Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Kurul, Tuning ve Protein Görüntüleme için bir Apertureless Yakın Alan Kızılötesi Mikroskop Kullanımı

Published: November 25, 2009 doi: 10.3791/1581

Summary

Görüntüleme protein büyüklükler bir nearfield kızılötesi mikroskop montaj açıklanmıştır.

Abstract

Bu kağıt kırınım sınır ötesinde görüntüleme için bir kızılötesi yakın alan mikroskobu montajı ve işletilmesi okuyucu öğretmeyi hedefliyor. Apertureless yakın alan mikroskobu, yaklaşık 20 nm çözünürlükte infrared spektrumları sağlayan bir ışık saçılması tipi araçtır. Bileşenler ve kullanımı için bir adım-adım protokolü tam bir listesi verilir. Genel hatalar, montaj ve enstrüman ayar tartışılmıştır. Bir amiloid fibril ikincil yapısını gösteren bir temsilci veri seti sunulmaktadır.

Protocol

Amaç:

Apertureless prob yakın alan IR mikroskopi yüksek uzaysal çözünürlüklü görüntüleme sunar. Bu olay bir kızılötesi ışın yakın örnek konsol rezonans frekansta salınan keskin bir atomik kuvvet mikroskobu (AFM) ucu tarafından dağınık olduğu nispeten yeni bir tekniktir. IR dedektörü dağınık ışık toplar ve bu rezonans frekansı ya da harmonikler demodüle. Bu şekilde, numune yüzeyinden geri kalanı üzerinde odaklanmış bir lazer ışını olayın arka plan dağılım azaltılmış olabilir ve ışık kırınım sınırı çok ötesinde bir mekansal çözünürlükte nano ölçekli mekansal çözünürlükte i, ii, iii kızılötesi kontrast elde etmek için elde edilebilir . AFM ucunun apeks lazer ışınının odak alanı çok daha küçük olduğundan, dağınık ışık zayıf. Bir referans alanında toplanan dağınık alan ve alanların bağıl fazı eklenir, bu dağınık bir alanda geliştirmek amacıyla, homodin algılama dedektör, en yapıcı girişim oluşur ayarlanır. Saçılma şiddeti daha sonra referans elektrik alan iv, v, vi büyüklüğü ile orantılıdır . Yakın alan görüntülemede önemli bir konu AFM ucu vii, viii, ix, x, xi z-motion tarafından üretilen eserler önlemek için. Bu sorun, uygun homodin faz ayarı ve büyük topografik özellikler, önceden Mueller ve ark tarafından gösterilmiştir hariç ile azaltılabilir. Bu teknik daha sonra güvenilir bir şekilde en az 30 mil (15) mekansal çözünürlüğe sahip malzemelerin deneysel saçılma spektrumu elde etmek için kullanılır . Biyolojik malzemeler için yakın alan mikroskopi kullanımı, özellikle tütün mozaik virüsü xii ve E. Coli bakteri xiii gibi makromoleküllerin, eski kanıtlanmıştır .

Bu raporda, biz böyle bir görüntüleme cihazı montajı göstermektedir. Ayrıca, yakın alan, kızılötesi mikroskobu (ANSIM) tarama apertureless ile elde edilen β # 21-31 peptid parçası 2-m oluşan amiloid fibriller ikincil yapı bilgileri sunuyoruz. Yakın-alan görüntüler, bireysel fibrillerin saçılma spektrumu algılama ve toplama sağlayan, topografya ile eş zamanlı olarak tahsil edilir.

Apertureless yakın alan tarama kızılötesi mikroskobu (ANSIM) ölçümleri, ev yapımı bir cihaz. Programı 1 deney düzeneği şematik olarak gösterilir. Bir AFM mikroskobu (Multimode, Veeco Instruments, Santa Barbara, CA) yanı sıra, yakın alan gelişmiş saçılma ucu osilasyon frekansı modüle üreten örnek topoğrafya ölçüm için kullanılır. 2000 cm -1 - 1600 cm -1: PL3 CO gazı lazer, dokunulduğunda-mod, NSC14/Ti-Pt platin kaplı konsol (MicroMasch Estonya), sürekli ayarlanabilir kızılötesi lazer (frekans aralığı saçılma artırmak için kullanılan Edinburgh yüzeye yakın Instruments, İngiltere). Helyum neon lazer (Melles Griot, Albuquerque, NM) alanında görünmez kızılötesi radyasyon için bir rehber olarak kullanılır. IR lazer ışığı ZnSe kısmi bir reflektör geçtikten sonra bir mercek doğru yayılır. Daha sonra prob uzun eksenine paralel ışın kutuplaşma ile salınan AFM ucunun apeks üzerine odaklanmıştır. Objektif tarafından toplanan kızılötesi radyasyon, daha sonra bir referans homodin sinyali eklenir. Paraboloidal ayna, bir cıva kadmiyum tellür (MCT) kızılötesi dedektör (Graseby Kızılötesi, Orlando, FL), kızılötesi radyasyon üzerine odaklanmak için kullanılır. Bir piezo sürücüsü (Thorlabs, Newton, NJ) homodin ışık faz düzeltmek tarafından tespit edilen sinyalin en üst düzeye çıkarmak için kullanılmaktadır. Yukarıda açıklanan optik bileşenlerin çoğu sıkıca bir platform üzerine yapıştırılmış ve XY veya Z konumlarının translasyonel sahne kullanarak kaydırılır. Algılanan sinyal AC kesir iletilen bir kilit-amplifikatör (model SR844 RF, Stanford Araştırma Sistemleri, Sunnyvale, CA) ucu osilasyon frekansı sinyali demodüle. AFM ucu örneklenen yüzey tarar ve topografya verileri eş zamanlı olarak elde edilir saçılma yoğunluğu görülmektedir. Veri ve görüntü toplama için kullanılan yazılım NanoScope V5.31r1 (Veeco Instruments, Santa Barbara, CA).

Scheme1
şeması 1

Şekil 1 - montaj ve biz açıklayacağız görüntüleme sistemi parçalarını gösterir
Şekil 1

0) Optik tablo
AA AFM 1) Temel
2 AA AFM) Tarayıcı
3) Yükseltilmiş optik breadboard
(13 "x 18" x 3 / 8 ", Thorlabs)
4) Rehberlik aynalar (altın kaplamalı, 1 "çap)
6) Optik küp w / ZnSe kısmi reflektör
7) Optik tüp yükselten bir platform üzerinde kurulum (17) sağlamak için kullanılır
8) IR hedefi
(FL 16 mm, 0,28 NA, Ealing)
9) toplanan geri saçılan ışık için Optik tüp
10) Küp w / off-eksenli paraboloidal ayna
(90 ° 5, FL, "Janos)
Ge plaka @ 45 11) Küp °
12) Mikroskop gözmerceği (x10)
13) XY-aşamalı monte iğne deliği (0,5 mm)
14) MCT IR dedektörü (Graseby Kızılötesi)
15) IR dedektörü preamp (AC ve DC)
16) ışın konumunu taşımak için XY
17) ışını odak Elevating tablo
18) Z aşamada kızılötesi dedektör pozisyonu
19) X-aşamada kızılötesi dedektör pozisyonu

Şekil 1

I. optik kurulum İlk Meclisi

Meclis adım I.1

Optik kurulum kurma ve ayar aynalar ve pozisyon merkezi optik breadboard (3) ve mesafe (D) üzerinde yaklaşık olarak doğru yükseklik (H) (0) Optik tablo Helyum-Neon (HeNe) ışın paralel tarayıcı (2).

Bu yüksekliği H ve mesafe D, optik masa üzerinde optik tablo tarayıcı (2), istenilen geliş açısı (α), breadboard üst yüksekliği üstünde örnek yüksekliği (H1) tahmin edilebilir (h), geometrik boyutları, optik küp ve kızılötesi objektif (Şekil 1, 6 ve 8) ve IR objektif çalışma mesafesi (hep birlikte d, d = 1 "2" 2 " )

Şekil 2
Şekil 2

H = h1 + d * sin (α)-h

D = d * cos (α)

Montaj adım I.2

Şekil 3
Şekil 3

Şekil 3: (5) küp ve küp (6) diğer ucunda uzatılmış optik tüp ile ışın dağıtıcı olmadan Tüplerin ucunda takılı süsen ile He-Ne ışını.

Meclis adım I.3

Şekil 4
Şekil 4

Şekil 4: Tarayıcı (2) kaldırıldı, sonunda IR amacı yerine iris ile uzun bir optik tüp takın . Uzun optik tüp seyahat örnek doğru ışını doğrudan ZnSe kısmi reflektör yerleştirin. ZnSe kısmi reflektör HeNe ışını kısmi reflektör tutan optik küp geometrik merkezi reflektör ön yüzeyi vurur gibi monte edilmelidir.

Şekil 5
Şekil 5

Şekil 5: kısmi reflektör çevirerek kapalı çıkış iris yoluyla doğrudan HeNe demeti. Kısmi reflektör monte tam dik tutun olmadığından, iki ev yüklenmiş ayar vidası ışının dikey hareket için izin vardır. Bu gerektiğinde kullanın.

Şekil 6
Şekil 6

Meclis adım I.4

Şekil 6. Paraboloidal ayna optik küp kauçuk O-ring (1'e bakınız, Şekil 5) ile monte edin. Vidaları sıkarak, O-ring, ayna ayarı için izin sıkıştırır.

Şekil 7 Şekil 7

Şekil 7'de gösterildiği gibi ek aynalar (Şekil 7 gösterilir), ters yönde HeNe ışını. Daha önce kullanılan süsen geçmek için ışın ayarlayın. Bu ışın paraboloidal ayna ayarlamak için kullanılır.

Şekil 8
Şekil 8

Şekil 8: paraboloidal ayna optik küp (10) yerleştirilen bir dedektör pozisyonu doğru ışığı yansıtır. Ayarı vidalar, germanyum (Ge) pencere yapacak küp (11), çıkışta yerleştirilen iğne deliğinden ışını. Işın iğne deliğinden ayarlanmış sonra, MCT d yerdeetector iğne deliği kapatın. He-Ne ışın dedektörü algılama elemanı olduğunu kızılötesi dedektör konumunu ayarlayın. ~ 2 mm (IR ışını Ge pencere aşağı kaymıştır olacaktır) dedektörü aşağı hareket ettirin.

Meclis adım I.5

Şekil 9
Şekil 9

Şekil 9: Ge pencere montaj optik küp (11) içine yerleştirin. Yansıma önleyici (AR) kaplı Ge penceresi IR filtresi ve izinler görsel gözlemler konsol ve örnek olarak hizmet vermektedir. (12) mercek takın. (10), küp küp (11), açı Büküm istenilen yönde mercek noktasına sağlar. Ge pencere montaj çevirerek, HeNe ışını mercek ortasından yönlendirilir.

Şekil 10
Şekil 10

Şekil 10: Connect IR objektif (8) ve AFM tarayıcı (2). Beamstop optik tüp (5) çıktı sonuna kadar takın. Mercek aracılığıyla HeNe ışın bakarken, koruyucu bir filtre kullanın. Tarayıcının üzerine yerleştirin ve bir örnek giriş optik tüp (5) ile HeNe ışını. HeNe ışını beamstop dökülmemesi için yeterince geniş olduğundan emin olun. Çünkü sadece ışının çevreden gelen ışık toplar Cassegrain amacı, beamstop kullanılır. Mercek konu ayarlayarak örnek odaklı HeNe demetinin keskin bir görüntü elde edilir.

Meclis adım I.6

Paraboloidal ayna son bir ayar gereklidir. Çıkış iğne deliği paraboloidal ayna odak konumunda iris ile değiştirilir. Ge pencere ve IR dedektörü (kızılötesi dedektör işareti konumunu!) Çıkarın. Ek bir lens, iris, lens odak uzaklığı yaklaşık, iris sonra takın. Şu anda meşgul konsol lens aracılığıyla görünür olmalıdır. Ucu kapalı iris yoluyla merkezi paraboloidal ayna konumunu ayarlayın. HeNe ışını ucuna doğru odaklanmış, örnek yüzeyinin ucu ve yansıması arasında parlak bir ışıltı yaptığı unutmayın. Ge pencere tekrar takın; konsol rahat görsel gözlem için ayarlayabilirsiniz. Iris iğne deliği ile değiştirin ve IR tespiti için kullanılan iğne deliği nedeniyle-Ge pencere IR ışını deplasman merkezi kaymıştır gerektiğini hatırlıyorum. IR dedektörü önceden işaretlenmiş bir konumda yerleştirin.

Son olarak, ayar için kullanılan görünür HeNe ışını ile birlikte yolculuk böylece IR ışını doğrudan.
Şimdi her şey rutin ayarı için hazır olmalıdır.

Rutin Ayarı:

Ayarlama adımının A.1:

HeNe-Lazer ile Hizalama

Bu görünmez IR (6μm yaklaşık) daha görünür HeNe (632nm) uyum sağlamak kolay.

HeNe ve IR kirişlerin yolunu eğilebilir ayna bir araya gelecek. Bu ayna aşağı hareket ettirildiğinde ise HeNe ayna pozisyonda ise yakın alan kurulum IR ışını yayar, pas. Diğer yolu ile kirişlerin birinin uyum için sadece iki ortak aynalar kullanmak ve eğilebilir ayna önünde yer almaktadır. Yanlışlıkla başka bir ayna hareket varsa, ilk ayna, eski konumuna geri getirmek için çalışacağız.

A.1.1. Kaba Hizalama ile iki Aynalar

Yakın alan bir aşamaya yol boyunca bütün süsen ile ışın hizalamak için HeNe lazer yakın iki ayna kullanın. Homodin kol ışın bakarsanız, korona benzeri ışın profili (optik tüp ışın engelleyici nedeniyle) dikkat edilmelidir. Bu ışın tüpleri düz geçtiğini gösterir.

A1.2. Yakın Alan Sahne Güzel Hizalama

AFM baş takın ve numune üzerine konsol ucu meşgul. HeNe ışını görüntüleme konsol ucuna odaklanın. Diye yerinden giriş optik tüp A.1 (5) tekrar ayarlama adımları ortasında kiriş yapıyorsanız. A.1.2. ışın merkezli kadar.

Translasyonel optik sahne hareket ettirerek, dağınık konsol ucu, apeks ışık yansıtan mikroskop objektif odak ayarlanır.

Döndür (optik küp içerisinde bulunan) mercek altına Ge ayna ve mercek aracılığıyla bakmak. Işını paraboloidal ayna (ya da kızılötesi dedektör üzerinde Ge ayna küp çıkardı) bu noktaya odaklanmıştır. Sahne örnek yüzeyinde ve onun yansıması ucu keskin bir görüntü elde edilinceye kadar geriye veya ileriye doğru hareket ettirin. Iki o kullanın.yönde (yukarı / aşağı ve sağ / sol) mercek ortasında yaklaşık AFM ucu yere.

Bir teleskopla bakıldığında, AFM konsol ve ucu görülmektedir. Yine HeNe ışın bakarken bir koruyucu filtre kullanmayı unutmayın. HeNe ışını olmadan, bazı kırmızı ışık hala AFM mesafe kontrol, iç ışık kaynaklanan görülmektedir. Translasyonel aşamada parlak kırmızı bir ışıltı bahşiş apeks görülünceye kadar sağ-sol ve / veya yukarı-aşağı yönde hareket ettirin. Uyumu oldukça kötü ise, AFM sol sahneye taşımak ve yavaşça sağa doğru hareket. Yansıtıcı numune yüzeyi boyunca hareket eden bir kırmızı yansıma için izleyin. Kırmızı yansıma hala görülmez ise, tekrar sola sahne çevirmek ve yukarı-aşağı moda hareket. AFM ucunun apekse HeNe demeti gibi kırmızı bir ışıltı elde edilinceye kadar sağ-sol, yukarı-aşağı çevirerek tutun.

A1.3. Dağınık ışık homodin alanına Çakışan

Homodin kolu açın ve mercek derinlemesine bakmak. Şiddeti azalan bir çizgi üç veya daha fazla lekeler görülür ve bu noktalar ön ve farklı optik, kıçlar birden fazla yansımalarının bir sonucudur. Homodin kol ayna taşıma ucu ve onun yansıması nerede bir araya gelen ucu, parlak bir görüntü ile ikinci nokta (alt ve şiddeti) örtüşmektedir böylece.

A1.4. Dedektörü yerleştirin

Ge ayna çıkarın ve HeNe demeti IR dedektörü bulunan yönde gitmek gerekir. Optik tüp arkasında, iki ringlike noktalar görülmektedir. Ikinci nokta (yoğunluğu), kızılötesi dedektör yüzündeki ısı koruma folyo delikten gitmeli noktadır. Yüksek yoğunlukta yerinde delik sınırında görülmelidir.

± 1.5. Bir örnek diğerine geçme

AFM uç örnek değiştirdikten sonra daha önce olduğu gibi aynı pozisyonda artık, ama çok uzakta olmamalıdır. Fark normalde çok büyük olmadığı için, adım A.1.2 ile başlayın.

Not: Hizalama yanmıyorsa, HeNe ışını hala tüm süsen geçer ve AFM ucunda parlak kırmızı bir ışıltı yaratır görmek için kontrol edin. Bazen dokundu ve bu yüzden orjinal pozisyonundan bir ayna hareket etti olduğunu fark yoktur. Hizalama hala kötüyse, ne yazık ki bütün uyum prosedürü tekrar tamamlanmış olmalıdır.

Ayarı adım 2: IR Işın uyumu

Hizalamayı kullanın, bu kadar yüksek bir yoğunluk / güç (en az 100 mW) bir CO lazer çizgisi bu daha kolay hale getirecek. Sıvı nitrojen ile dedektör doldurun ve en az 30 dakika dengelenmesi izin.

2.1. Kaba Hizalama ile iki Aynalar

Gelen IR ışını güç izlemek için ilk irisin arkasında bir güç ölçer yerleştirin. Sonra, en yüksek güç okuma elde etmek için eğilebilir ayna önünde bulunan ayna ayarlayın. Güç ölçer ve yakın alan sahneye en yakın ve maksimum güç okuma elde edilinceye kadar eğilebilir ayna ayarlamak irisin arkasında tutun. Bu adımı, en iyi ayarı için birkaç kez tekrarlayın.

2.2. 1f Sinyal izlemek

Referans kilit amplifikatör AFM osilasyon frekansı 1F (dahili), ayar ucu salınım frekansı frekans izole etmek için ayarlanmış olmalıdır. 3 mikron NanoScope yazılım kuvvet çizim modunda tarama boyutu ayarlayın. 2.1 kaba ayardan sonra, 1F sinyali doğru şekli bakın. Sonra, piezo sürücüsü ayarlayarak homodin kol ucu ve homodyned ışık toplanan dağınık ışık arasındaki faz ayarlamak. Bu piezo 1F sinyalinin ilk minimum sıfırdan başlayarak yaklaşık 500 nm böylece gerilim değiştirerek homodin kolunda ayna sürücüler. Uyum konusunda her değişiklik hem ışık yolları ve dolayısıyla göreceli fazları uzunluğunu değiştirmek, çünkü faz piezo ile düzeltilmiş olması gerekiyor.

(1f sinyal) neler göreceğiz?
Kötü Hizalama: 3 mikron z tarama boyutu iki diken diken uyulacaktır.
Orta Hizalama: Ilk yumru eğriliği konveks daha biraz daha içbükey görünüyor ve ikinci bir yumru birincisinden daha küçüktür.
(Neredeyse) Hizalama: İki diken diken uyulacaktır. Ilk yumru yumru daha yüksek olduğunu ve ilk yumru sağ tarafta eğrilik (konkav) negatif olacaktır.
Uyum için neler yapmak?
Kötü hizalama: Gerektiği gibi adım 2.1 'de uyum prosedürü tekrarlayın. IR ışını çapı büyük olduğundan, ışının en mükemmel uyumlu değildir irisin bile geçecek. Iki diken diken hala gözlenen olsa bile, 1F sinyal miktarını ayarlama biri veya her iki hizalama aynalar artırılabilir. Ilk yumru eğrilik hafif değişiklikler dikkat edin. Bu uyum en zor kısmı bu yana çoğu, sabırlı olun.
Orta Hizalama: Hizalama aynalar biri veya her ikisi de neredeyse iyi bir uyum elde etmek için ayarlamaya çalışın. XYZ translasyonel sahne de hareketli, ANCAK çok küçük artışlarla bu ayarlama deneyin.
(Neredeyse) Hizalama: Aynalar ayarlayın ve ilk yumru maksimum artırmak için çalışın. 1F sinyaller, daha az düşük giriş güçler için, 8 ila 16 V çevresinde genellikle. Piezo sürücüsünü kullanarak ilk minimum sıfıra yaklaşır, böylece gerilim değiştirerek faz değiştirin. Önemli bir 1F sinyali varsa, referans geçiş kilit amplifikatör 2F sinyali izole etmek için. Bazı sinyal gözlenir ve çok hafif aynalar ayarlama ve faz değiştirerek biraz daha artırmak için çalışın olmalıdır.

2.3. Bir örnek diğerine geçme

Adım A.1.5 HeNe ışın uyum altında çalıştırın. AFM ucu Engage ve IR ışını mikroskop aracılığıyla yaymak. 1F sinyal izleyin. 1F sinyal hala görülürse, eğilebilir ayna ayarlamak ve faz ayarlayın. Iyi bir sinyal ve bu nedenle iyi bir 2F sinyal IF hala görülebilir. Eğer değilse, ince ışın adım 2.2 kullanarak hizalayın.

Temsilcisi Sonuçlar:

Numune Hazırlama # 21-31 peptid HPLC ile Pittsburgh ve saflaştırılmış (>% 95) Üniversitesi Biyoteknoloji ve Biyomühendislik Merkezi sentezlenmiştir. 1 mM bir çözüm Yang ve arkadaşları tarafından yürütülen bir prosedüre benzer 18 M su içerisinde 21-31 peptid, amiloid fibriller sentezlemek için, TMAO (Sigma-Aldrich) 0,8 mg eklendi. Xiv

Ultraflat altın yüzeylerde xv yapılmıştır. Bir aylık solüsyonu (oda sıcaklığında inkübasyon, pH 5.5) 40 mcL taze ultraflat altın substratlar üzerine birkaç dakika için yatırılan oldu. Kısaca N 2 gaz akan kurumuş ve ANSIM cihazı yerleştirilmiş, 18 M su akışı ile durulanır .

Şekil 11 # 21-31 peptid fibriller için toplanan topografya ve yakın alan görüntüleri gösterir. A) Topoğrafya görüntü karşılık gelen alan yakın görüntü ile aynı anda elde. Etiketler bireysel fibriller temsil eden ve ikincil konformasyon her fibril türü özelliği için kullanılır. 1631 ve 1691 cm -1: B ve C) Sorumlu yakın alan görüntüler iki farklı yapının karakteristik denklemi toplanmıştır. Her görüntü alanı, 1 x 1 mikron 2 . Sol ölçekli yüksekliği temsil eder, sağ ölçekli, dağınık bir alanda kilit amplifikatör.

Şekil 11
Resim 11

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Biz minnetle NSF, NSERC, NIH ve ONR kabul etmiş sayılırsınız.

References

  1. Mueller, K., Yang, X., Paulite, M., Fakhraai, Z., Gunari, N., Walker, G. C. Chemical imaging of the surface of self-assembled polystyrene-b-poly(methyl methacrylate) diblock copolymer films using apertureless near-field IR microscopy. Langmuir. 24, 6946-6951 (2008).
  2. Lahrech, A., Bachelot, R., Gleyzes, P., Boccara, A. C. Infrared-reflection-mode near-field microscopy using an apertureless probe with a resolution of lambda/600. Opt. Lett. 21, 1315-1317 (1996).
  3. Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. Performance of visible and mid-infrared scattering-type near-field optical microscopes. J. Microsc. 210, 311-314 (2003).
  4. Kim, Z. H., Leone, S. R. Polarization-selective mapping of near-field intensity and phase around gold nanoparticles using apertureless near-field microscopy. Optics Express. 16, 1733-1741 (2008).
  5. Bridger, P. M., McGill, T. C. Observation of nanometer-scale optical property discrimination by use of a near-field scanning apertureless microscope. Opt. Lett. 24, 1005-1007 (1999).
  6. Stebounova, L., Akhremitchev, B. B., Walker, G. C. Enhancement of the weak scattered signal in apertureless near-field scanning infrared microscopy. Rev. Sci. Instrum. 74, 3670-3674 (2003).
  7. Akhremitchev, B. B., Pollack, S., Walker, G. C. Apertureless Scanning Near-Field Infrared Microscopy of a Rough Polymeric Surface. Langmuir. 17, 2774-2781 (2001).
  8. Hecht, B., Bielefeldt, H., Inouye, Y., Pohl, D. W., Novotny, L. Facts and Artifacts in Scanning Near-Field Optical Microscopy. J. Appl. Phys. 81, 2492-2498 (1997).
  9. Labardi, M., Patane, S., Allegrini, M. Artifact-free near-field optical imaging by apertureless microscopy. Appl. Phys. Lett. 77, 621-623 (2000).
  10. Palanker, D. V., Simanovskii, D. M., Huie, P., Smith, T. I. On Contrast Parameters and Topographic Artifacts in Near-Field Infrared Microscopy. J. Appl. Phys. 88, 6808-6814 (2000).
  11. Akhremitchev, B. B., Sun, Y., Stebounova, L., Walker, G. C. Monolayer-Sensitive Infrared Imaging of DNA Stripes Using Apertureless Near-Field Microscopy.Langmuir. 18, 5325-5328 (2002).
  12. Brehm, M., Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. Infrared Spectroscopic Mapping of Single Nanoparticles and Viruses at Nanoscale Resolution. Nano Lett. 7, 1307-1310 (2006).
  13. Dazzi, A., Prazeres, R., Glotin, F., Ortega, J. M. Analysis of nano-chemical mapping performed by an AFM-based ("AFMIR") acousto-optic technique. Ultramicroscopy. 107, 1194-1200 (2007).
  14. Yang, D. S., Yip, C. M., Huang, T. H. J., Chakrabartty, A., Fraser, P. E. Manipulating the Amyloid-β Aggregation Pathway with Chemical Chaperones. J. Biol. Chem. 274, 32970-32974 (1999).
  15. Meadows, P. Y., Walker, G. C. Force Microscopy Studies of Fibronectin Adsorption and Subsequent Cellular Adhesion to Substrates with Well-Defined Surface Chemistries. Langmuir. 21, 4096-4107 (2005).

Tags

Hücresel Biyoloji Sayı 33 nearfield görüntüleme kızılötesi amiloid fibril protein
Kurul, Tuning ve Protein Görüntüleme için bir Apertureless Yakın Alan Kızılötesi Mikroskop Kullanımı
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Paulite, M., Fakhraai, Z.,More

Paulite, M., Fakhraai, Z., Akhremitchev, B. B., Mueller, K., Walker, G. C. Assembly, Tuning and Use of an Apertureless Near Field Infrared Microscope for Protein Imaging. J. Vis. Exp. (33), e1581, doi:10.3791/1581 (2009).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video
Waiting X
Simple Hit Counter