Distanziert Zellen aus bestimmten Gewebearten erfordert spezifische Parameter für die Gewebe-Agitation um ein hohes Volumen an lebensfähigen, kultivierbaren Zellen zu erhalten. Die Miltenyi gentleMACS dissociator optimiert diese Aufgabe mit einem einfachen, praktischen Protokoll. In dieser Veröffentlichung wird die Verwendung dieser Vorrichtung auf das Lungengewebe erklärt.
Abstract
Die Herstellung von ein-Zellsuspensionen aus den Geweben ist eine wichtige Voraussetzung für viele Experimente in Zellforschung. Der Prozess der Dissoziation ganzen Organen erfordert spezifische Parameter, um eine hohe Anzahl von lebensfähigen Zellen in reproduzierbarer Weise zu erhalten. Die gentleMACS Dissociator optimiert diese Aufgabe mit einem einfachen, praktischen Protokoll. Das Gerät enthält vorprogrammierte Einstellungen, die für die effiziente, aber schonende Dissoziation von einer Vielzahl von Gewebearten, darunter Mauslungen optimiert sind. In dieser Veröffentlichung wird die Nutzung des gentleMACS Dissociator auf das Lungengewebe von Mäusen abgeleitet wird demonstriert.
Protocol
Um Arbeit unter sterilen Bedingungen, ist es empfehlenswert, alle Schritte in einer Sterilbank durchgeführt. 1. Materialien HEPES-Puffer: 10 mM HEPES-NaOH pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM MgCl 2, 1,8 mM CaCl 2) Collagenase D Lösung: Collagenase D: 100 mg / mL (Collagenase D> 0,15 U / mg), in HEPES-Puffer DNase I-Lösung: 20.000 U / mL DNase I PBS-Puffer bei pH 7,2 PEB-Puffer: 1 Teil BSA-Stammlösung in 20 Teile …
Discussion
In diesem Video stellen wir eine neue Methode für die Dissoziation von Maus Lungengewebe. Wir zeigen, dass eine Kombination von mechanischen und enzymatischen Behandlung von Lungengewebe zu einem hohen Prozentsatz lebensfähiger Leukozyten und Endothel-Zellen ergab. Insbesondere wurde die mechanische Zerstörung des Gewebes durch die gentleMACS Dissociator erreicht. Die gentleMACS C Tubes umfassen einen Rotor – Stator-System, das distanziert Gewebe auf sanfte Weise. Das Verfahren wird durch die Programm-Einstellungen d…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren sind Mitarbeiter von Miltenyi Biotec GmbH, Deutschland.
Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator. J. Vis. Exp. (29), e1266, doi:10.3791/1266 (2009).