Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Montage, Tuning en gebruik van een Apertureless Near Field Infrared Microscoop voor eiwit Imaging

Published: November 25, 2009 doi: 10.3791/1581

Summary

De montage van een nearfield infrarood microscoop voor beeldvorming proteïneaggregaten wordt beschreven.

Abstract

Dit document heeft tot doel de lezer te onderwijzen in de assemblage en de werking van een infrarood-nabije-veld microscoop voor beeldvorming verder dan de diffractielimiet. De apertureless nabije-veld microscoop is een lichtverstrooiing-type instrument dat infrarood spectra geeft aan circa 20 nm resolutie. Een complete lijst van componenten en een stap-voor-stap protocol voor het gebruik is voorzien. Voorkomende fouten in de montage en tuning instrument worden besproken. Een representatieve dataset die de secundaire structuur van een amyloïde fibrillen shows gepresenteerd.

Protocol

Achtergrond:

Apertureless probe nabije-veld microscopie IR biedt een hoge ruimtelijke resolutie imaging. Het is een relatief nieuwe techniek waarbij een incident infraroodstraal wordt verspreid door een scherpe atomaire kracht microscopie (AFM) tip oscillerende bij de resonantiefrequentie van de cantilever de buurt van het monster. Een IR-detector verzamelt het verstrooide licht en is gedemoduleerd op deze resonantiefrequentie of de harmonischen. Op deze manier kan de achtergrond spreiding van de gerichte laserstraal incident op de rest van het monster oppervlak worden verlaagd en een ruimtelijke resolutie tot ver buiten de diffractielimiet van het licht kan worden bereikt, infrarood contrast te verkrijgen met nanoschaal ruimtelijke resolutie i, ii, iii . Sinds de top van de AFM tip is veel kleiner dan het aandachtsgebied van de laserstraal, het verstrooide licht is zwak. Om dit verspreid gebied uit te breiden, homodyne detectie wordt gebruikt wanneer een referentie-veld wordt toegevoegd aan de verzamelde verstrooide veld en de relatieve fase van de velden is ingesteld zodanig dat een maximale constructieve interferentie optreedt bij de detector. De verstrooiing intensiteit is dan evenredig met de omvang van de referentie-elektrisch veld IV, V, VI. Een belangrijke kwestie in de nabije-veld beeldvorming is om te voorkomen dat artefacten die door de z-beweging van de AFM tip VII, VIII, IX, X, XI. Dit probleem kan worden verminderd met de juiste afstelling van de homodyne fase en met uitzondering van grote topografische kenmerken, zoals eerder aangetoond door Mueller et al.. Deze techniek is betrouwbaar vervolgens gebruikt om de experimentele verstrooiing spectrum van materialen te verkrijgen met een ruimtelijke resolutie van minder dan 30 nm 15 . Het gebruik van nabije-veld microscopie voor biologische materialen is voorheen aangetoond, met name voor macromoleculen, zoals tabak mozaïek virus xii en E. Coli bacterie xiii.

In dit rapport, illustreren we de montage van een dergelijke imaging-apparaat. Presenteren we ook secundaire structuur informatie van amyloïde fibrillen gevormd uit de # 21-31 peptide fragment van β 2-m verkregen door apertureless nabije-veld scanning microscopie infrarood (ANSIM). Near-field beelden worden gelijktijdig verzameld met topografie, waardoor de detectie en de invordering van de verstrooiing spectrum van individuele fibrillen.

Onze apertureless nabije-veld microscoop infrarood scanning (ANSIM) metingen is een zelfgemaakt apparaat. Het schema van de experimentele opstelling wordt getoond in Schema 1. Een AFM microscoop (Multimode, Veeco Instruments, Santa Barbara, CA) wordt gebruikt voor het meten van de topografie van het monster, alsmede de productie van de near-field verbeterde verstrooiing gemoduleerd op het puntje trillingsfrequentie. Aftappen-mode, NSC14/Ti-Pt platina gecoate cantilevers (MicroMasch, Estland) worden gebruikt om de verstrooiing van de continue, instelbare IR laser (frequentiebereik te vergroten: 2000 cm -1 tot 1600 cm -1, PL3 CO-gas laser, Edinburgh Instruments, Groot-Brittannië) in de buurt van het oppervlak. Een helium neon laser (Melles Griot, Albuquerque, NM) veld wordt gebruikt als leidraad voor de onzichtbare infrarode straling. De IR-laser licht wordt verspreid naar een lens na het passeren van een ZnSe gedeeltelijke reflector. Het is dan gericht op de top van de oscillerende AFM tip, met de polarisatie van de bundel parallel aan de lange as van de sonde. De IR-straling verzameld door de lens wordt vervolgens toegevoegd aan een referentie homodyne signaal. Een paraboloïde spiegel wordt gebruikt om de IR-straling richten op een cadmiumkwiktelluride (MCT) infrarood detector (Graseby Infrarood, Orlando, FL). Een piezo driver (Thorlabs, Newton, NJ) wordt gebruikt om het gedetecteerde signaal door het corrigeren van de fase van de homodyne licht te maximaliseren. Het merendeel van de optische componenten hierboven beschreven stevig aangebracht op een platform en verschoven in het XY-of Z-posities met behulp van een translationeel podium. De AC fractie van het gedetecteerde signaal wordt doorgegeven aan een lock-in versterker (model SR844 RF, Stanford Research Systems, Sunnyvale, CA), die demoduleert het signaal aan het uiteinde trillingsfrequentie. De verstrooiing intensiteit wordt waargenomen als de AFM tip scant de bemonsterde oppervlak en de topografie gegevens gelijktijdig wordt verkregen. De software die wordt gebruikt voor data en beeld collectie is NanoScope V5.31r1 (Veeco Instruments, Santa Barbara, CA).

Scheme1
regeling een

Figuur 1 - toont de onderdelen van het imaging systeem waarvan de montage en het gebruik beschrijven we
Figuur 1

0) optische tafel
1) Basis van MM AFM
2) scanner van MM AFM
3) Verhoogde optische breadboard
(13 "x 18" x 3 / 8 ", Thorlabs)
4) Begeleiding spiegels (goud gecoat, een "dia.)
6) Optische cube w / ZnSe gedeeltelijke reflector
7) De optische buis wordt gebruikt voor het vastzetten van setup op de hoogwerker (17)
8) IR doel
(FL 16 mm, NA 0.28, Ealing)
9) Optische buis voor de verzamelde back-verstrooid licht
10) Cube w / off-axis paraboloïde spiegel
(90 °, FL 5 ", Janos)
11) Cube te Ge bord te houden @ 45 °
12) Microscoop oculair (x10)
13) XY-stadium gemonteerd pinhole (0,5 mm)
14) MCT IR detector (Graseby Infrarood)
15) IR detector voorversterker (AC en DC)
16) XY stadium aan de straal te verplaatsen
17) Elevating tafel om de straal richten
18) Z-etappe naar de IR detector positie
19) X-etappe naar de IR detector positie

Figuur 1

I. De eerste vergadering van de optische opstelling

Montage stap I.1

Monteer de optische opstelling en met tuning spiegels en de positie van de Helium-Neon (HeNe) bundel parallel aan de optische tafel (0) bij ongeveer de juiste hoogte (H) boven de optische breadboard (3) en de afstand (D) van het centrum van de scanner (2).

Deze hoogte H en de afstand D kan worden geschat op basis van de hoogte (H1) van het monster op de top van de scanner (2) van de optische tafel, gewenste hoek van inval (α), hoogte van de bovenkant van het bord boven de optische tafel (h), geometrische grootte van de optische kubus en IR-doelstelling (6 en 8 in figuur 1) en de werkafstand van de IR-doelstelling (allemaal samen d, hier d = 1 "+2" +2 ")

Figuur 2
figuur 2

H = H1 + d * sin (α)-h

D = d * cos (α)

Montage stap I.2

Figuur 3
figuur 3

Figuur 3: Zonder de beamsplitter in de kubus (5) en met langwerpige optische buis aan de andere kant van de kubus (6) direct He-Ne bundel door de irissen bevestigd aan de uiteinden van de buizen.

Montage stap I.3

Figuur 4
figuur 4

Figuur 4: Met de scanner (2) verwijderd, de lange optische buis verbinden met de iris aan het eind in plaats van de IR-doelstelling. Plaats de ZnSe gedeeltelijke reflector aan de balk in de richting van het monster rechtstreeks door het reizen door de lange optische buis. De ZnSe gedeeltelijke reflector moet worden gemonteerd, dat de HeNe straal de voorzijde van de reflector in het geometrische middelpunt van de optische kubus die de gedeeltelijke reflector hits.

Figuur 5
figuur 5

Figuur 5: Door het roteren van de gedeeltelijke reflector, de HeNe straal rechtstreeks door de gesloten uitgang iris. Sinds de berg van de gedeeltelijke reflector niet houd het precies loodrecht, zijn er twee thuis geïnstalleerd stelschroeven, zodat voor de verticale beweging van de balk. Gebruik deze indien nodig.

Figuur 6
figuur 6

Montage stap I.4

Figuur 6. Monteer de paraboloïde spiegel met rubberen O-ringen in de optische kubus (zie 1, figuur 5). Door het aandraaien van de schroeven, de O-ringen te comprimeren, waardoor spiegel aanpassing.

Figuur 7 figuur 7

Met extra spiegels (een wordt weergegeven op figuur 7) direct de HeNe balk in de tegenovergestelde richting, zoals afgebeeld op Figuur 7. Stel de straal om door de eerder gebruikte irissen. Deze bundel zal worden gebruikt om de paraboloïde spiegel aan te passen.

Figuur 8
figuur 8

Figuur 8: Een paraboloïde spiegel geplaatst in het optische kubus (10) reflecteert het licht in de richting van de positie van de detector. Stelschroeven direct de bundel door de pinhole geplaatst aan de uitgang van de kubus (11), die de germanium (Ge) venster zal houden. Nadat de bundel is afgestemd door de pinhole, plaats de MCT detector dicht bij de pinhole. Pas de positie van de IR-detector zodanig dat He-Ne beam is op het meetelement van de detector. Verplaats de detector door ~ 2 mm (IR straal wordt verschoven door de Ge venster).

Montage stap I.5

Figuur 9
figuur 9

Figuur 9: Plaats de houder met Ge raam in de optische cube (11). De anti-reflectie (AR) coating Ge raam dient als een IR-filter en maakt visuele waarnemingen van de cantilever en het monster. Bevestig het oculair (12). Verdraaien hoek van de kubus (11) met betrekking tot de cube (10) maakt het mogelijk om punt het oculair in de gewenste richting. Door het roteren van de berg van de Ge-venster, is de HeNe straal geleid door het midden van het oculair.

Figuur 10
figuur 10

Figuur 10: Sluit IR objectief (8) en AFM scanner (2). Bevestig de beamstop aan de uitgang van de optische buis (5). Gebruik een beschermende filter bij het bekijken van de HeNe bundel door het oculair. Positie van een monster op de scanner en richt de HeNe bundel door de input optische buis (5). Zorg ervoor dat de HeNe straal is breed genoeg om overtollige water over de beamstop. De beamstop wordt gebruikt vanwege de Cassegrain doel dat alleen verzamelt binnenkomende licht van de omtrek van de balk. Door het aanpassen van de draad van het oculair een scherp beeld van de HeNe bundel richt zich op het monster wordt verkregen.

Montage stap I.6

Een laatste aanpassing van de paraboloïde spiegel is vereist. De output pinhole wordt vervangen door de iris in het brandpunt positie van de paraboloïde spiegel. Verwijder de Ge raam en IR-detector (mark positie van de IR detector!). Bevestig een extra lens na de iris bij de benadering brandpuntsafstand van de lens van de iris. Op dit moment is de ingeschakelde cantilever zichtbaar moet zijn door de lens. Pas de positie van de paraboloïde spiegel tot het centrum aan het einde van de tip door de gesloten iris. Merk op dat wanneer de HeNe straal correct is gericht op de tip, het een helder schitteren tussen de tip en het is reflectie op het oppervlak van het monster maakt. Bevestig de Ge venster, aanpassen voor handige visuele waarneming van de cantilever. Vervang de iris met de pinhole en vergeet niet dat het gaatje voor IR-detectie dient te worden verschoven uit het midden te wijten aan de IR-straal verplaatsing door de Ge raam. Plaats de IR detector op de eerder gemarkeerde positie.

Ten slotte, direct de IR-straal, zodat het reizen samen met de zichtbare HeNe straal wordt gebruikt voor het stemmen.
Nu is alles gereed moet zijn voor routinematige aanpassing.

Routine Aanpassing:

Aanpassing stap A.1:

Aanpassing aan de HeNe-Laser

Het is makkelijker om af te stemmen op de zichtbare HeNe (632nm) dan met de onzichtbare IR (rond 6μm).

Het pad van de HeNe en van de IR-stralen bij elkaar komen op het kantelbare spiegel. Als deze spiegel is gekanteld naar de HeNe kan geschieden, indien de spiegel is in de positie van de IR-straal propageert aan het nabije-veld setup. Voor het uitlijnen van een van de balken alleen gebruik maken van de twee spiegels niet in het gemeenschappelijk met de andere weg en bevinden zich voor de kantelbare spiegel. Als u per ongeluk verplaatst een andere spiegel, probeer dan eerst deze spiegel terug te brengen in zijn oude positie.

A.1.1. Grof Afstemming met twee Spiegels

Gebruik maken van de twee spiegels dicht bij de HeNe laser om de bundel af te stemmen door alle irissen langs het pad naar het nabije-veld podium. Als je kijkt naar de balk in het homodyne arm, moet een corona-achtig profiel geplaatst worden waargenomen (als gevolg van de bundel blocker in de optische buis). Dit geeft aan dat de bundel gaat dwars door de buizen.

A1.2. Fijn Aanpassing aan de Near-Field Stage

Bevestig de AFM hoofd en schakel de cantilever tip op het monster. Focus van de HeNe straal op het einde van de beeldvorming cantilever. Als dit verdringt de straal uit het midden van de input optische buis (5) herhaal tuning stappen A.1. en A.1.2. totdat de balk in het midden.

Door het verplaatsen van de translationele optische fase wordt de reflecterende microscoop doel aangepast aan het licht richten op de top van de cantilever tip, waar het wordt verspreid.

Draai de Ge spiegel onder het oculair (in de optische kubus) en kijk door het oculair. De bundel is gericht op dit punt (of op de IR detector als de Ge spiegel wordt getrokken uit de kubus) door de paraboloïde spiegel. Verplaats de stage of achteruit tot een scherp beeld van de tip en de reflectie over het monster oppervlak wordt waargenomen. Gebruik maken van de twee oEr richtingen (omhoog / omlaag en rechts / links) naar de AFM tip plaats ongeveer in het midden van het oculair.

Kijken door een telescoop, is de AFM cantilever en de tip waargenomen. Nogmaals, vergeet niet om een ​​beschermende filter te gebruiken bij het bekijken van de HeNe balk. Zonder de HeNe balk, is een aantal rode licht nog steeds waargenomen die afkomstig is van het interne licht van de AFM distance control. Verplaats de translationele podium in een rechts-links en / of up-down richting totdat een heldere rode schittering wordt waargenomen op de tip top. Als de uitlijning is vrij slecht, ga het podium aan de linkerkant van de AFM en langzaam naar rechts te verplaatsen. Kijk voor een rood reflectie bewegen over het reflecterende oppervlak monster. Als de rode reflectie is nog niet waargenomen, het podium weer te vertalen naar de linkerkant en bewegen in een up-down mode. Houd het vertalen van links-rechts, up-down tot een rode schittering wordt waargenomen als je de HeNe straal richten zich op de top van de AFM tip.

A1.3. Overlappende het homodyne gebied met verspreide licht

Open de homodyne arm en kijk grondige het oculair. Drie of meer plekken in een lijn met afnemende intensiteit wordt gezien en deze plekken zijn het gevolg van meerdere reflecties over voor-en achterkanten van verschillende optieken. Verplaats de spiegel in de homodyne arm, zodat de tweede plek (uit de bodem en in intensiteit) overlapt met de helder beeld van de tip, dat is waar de tip en de reflectie komen samen.

A1.4. Plaats de detector

Verwijder de Ge spiegel en de HeNe bundel moet gaan in de richting waar de IR detector zich bevindt. Achter de optische buis, zijn twee ringvormige vlekken waargenomen. De tweede plaats (in intensiteit) is de plek die moet gaan door het gat van de warmte-beschermfolie op het gezicht van de IR-detector. De plek met de hoogste intensiteit moet worden gezien op de rand van het gat.

A1.5. Het veranderen van het ene monster naar het andere

Na het wijzigen van de steekproef van de AFM tip is niet meer in exact dezelfde positie als voorheen, maar mag niet te ver weg. Begin met stap A.1.2, aangezien het verschil is normaal gesproken niet erg groot.

Opmerking: Als de uitlijning uit is, controleert u of de HeNe bundel nog steeds doorloopt alle irissen en creëert een heldere rode schitteren op de AFM tip. Soms heb je niet merkt dat je hebt aangeraakt en daarom verhuisde een spiegel van de oorspronkelijke positie. Als de uitlijning is nog steeds slecht, helaas is de hele alignment procedure moet opnieuw worden ingevuld.

Aanpassing stap 2: Aanpassing van de IR-Beam

Gebruik een CO laser lijn met een hoge intensiteit / vermogen (tenminste 100 mW), omdat dit zal de uitlijning te vergemakkelijken. Vul de detector met vloeibare stikstof en laat het equilibreren voor ten minste 30 minuten.

2.1. Grof Afstemming met twee Spiegels

Plaats een power meter achter de eerste iris om de macht van de inkomende IR-straal te controleren. Vervolgens passen de spiegel die zich voor de kantelbare spiegel met het hoogste energieverbruik te verkrijgen. Neem de power meter en houd het achter de iris, die is het dichtst bij het nabije-veld het podium en stel de kantelbare spiegel tot een maximaal vermogen te lezen is verkregen. Herhaal deze stap een paar keer voor een optimale aanpassing.

2.2. Kijken naar de 1f Signal

De referentie van de lock-in versterker moet worden ingesteld op de frequentie van de tip trillingsfrequentie van de te isoleren door het aan 1F (U), dat is de AFM trillingsfrequentie. Stel het scanformaat van kracht zijnde perceel-modus in de NanoScope software om 3 pm. Na een grove aanpassing in 2.1., Zoeken naar de juiste vorm van de 1F-signaal. Vervolgens stemmen de fase tussen het verstrooide licht verzameld uit de tip en de homodyned licht van de homodyne arm door het aanpassen van de piëzo-driver. Dit drijft de spiegel in de homodyne arm Door het veranderen van de spanning van de piëzo zodat de eerste minimum van de 1F-signaal is ongeveer 500 nm vanaf nul. Omdat elke verandering in de uitlijning verandert de lengte van de beide paden van licht en hebben dus hun relatieve fase, de fase moet worden gecorrigeerd met de piezo.

Wat ziet u (1F-signaal)?
Bad Alignment: Twee bulten op de 3 micrometer z scanformaat in acht worden genomen.
Medium Alignment: De kromming van de eerste bult ziet er een beetje meer dan holle bolle en de tweede hobbel is kleiner dan de eerste.
(Bijna) Goede Alignment: Twee bulten in acht worden genomen. De eerste hobbel is hoger dan de tweede bult, en de kromming aan de rechterkant van de eerste hobbel zal negatief zijn (concaaf).
Wat te doen voor het uitlijnen?
Slechte uitlijning: Herhaal de alignment procedure in stap 2.1 als nodig is. Omdat de IR-straal diameter is groot, zullen de meeste van de balk langs de irissen zelfs als het niet perfect uitgelijnd. Zelfs als er twee hobbels nog opgemerkt, kan het bedrag van de 1F-signaal worden verhoogd door het afstemmen van een of beide van de uitlijning spiegels. Kijk voor kleine veranderingen in de kromming van de eerste bult. De meeste van allemaal, geduldig aangezien dit de moeilijkste deel van de uitlijning.
Medium Alignment: Probeer aan te passen een of beide van de uitlijning spiegels om een ​​bijna goede afstemming te verkrijgen. Probeer het verplaatsen van de XYZ translationele stadium ook, maar wordt aangepast door zeer kleine stapjes.
(Bijna) Goede Alignment: Stel de spiegels en proberen het maximum van de eerste bult te verhogen. 1F-signalen worden meestal rond de 8 tot 16 V, voor lage input bevoegdheden is het minder. Wijzig de fase door het veranderen van de spanning met behulp van de piezo driver, zodat de eerste minimum komt dichter bij nul. Als er een significant 1F-signaal, schakelt u de referentie van de lock-in versterker naar de 2F-signaal te isoleren. Een deel van het signaal moeten worden geobserveerd en proberen deze te verbeteren een beetje meer door een zeer lichte tuning van de spiegels en het veranderen van de fase.

2.3. Het veranderen van het ene monster naar het andere

Uit te voeren Stap A.1.5 onder de uitlijning van de HeNe balk. Schakel de AFM tip en propageren de IR-straal door de microscoop. Bekijk de 1F-signaal. Als een 1F-signaal is nog steeds waargenomen, past u de kantelbare spiegel en stel de fase. Een goede IF signaal en daarom een ​​goede 2F signaal kan nog steeds worden waargenomen. Zo niet, fijn Lijn de balk met behulp van stap 2.2.

Representatieve resultaten:

Monstervoorbereiding De # 21-31 peptide werd gesynthetiseerd aan het Centrum voor Biotechnologie en Bioengineering aan de Universiteit van Pittsburgh en gezuiverd (> 95%) door HPLC. Om de amyloid fibrillen, 0,8 mg TMAO (Sigma-Aldrich) synthetiseren werd toegevoegd aan een oplossing van 1 mM # 21-31 peptide in 18 MΩ water, vergelijkbaar met een procedure uitgevoerd door Yang et al.. Xiv

Ultraplatte goud substraten xv werden gemaakt. 40 pi van de een maand oude oplossing (kamertemperatuur incubatie, pH 5,5) werd afgezet gedurende enkele minuten op verse ultraplatte goud substraten. Ze werden kort gespoeld met een stroom van 18 MΩ water, gedroogd met stromend N 2 gas en geplaatst in het ANSIM instrument.

Figuur 11 toont de topografie en near-field foto's verzameld voor de # 21-31 peptide fibrillen. A) Topografie image tegelijkertijd verkregen met de bijbehorende near-field beeld. De labels vertegenwoordigen de individuele vezels en worden gebruikt om het type van secundaire bouw elk fibrillen heeft functie. Overeenkomstige near-field B en C) beelden verzameld op twee verschillende golfgetallen: 1631 en 1691 cm -1. De oppervlakte van elk beeld is 1 x 1 micrometer 2. Linkerschaal vertegenwoordigt hoogte, rechts schaal is de verstrooide veld uit de lock-in versterker.

Figuur 11
figuur 11

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Wij dankbaar erkennen NSF, NSERC, NIH, en ONR.

References

  1. Mueller, K., Yang, X., Paulite, M., Fakhraai, Z., Gunari, N., Walker, G. C. Chemical imaging of the surface of self-assembled polystyrene-b-poly(methyl methacrylate) diblock copolymer films using apertureless near-field IR microscopy. Langmuir. 24, 6946-6951 (2008).
  2. Lahrech, A., Bachelot, R., Gleyzes, P., Boccara, A. C. Infrared-reflection-mode near-field microscopy using an apertureless probe with a resolution of lambda/600. Opt. Lett. 21, 1315-1317 (1996).
  3. Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. Performance of visible and mid-infrared scattering-type near-field optical microscopes. J. Microsc. 210, 311-314 (2003).
  4. Kim, Z. H., Leone, S. R. Polarization-selective mapping of near-field intensity and phase around gold nanoparticles using apertureless near-field microscopy. Optics Express. 16, 1733-1741 (2008).
  5. Bridger, P. M., McGill, T. C. Observation of nanometer-scale optical property discrimination by use of a near-field scanning apertureless microscope. Opt. Lett. 24, 1005-1007 (1999).
  6. Stebounova, L., Akhremitchev, B. B., Walker, G. C. Enhancement of the weak scattered signal in apertureless near-field scanning infrared microscopy. Rev. Sci. Instrum. 74, 3670-3674 (2003).
  7. Akhremitchev, B. B., Pollack, S., Walker, G. C. Apertureless Scanning Near-Field Infrared Microscopy of a Rough Polymeric Surface. Langmuir. 17, 2774-2781 (2001).
  8. Hecht, B., Bielefeldt, H., Inouye, Y., Pohl, D. W., Novotny, L. Facts and Artifacts in Scanning Near-Field Optical Microscopy. J. Appl. Phys. 81, 2492-2498 (1997).
  9. Labardi, M., Patane, S., Allegrini, M. Artifact-free near-field optical imaging by apertureless microscopy. Appl. Phys. Lett. 77, 621-623 (2000).
  10. Palanker, D. V., Simanovskii, D. M., Huie, P., Smith, T. I. On Contrast Parameters and Topographic Artifacts in Near-Field Infrared Microscopy. J. Appl. Phys. 88, 6808-6814 (2000).
  11. Akhremitchev, B. B., Sun, Y., Stebounova, L., Walker, G. C. Monolayer-Sensitive Infrared Imaging of DNA Stripes Using Apertureless Near-Field Microscopy.Langmuir. 18, 5325-5328 (2002).
  12. Brehm, M., Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. Infrared Spectroscopic Mapping of Single Nanoparticles and Viruses at Nanoscale Resolution. Nano Lett. 7, 1307-1310 (2006).
  13. Dazzi, A., Prazeres, R., Glotin, F., Ortega, J. M. Analysis of nano-chemical mapping performed by an AFM-based ("AFMIR") acousto-optic technique. Ultramicroscopy. 107, 1194-1200 (2007).
  14. Yang, D. S., Yip, C. M., Huang, T. H. J., Chakrabartty, A., Fraser, P. E. Manipulating the Amyloid-β Aggregation Pathway with Chemical Chaperones. J. Biol. Chem. 274, 32970-32974 (1999).
  15. Meadows, P. Y., Walker, G. C. Force Microscopy Studies of Fibronectin Adsorption and Subsequent Cellular Adhesion to Substrates with Well-Defined Surface Chemistries. Langmuir. 21, 4096-4107 (2005).

Tags

Cellular Biology nearfield imaging infrarood amyloid fibrillen eiwit
Montage, Tuning en gebruik van een Apertureless Near Field Infrared Microscoop voor eiwit Imaging
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Paulite, M., Fakhraai, Z.,More

Paulite, M., Fakhraai, Z., Akhremitchev, B. B., Mueller, K., Walker, G. C. Assembly, Tuning and Use of an Apertureless Near Field Infrared Microscope for Protein Imaging. J. Vis. Exp. (33), e1581, doi:10.3791/1581 (2009).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter