标准化的制备小鼠肺组织单细胞悬浮液使用gentleMACS Dissociator
Summary
游离特定的组织类型的细胞，组织鼓动的具体参数，以获得一个可行的，可培养细胞的高容量。美天旎gentleMACS dissociator优化这个任务简单，实用的协议。在本出版物中使用本仪器对肺组织进行了解释。
Abstract
从组织单细胞悬液的制备细胞研究中的许多实验的重要前提。游离整个器官的过程中，需要在特定的参数，在重现的方式获取大量的活菌。 gentleMACS Dissociator优化这个任务简单，实用的协议。该仪器包含预编程的优化设置的多种组织类型，包括小鼠肺的效率，但温和的分解。在本出版物中使用从小鼠的肺组织gentleMACS Dissociator证明。
Protocol
若要在无菌条件下，它是建议执行层流罩中的所有步骤。 1。材料 HEPES缓冲液：10毫米HEPES – NaOH溶液pH值7.4，150 mM氯化钠，氯化钾5毫米，1毫米MgCl 2的 ，1.8毫米氯化钙2） 胶原酶D解决方案：胶原酶D：100毫克/毫升（胶原酶ð> 0.15 U /毫克），在HEPES缓冲 DNA酶我的解决方案：2万U / mL的DNA酶我在pH 7.2的PBS缓冲液 PEB的缓冲区：BSA在20…
Discussion
在这个视频中，我们引入一个新的小鼠肺组织的分离方法。我们展示的机械和酶治疗肺组织结合，取得了一个可行的白细胞和内皮细胞的高比例。具体来说，组织机械解体取得gentleMACS Dissociator。 gentleMACS彗星管包括一个转子 – 定子系统，它游离在一种温和的方式组织。过程控制仪器的程序设置。这些设置进行了优化，实现高产和细胞活力。派生的单细胞悬液与CD45 – PE，CD146 – FITC或CD31 – FITC染色和?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者是德国美天旎生物技术公司，雇员。
Materials
References
- Swanson, K. Flt3-Ligand, IL-4, GM-CSF, and Adherence-Mediated Isolation of Murine Lung Dendritic Cells: Assessment of Isolation Technique on Phenotype and Function. J. Immunol. 173, 4875-4881 (2004).
- Vermaelen, K., Pauwels, R. Accurate and simple discrimination of mouse pulmonary dendritic cell and macrophage populations by flow cytometry: Methodology and new insights. Cytometry Part A. 61A, 170-177 (2004).
Cite This Article
Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator. J. Vis. Exp. (29), e1266, doi:10.3791/1266 (2009).