Dissociare cellule di tipi di tessuto specifico richiede parametri specifici per l'agitazione dei tessuti per ottenere un elevato volume di vitali, cellule coltivabili. Il Miltenyi gentleMACS dissociatore ottimizza questa operazione con un semplice protocollo pratico. In questa pubblicazione l'utilizzo di questo apparecchio sul tessuto polmonare viene spiegata.
Abstract
La preparazione di singole cellule dai tessuti sospensioni è un presupposto importante per molti esperimenti nel campo della ricerca cellulare. Il processo di dissociazione organi interi richiede specifici parametri per ottenere un elevato numero di cellule vitali in modo riproducibile. Il dissociatore gentleMACS ottimizza questa operazione con un semplice protocollo pratico. Lo strumento contiene le impostazioni pre-programmate che sono ottimizzati per la dissociazione efficiente ma gentile di una varietà di tipi di tessuto, tra cui i polmoni del mouse. In questa pubblicazione l'utilizzo del dissociatore gentleMACS sul tessuto polmonare derivati da topi è dimostrata.
Protocol
Per lavorare in condizioni sterili, si raccomanda di eseguire tutti i passaggi in una cappa a flusso laminare. 1. Materiale HEPES tampone: 10 mm HEPES-NaOH pH 7.4, 150 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1,8 mM CaCl 2) Collagenasi soluzione D: D Collagenasi: 100 mg / ml (Collagenasi D> 0,15 U / mg), in HEPES tampone DNasi I soluzione: 20.000 U / mL DNasi I Tampone PBS a pH 7,2 PEB buffer: 1 parte di soluzione stock BSA in…
Discussion
In questo video, si introduce un nuovo metodo per la dissociazione del tessuto polmonare mouse. Abbiamo dimostrato che una combinazione di trattamento meccanico ed enzimatica del tessuto polmonare ha prodotto un alta percentuale di leucociti vitali e cellule endoteliali. In particolare, la disintegrazione meccanica del tessuto è stato ottenuto il dissociatore gentleMACS. I tubi C gentleMACS includono un rotore – sistema dello statore, che il tessuto si dissocia in modo gentile. La procedura è controllata dalle imposta…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori sono dipendenti di Miltenyi Biotec GmbH, Germania.
Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator. J. Vis. Exp. (29), e1266, doi:10.3791/1266 (2009).