153, (1), 81-88 (2000).
  6. Bourassa, P. A., Milos, P. M., Gaynor, B. J., Breslow, J. L., Aiello, R. J. Estrogen reduces atherosclerotic lesion development in apolipoprotein E-deficient mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93, (3), 10022-10027 (1996).
  7. Squadrito, F., et al. Genistein supplementation and estrogen replacement therapy improve endothelial dysfunction induced by ovariectomy in rats. Cardiovascular Research. 45, (2), 454-462 (2000).
  8. Wang, D., et al. Endothelial dysfunction and enhanced contractility in microvessels from ovariectomized rats: roles of oxidative stress and perivascular adipose tissue. Hypertension. 63, (5), 1063-1069 (2014).
  9. Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. Spontaneous Hypercholesterolemia and Arterial Lesions in Mice Lacking Apolipoprotein E. Science. 258, (5081), 468-471 (1992).
  10. Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. ApoE-Deficient Mice Develop Lesions of All Phases of Atherosclerosis Throughout the Arterial Tree. Arteriosclerosis and Thrombosis. 14, (1), 133-140 (1994).
  11. Ström, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. Ovariectomy and 17-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration. Journal of Visualized Experiments. 64, (e4013), 1-4 (2012).
  12. Rossouw, J. E., et al. Risks and benefits of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women: principal results From the Women's Health Initiative randomized controlled trial. The Journal of the American Medical Association. 288, (3), 321-333 (2002).
  13. Kumle, M. Declining breast cancer incidence and decreased HRT use. Lancet. 372, (9639), 608-610 (2008).
  14. Jager, W., et al. A randomized comparison of triptorelin and tamoxifen as treatment of progressive ovarian cancer. Anticancer Research. 15, (6B), 2639-2642 (1995).
  15. Bhathena, S. J., Velasquez, M. T. Beneficial role of dietary phytoestrogens in obesity and diabetes. The American Journal of Clinical Nutrition. 76, (6), 1191-1201 (2002).
  16. Wang, L., Qiu, X. M., Hao, Q., Li, D. J. Anti-inflammatory effects of a Chinese herbal medicine in atherosclerosis via estrogen receptor beta mediating nitric oxide production and NF-kappaB suppression in endothelial cells. Cell Death and Disease. 4, (e551), 1-13 (2013).
  17. Xiao, J., Wang, N. L., Sun, B., Cai, G. P. Estrogen receptor mediates the effects of pseudoprotodiocsin on adipogenesis in 3T3-L1 cells. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299, (1), C128-C138 (2010).
  18. Guivarc'h, E., et al. Predominant Role of Nuclear Versus Membrane Estrogen Receptor alpha in Arterial Protection: Implications for Estrogen Receptor alpha Modulation in Cardiovascular Prevention/Safety. Journal of the American Heart Association. 7, (13), 1-17 (2018).
  19. Osako, M. K., et al. Estrogen inhibits vascular calcification via vascular RANKL system: common mechanism of osteoporosis and vascular calcification. Circulation Research. 107, (4), 466-475 (2010).
  20. Ivanova, A., et al. Screening of some saponins and phenolic components of Tribulus terrestris and Smilax excelsa as MDR modulators. In vivo. 23, (4), 545-550 (2009).
  21. Xiao, J., Zhu, T., Yin, Y. Z., Sun, B. Notoginsenoside R1, a unique constituent of Panax notoginseng, blinds proinflammatory monocytes to protect against cardiac hypertrophy in ApoE(-/-) mice. European Journal of Pharmacology. 833, (15), 441-450 (2018).
  22. Sun, B., Xiao, J., Sun, X. B., Wu, Y. Notoginsenoside R1 attenuates cardiac dysfunction in endotoxemic mice: an insight into oestrogen receptor activation and PI3K/Akt signalling. British Journal of Pharmacology. 168, (7), 1758-1770 (2013).
  23. Adams, M. R., et al. Inhibition of coronary artery atherosclerosis by 17-beta estradiol in ovariectomized monkeys. Lack of an effect of added progesterone. Arteriosclerosis. 10, (6), 1051-1057 (1990).
  24. Keaney, J. F. Jr, et al. 17 beta-estradiol preserves endothelial vasodilator function and limits low-density lipoprotein oxidation in hypercholesterolemic swine. Circulation. 89, (5), 2251-2259 (1994).
  25. Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 14, (1), 133-140 (1994).
  26. Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats. American Journal of Physiology- Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 281, (5), R1531-R1539 (2001).
  27. Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 25, (3), 414-420 (2005).
  28. Pignoli, P., Tremoli, E., Poli, A., Oreste, P., Paoletti, R. Intimal plus medial thickness of the arterial wall: a direct measurement with ultrasound imaging. Circulation. 74, (6), 1399-1406 (1986).
  29. Hodgin, J. B., Maeda, N. Minireview: estrogen and mouse models of atherosclerosis. Endocrinology. 143, (12), 4495-4501 (2002).
  30. Bush, T. L., et al. Cardiovascular mortality and noncontraceptive use of estrogen in women: results from the Lipid Research Clinics Program Follow-up Study. Circulation. 75, (6), 1102-1109 (1987).
  31. Marsh, M. M., Walker, V. R., Curtiss, L. K., Banka, C. L. Protection against atherosclerosis by estrogen is independent of plasma cholesterol levels in LDL receptor-deficient mice. Journal of Lipid Research. 40, (5), 893-900 (1999).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics