एक Immunoperoxidase परख का उपयोग मानव Coronaviruses के अनुमापन

Published 4/28/2008
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Biology
 

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Summary

इस वीडियो में, हम और एक enzymatic प्रतिजन पहचान एक immunoperoxidase परख के रूप में जाना तकनीक का उपयोग वायरस का पता लगाने titering के लिए एक वैकल्पिक तरीका प्रदर्शित करता है. यहाँ, हम तुम्हें दिखाने के लिए, कैसे अपने वायरल नमूने एकत्र करने के लिए परीक्षण के लिए तैयार कोशिकाओं, और अंत में immunoperoxidase धारावाहिक dilutions का उपयोग करने के लिए वायरल टिटर निर्धारित परख.

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Lambert, F., Jacomy, H., Marceau, G., J. Talbot, P. Titration of Human Coronaviruses Using an Immunoperoxidase Assay. J. Vis. Exp. (14), e751, doi:10.3791/751 (2008).

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Abstract

संक्रामक वायरल titers की गणना एक बुनियादी और आवश्यक virologists के लिए प्रयोगात्मक दृष्टिकोण का प्रतिनिधित्व करता है. शास्त्रीय पट्टिका assays वायरस है कि महत्वपूर्ण cytopathic प्रभाव है, जो मानव coronavirus (HCoV) के 229E उपभेदों और OC43 के लिए मामला है कारण नहीं है के लिए नहीं किया जा सकता है. पता लगाने और इन वायरस के अनुमापन के लिए एक वैकल्पिक अप्रत्यक्ष immunoperoxidase परख (आईपीए) इस के साथ साथ वर्णित है. अतिसंवेदनशील कोशिकाओं के नमूने के एक 96 अच्छी तरह से थाली में सीरियल लघुगणक dilutions के साथ inoculated हैं. वायरल विकास के बाद, आइपीए द्वारा वायरल पता लगाने संक्रामक वायरस टिटर, "टिशू कल्चर संक्रामक खुराक" (TCID50) के रूप में व्यक्त की पैदावार. यह वायरस युक्त एक नमूना है जिस पर प्रयोगशाला कुओं की एक श्रृंखला के आधा नकल वायरस होते हैं के कमजोर पड़ने का प्रतिनिधित्व करता है. इस तकनीक जैविक नमूनों में HCoV के अनुमापन (कोशिकाओं, ऊतकों, या तरल पदार्थ) के लिए एक विश्वसनीय विधि है.

Protocol

इस प्रयोगात्मक दृष्टिकोण के लिए पूर्ण पाठ प्रोटोकॉल में उपलब्ध है स्प्रिंगर प्रोटोकॉल .

Erratum

Formal Correction: Erratum: Titration of Human Coronaviruses Using an Immunoperoxidase Assay
Posted by JoVE Editors on 04/01/2012. Citeable Link.

A correction was made to: Titration of Human Coronaviruses Using an Immunoperoxidase Assay. A revised abstract was republished due to a publisher error.

Revised Abstract:

Determination of infectious viral titers is a basic and essential experimental approach for virologists. Classical plaque assays cannot be used for viruses that do not cause significant cytopathic effects, which is the case for prototype strains 229E and OC43 of human coronavirus (HCoV). Therefore, an alternative indirect immunoperoxidase assay (IPA) was developed for the detection and titration of these viruses and is described herein. Susceptible cells are inoculated with serial logarithmic dilutions of virus-containing samples in a 96-well plate format. After viral growth, viral detection by IPA yields the infectious virus titer, expressed as 'Tissue Culture Infectious Dose 50 percent' (TCID50). This represents the dilution of a virus-containing sample at which half of a series of laboratory wells contain infectious replicating virus. This technique provides a reliable method for the titration of HCoV-229E and HCoV-OC43 in biological samples such as cells, tissues and fluids. This article is based on work first reported in Methods in Molecular Biology (2008) volume 454, pages 93-102.

Original Abstract:

Calculation of infectious viral titers represents a basic and essential experimental approach for virologists. Classical plaque assays cannot be used for viruses that do not cause significant cytopathic effects, which is the case for strains 229E and OC43 of human coronavirus (HCoV). An alternative indirect immunoperoxidase assay (IPA) is herein described for the detection and titration of these viruses. Susceptible cells are inoculated with serial logarithmic dilutions of samples in a 96-well plate. After viral growth, viral detection by IPA yields the infectious virus titer, expressed as "Tissue Culture Infectious Dose" (TCID50). This represents the dilution of a virus-containing sample at which half of a series of laboratory wells contain replicating virus. This technique is a reliable method for the titration of HCoV in biological samples (cells, tissues or fluids).

Comments

3 Comments

  1. Nice job!!!

    We would like to titer OC43 coronavirus strain and we don't have specific antibodies, do you have any alternative solution for titering it.

    Thank you for your consideration

    Gael Belliot, PhD

    Laboratory of Virology
    CHU Dijon France

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 3, 2009 - 11:11 AM
  2. Unfortunately, as the classical plaque assays cannot be used for human coronavirus OC-43, you have to use antibodies for IP detection (some are available commercially).

    Sincerely

    Helene jacomy

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 3, 2009 - 1:53 PM
  3. Thanks

    GB

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 12, 2009 - 3:23 PM

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