Ta avstånd celler från specifika vävnadstyper kräver särskild parametrar för vävnad agitation för att få en stor mängd livskraftiga, odlingsbara celler. Den Miltenyi gentleMACS dissociator optimerar denna uppgift med en enkel, praktisk protokoll. I denna publikation användning av denna apparat på lungvävnad förklaras.
Abstract
Beredningen av encelliga suspensioner från vävnader är en viktig förutsättning för många experiment i cellulära forskning. Processen att det skiljer hela organ kräver specifika parametrar för att få ett stort antal livskraftiga celler på ett reproducerbart sätt. Den gentleMACS Dissociator optimerar denna uppgift med en enkel, praktisk protokoll. Instrumentet innehåller förprogrammerade inställningar som är optimerade för effektiv men skonsam dissociation av olika vävnadstyper, inklusive mus lungorna. I denna publikation användningen av gentleMACS Dissociator på lungvävnad från möss kan påvisas.
Protocol
Att arbeta under sterila förhållanden, är det rekommenderat att utföra alla steg i ett laminärt flöde huva. 1. Material HEPES buffert: 10 mM HEPES-NaOH pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mm KCl, 1 mM MgCl 2, 1,8 mM CaCl 2) Kollagenas D lösning: kollagenas D: 100 mg / ml (kollagenas D> 0,15 U / mg), i HEPES buffert DNas Jag lösning: 20.000 U / mL DNas jag PBS-buffert vid pH 7,2 PEB buffert: 1 del BSA stamlösning i 20 del…
Discussion
I denna video, introducerar vi en ny metod för dissociation av musen lungvävnad. Vi visar att en kombination av mekanisk och enzymatisk behandling av lungvävnad gav en hög andel lönsamma leukocyter och endotelceller. Närmare bestämt var den mekaniska upplösning av vävnad uppnås genom gentleMACS Dissociator. Den gentleMACS C Rör inkluderar en rotor – stator, som dissocierar vävnad i ett skonsamt sätt. Förfarandet styrs av programmets inställningar av instrumentet. Inställningarna har optimerats för att u…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Författarna är anställda i Miltenyi Biotec GmbH, Tyskland.
Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator. J. Vis. Exp. (29), e1266, doi:10.3791/1266 (2009).