Standardiserade Beredning av encelliga Suspensioner från mus lungvävnad med gentleMACS Dissociator

Summary

Ta avstånd celler från specifika vävnadstyper kräver särskild parametrar för vävnad agitation för att få en stor mängd livskraftiga, odlingsbara celler. Den Miltenyi gentleMACS dissociator optimerar denna uppgift med en enkel, praktisk protokoll. I denna publikation användning av denna apparat på lungvävnad förklaras.

Abstract

Beredningen av encelliga suspensioner från vävnader är en viktig förutsättning för många experiment i cellulära forskning. Processen att det skiljer hela organ kräver specifika parametrar för att få ett stort antal livskraftiga celler på ett reproducerbart sätt. Den gentleMACS Dissociator optimerar denna uppgift med en enkel, praktisk protokoll. Instrumentet innehåller förprogrammerade inställningar som är optimerade för effektiv men skonsam dissociation av olika vävnadstyper, inklusive mus lungorna. I denna publikation användningen av gentleMACS Dissociator på lungvävnad från möss kan påvisas.

Protocol

Att arbeta under sterila förhållanden, är det rekommenderat att utföra alla steg i ett laminärt flöde huva. 1. Material HEPES buffert: 10 mM HEPES-NaOH pH 7,4, 150 mM NaCl, 5 mm KCl, 1 mM MgCl 2, 1,8 mM CaCl 2) Kollagenas D lösning: kollagenas D: 100 mg / ml (kollagenas D> 0,15 U / mg), i HEPES buffert DNas Jag lösning: 20.000 U / mL DNas jag PBS-buffert vid pH 7,2 PEB buffert: 1 del BSA stamlösning i 20 del…

Discussion

I denna video, introducerar vi en ny metod för dissociation av musen lungvävnad. Vi visar att en kombination av mekanisk och enzymatisk behandling av lungvävnad gav en hög andel lönsamma leukocyter och endotelceller. Närmare bestämt var den mekaniska upplösning av vävnad uppnås genom gentleMACS Dissociator. Den gentleMACS C Rör inkluderar en rotor – stator, som dissocierar vävnad i ett skonsamt sätt. Förfarandet styrs av programmets inställningar av instrumentet. Inställningarna har optimerats för att u…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
C Tubes		Miltenyi Biotec	Order no. 130-093-237	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_765_gentleMACS_C_Tubes.aspx
gentleMACS™ Starting Kit		Miltenyi Biotec	Order no. 130-093-235	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx
MACSmix™ Tube Rotator		Miltenyi Biotec	Order no. 130-090-753	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx
autoMACS™ Rinsing Solution		Miltenyi Biotec	Order no. 130-091-222	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_134_155_autoMACS_Rinsing_Solution.aspx
MACS® BSA Stock Solution		Miltenyi Biotec	Order no. 130-091-376	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_33_295_MACS_BSA_Stock_Solution.aspx
CD11c MicroBeads		Miltenyi Biotec	Order No. 130-052-001	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_93_132_CD11c_MicroBeads.aspx
CD11c-FITC, CD11c-PE		Miltenyi Biotec	Order no. 130-092-026 130-091-830	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_329_CD11c.aspx
Anti-mPDCA-1-APC		Miltenyi Biotec	Order no. 130-091-963	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_325_Anti_mPDCA_1.aspx
CD146-FITC		Miltenyi Biotec	Order no. 130-092-026	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_417_CD146_LSEC_.aspx
CD45-PE		Miltenyi Biotec	Order no. 130-091-610	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_331_CD45.aspx
Propidium Iodide Solution		Miltenyi Biotec	Order no. 130-093-233	http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx
Art 1000 Reach Pipet Tips		Molecular BioProducts	Order no. 2079	http://www.mbpinc.com/ASP/products.aspx?query_TipID=61 http://www.mbpinc.com/html/products/art/display.html