Summary

标准化的制备小鼠肺组织单细胞悬浮液使用gentleMACS Dissociator

Published: July 02, 2009
doi:

Summary

游离特定的组织类型的细胞,组织鼓动的具体参数,以获得一个可行的,可培养细胞的高容量。美天旎gentleMACS dissociator优化这个任务简单,实用的协议。在本出版物中使用本仪器对肺组织进行了解释。

Abstract

从组织单细胞悬液的制备细胞研究中的许多实验的重要前提。游离整个器官的过程中,需要在特定的参数,在重现的方式获取大量的活菌。 gentleMACS Dissociator优化这个任务简单,实用的协议。该仪器包含预编程的优化设置的多种组织类型,包括小鼠肺的效率,但温和的分解。在本出版物中使用从小鼠的肺组织gentleMACS Dissociator证明。

Protocol

若要在无菌条件下,它是建议执行层流罩中的所有步骤。 1。材料 HEPES缓冲液:10毫米HEPES – NaOH溶液pH值7.4,150 mM氯化钠,氯化钾5毫米,1毫米MgCl 2的 ,1.8毫米氯化钙2) 胶原酶D解决方案:胶原酶D:100毫克/毫升(胶原酶ð> 0.15 U /毫克),在HEPES缓冲 DNA酶我的解决方案:2万U / mL的DNA酶我在pH 7.2的PBS缓冲液 PEB的缓冲区:BSA在20…

Discussion

在这个视频中,我们引入一个新的小鼠肺组织的分离方法。我们展示的机械和酶治疗肺组织结合,取得了一个可行的白细胞和内皮细胞的高比例。具体来说,组织机械解体取得gentleMACS Dissociator。 gentleMACS彗星管包括一个转子 – 定子系统,它游离在一种温和的方式组织。过程控制仪器的程序设置。这些设置进行了优化,实现高产和细胞活力。派生的单细胞悬液与CD45 – PE,CD146 – FITC或CD31 – FITC染色和?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

作者是德国美天旎生物技术公司,雇员。

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
C Tubes   Miltenyi Biotec Order no. 130-093-237 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx
gentleMACS™ Starting Kit   Miltenyi Biotec Order no. 130-093-235 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx
MACSmix™ Tube Rotator   Miltenyi Biotec Order no. 130-090-753 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx
autoMACS™ Rinsing Solution   Miltenyi Biotec Order no. 130-091-222 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx
MACS® BSA Stock Solution   Miltenyi Biotec Order no. 130-091-376 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx
CD11c MicroBeads   Miltenyi Biotec Order No. 130-052-001 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx
CD11c-FITC, CD11c-PE   Miltenyi Biotec Order no. 130-092-026 130-091-830 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx
Anti-mPDCA-1-APC   Miltenyi Biotec Order no. 130-091-963 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx
CD146-FITC   Miltenyi Biotec Order no. 130-092-026 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx
CD45-PE   Miltenyi Biotec Order no. 130-091-610 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx
Propidium Iodide Solution   Miltenyi Biotec Order no. 130-093-233 http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx
Art 1000 Reach Pipet Tips   Molecular BioProducts Order no. 2079 http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61
http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html

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Cite This Article
Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator. J. Vis. Exp. (29), e1266, doi:10.3791/1266 (2009).

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