Dissociar as células de tipos de tecido específico requer parâmetros específicos para a agitação do tecido para obter um volume elevado de viáveis, as células cultiváveis. A Miltenyi gentleMACS dissociator otimiza essa tarefa com um protocolo simples e prática. Nesta publicação o uso deste aparelho no tecido pulmonar é explicado.
Abstract
A preparação de suspensões de uma única célula de tecidos é um requisito importante para muitas experiências em pesquisa celular. O processo de dissociação órgãos inteiros requer parâmetros específicos a fim de obter um elevado número de células viáveis de forma reproduzível. O Dissociator gentleMACS otimiza essa tarefa com um protocolo simples e prática. O instrumento contém ajustes pré-programados que são otimizados para a dissociação eficiente, mas suave de uma variedade de tipos de tecidos, incluindo pulmões mouse. Nesta publicação o uso do Dissociator gentleMACS no tecido pulmonar derivada de ratos é demonstrada.
Protocol
Para trabalhar em condições estéreis, é recomendada a realização de todas as etapas em uma capela de fluxo laminar. 1. Materiais HEPES buffer: 10 mM HEPES-NaOH pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl 2, 1,8 mM CaCl 2) Colagenase solução D: D colagenase: 100 mg / mL (colagenase D> 0,15 U / mg) buffer, na HEPES DNase solução I: 20.000 U / mL DNase I Tampão PBS a pH 7,2 PEB buffer: 1 parte da solução stock…
Discussion
Neste vídeo, apresentamos um novo método para a dissociação do tecido pulmonar do rato. Nós mostramos que a combinação de tratamento mecânico e enzimático do tecido pulmonar resultou em uma alta porcentagem de leucócitos viáveis e células endoteliais. Especificamente, a desintegração mecânica do tecido foi obtido pela Dissociator gentleMACS. The Tubes gentleMACS C incluem um rotor – estator sistema, que dissocia o tecido de uma maneira suave. O procedimento é controlado por as configurações do pr…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores são funcionários da Miltenyi Biotec GmbH, Alemanha.
Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator. J. Vis. Exp. (29), e1266, doi:10.3791/1266 (2009).