Summary
Die Montage eines Nahfeld-Infrarot-Mikroskop für die Bildgebung Proteinaggregaten beschrieben.
Abstract
Dieses Papier soll den Leser in die Montage und den Betrieb eines Infrarot-Nahfeld-Mikroskop für die Bildgebung jenseits der Beugungsgrenze zu unterweisen. Die apertureless Nahfeld-Mikroskop ist ein Lichtstreuung-type Instrument, das Infrarot-Spektren liefert bei circa 20 nm Auflösung. Eine vollständige Liste der Komponenten und eine Schritt-für-Schritt-Protokoll für den Einsatz vorgesehen ist. Häufige Fehler in der Montage und Instrument Tuning diskutiert. Eine repräsentative Daten gesetzt, dass die sekundäre Struktur eines Amyloid-Fibrillen zeigt vorgestellt.
Protocol
Hintergrund:
Aperturlosen Sonde Nahfeld-IR-Mikroskopie bietet eine hohe räumliche Auflösung Bildgebung. Es ist eine relativ neue Technik, bei der ein Ereignis Infrarotstrahl durch eine scharfe Rasterkraftmikroskopie (AFM) Spitze oszillierenden bei der Resonanzfrequenz des Cantilevers nahe an der Probe gestreut wird. Ein IR-Detektor erfasst das Streulicht und bei dieser Resonanzfrequenz oder ihre Harmonischen demoduliert. Auf diese Weise kann der Hintergrund Streuung der fokussierte Laserstrahl trifft auf den Rest der Probenoberfläche reduziert werden, und einer räumlichen Auflösung weit jenseits der Beugungsgrenze des Lichts kann erreicht werden, um Infrarot-Kontrast mit nanoskaligen räumliche Auflösung i, ii, iii erhalten . Seit der Spitze des AFM-Spitze ist viel kleiner als der Schwerpunkt des Laserstrahls wird das Streulicht schwach. Um dieses Streufeld zu verbessern, homodyn wird eingesetzt, wenn ein Verweis Feld, um die gesammelten Streufeld und die relative Phase der Felder hinzugefügt wird, wird so eingestellt, dass maximale konstruktive Interferenz auftritt am Detektor. Die Streuintensität ist dann proportional zu der Größe der Referenz elektrisches Feld iv, v, vi. Ein wichtiges Thema in Nahfeld-Bildgebung ist es, Artefakte durch die z-Bewegung der AFM-Spitze VII, VIII, IX, X, XI produziert zu vermeiden. Dieses Problem kann mit der richtigen Einstellung der Homodyn Phase und ohne große topographische Merkmale, wie sie bereits von Müller et al reduziert werden. Diese Technik wird dann sicher verwendet werden, um die experimentelle Streuung Spektrum von Materialien mit einer räumlichen Auflösung von weniger als 30 nm 15 zu erhalten . Der Einsatz von Nahfeld-Mikroskopie für biologische Materialien wurde früher gezeigt, insbesondere für Makromoleküle wie Tabak-Mosaik-Virus xii und E. Coli Bakterien xiii.
In diesem Bericht zeigen wir die Montage eines solchen bildgebenden Gerät. Wir präsentieren auch Sekundärstruktur Informationen von Amyloid-Fibrillen aus der # 21-31 Peptidfragment β 2-m durch apertureless Nahfeld-Scan-Infrarot-Mikroskopie (ANSIM) erhalten wird. Nahfeld-Bilder werden gleichzeitig mit Topographie gesammelt, so dass die Erkennung und Erfassung der Streuung Spektrum der einzelnen Fibrillen.
Unsere apertureless Nahfeld-Scan-Infrarot-Mikroskop (ANSIM) Messungen ist eine hausgemachte Gerät. Die schematische Darstellung des experimentellen Aufbaus ist in Schema 1 gezeigt. Eine AFM-Mikroskop (Multimode, Veeco Instruments, Santa Barbara, CA) ist für die Messung der Topographie der Probe sowie die Herstellung der Nahfeld-verbesserte Streuung moduliert an der Spitze Schwingungsfrequenz verwendet. Tapping-Modus NSC14/Ti-Pt Platin beschichtete Cantilever (MicroMasch, Estland) werden verwendet, um die Streuung der kontinuierlichen, abstimmbaren IR-Laser (Frequenzbereich zu erhöhen: 2000 cm -1 bis 1600 cm -1, PL3 CO-Gas-Laser, Edinburgh Instruments, Großbritannien) in der Nähe der Oberfläche. Ein Helium-Neon-Laser (Melles Griot, Albuquerque, NM) Feld ist als Leitfaden für die unsichtbare Infrarot-Strahlung verwendet. Die IR-Laserlicht wird auf eine Linse propagiert nach dem Passieren eines ZnSe Teilreflektor. Es wird dann auf der Spitze des oszillierenden AFM-Spitze konzentriert, mit der Polarisation des Strahls parallel zur Längsachse der Sonde. Die IR-Strahlung durch die Linse gesammelt wird dann ein Verweis Homodyn Signal hinzugefügt. Ein Parabolspiegel wird verwendet, um die IR-Strahlung auf eine Quecksilber-Cadmium-Tellurid (MCT) Infrarot-Detektor (Graseby Infrarot, Orlando, FL) zu konzentrieren. Ein Piezo-Treiber (Thorlabs, Newton, NJ) wird genutzt, um das erfasste Signal durch eine Korrektur der Phase des Homodyn Licht zu maximieren. Die meisten der optischen oben beschriebenen Komponenten sind fest auf einer Plattform befestigt und verschoben in der XY-oder Z-Positionen mit einem translationalen Bühne. Die AC Bruchteil des erfassten Signals zu übertragen eines Lock-In-Verstärker (Modell SR844 RF, Stanford Research Systems, Sunnyvale, CA), die demoduliert das Signal an der Spitze Schwingungsfrequenz. Die Streuintensität beobachtet, wie die AFM-Spitze tastet die Oberfläche abgetastet und der Topographie-Daten gleichzeitig erhalten. Die Software für Daten-und Bilderfassung verwendet wird Nanoscope V5.31r1 (Veeco Instruments, Santa Barbara, CA).
Schema 1 
Abbildung 1 - zeigt die Teile des bildgebenden Systems, deren Montage und Nutzung beschreiben wir 
0) Optical Tabelle
1) Basis der MM AFM
2) Scanner von MM AFM
3) Erhöhte optische Steckbrett
(13 "x 18" x 3 / 8 ", Thorlabs)
4) Guiding Spiegel (Gold beschichtet, 1 "Durchmesser).
7) Optischer Tubus zur Sicherung Setup auf den Hubtisch (17 verwendet)
8) IR Ziel
(FL 16 mm, NA 0,28, Ealing)
9) Optische Röhre gesammelt rückgestreuten Licht
10) Cube w / off-axis Parabolspiegel
(90 °, FL 5 ", Janos)
11) Cube zu halten Ge Platte bei 45 °
12) Mikroskop-Okular (x10)
13) XY-Tisch montiert Lochkamera (0,5 mm)
14) MCT IR-Detektor (Graseby Infrared)
15) IR-Detektor-Vorverstärker (AC und DC)
16) XY mit dem Strahl zu bewegen
17) Hubtisch, um den Strahl Fokus
18) Z-Stufe auf Position des IR-Detektors
19) X-Bühne in Position des IR-Detektors
Montage Schritt I.1
Montieren Sie den optischen Aufbau und Tuning Spiegel und die Position der Helium-Neon (HeNe) Strahl parallel zur optischen Tisch (0) bei ca. richtige Höhe (H) über den optischen Steckbrett (3) und Distanz (D) aus der Mitte des Scanner (2).
Diese Höhe H und Distanz D kann aus der Höhe (H1) der Probe auf der Oberseite des Scanners (2) aus dem optischen Tisch, gewünschte Einfallswinkel (α), Höhe der Spitze der Steckbrett über dem optischen Tisch geschätzt werden (h), geometrische Größen der optischen Würfel-und IR-Ziel (6 und 8 in Abbildung 1) und der Arbeitsabstand von IR Ziel (alle zusammen d, hier d = 1 "+2" +2 ")
Abbildung 2 
H = H1 + d * sin (α)-h
D = d * cos (α)
Montage Schritt I.2
Abbildung 3 
Abbildung 3: Ohne den Strahlteiler in den Würfel (5) und mit länglichen optischen Tubus am anderen Ende des Würfels (6) direkt He-Ne-Strahl durch die Iris an den Enden der Rohre befestigt.
Montage Schritt I.3
Abbildung 4 
Abbildung 4: Mit dem Scanner (2) entfernt, bringen Sie die lange optischen Tubus mit der Iris am Ende statt der IR Ziel. Legen Sie die ZnSe Teilreflektor, um den Strahl auf die Probe durch Reisen durch den langen optischen Tubus direkt. Die ZnSe Teilreflektor sollte so montiert, dass die HeNe Strahl die vordere Oberfläche des Reflektors in der geometrischen Mitte des optischen Würfel hält die Teilreflektor hits werden.
Abbildung 5 
Abbildung 5: Durch Drehen des partiellen Spiegel, direkt dem HeNe-Strahl durch die geschlossene Leistung Iris. Da die Montage der partiellen Reflektor nicht im Besitz genau senkrecht, gibt es zwei Heim-installiert Stellschrauben, so dass für die vertikale Bewegung des Balkens. Verwenden Sie diese, wenn nötig.
Abbildung 6 
Montage Schritt I.4
Abbildung 6. Montieren Sie den Parabolspiegel mit Gummi-O-Ringe in der optischen Würfels (siehe 1, Abb. 5). Durch das Anziehen der Schrauben, komprimieren Sie die O-Ringe, so dass für Spiegelverstellung.
Abbildung 7 
Mit zusätzlichen Spiegeln (man ist auf Abbildung 7) leiten die HeNe Strahl in die entgegengesetzte Richtung, wie in Abbildung 7 dargestellt. Stellen Sie den Strahl durch die bisher verwendeten Iris passieren. Dieser Strahl wird verwendet, um den Parabolspiegel anzupassen.
Abbildung 8 
Abbildung 8: Ein Parabolspiegel in der optischen Würfel (10) platziert reflektiert das Licht in Richtung der Position des Detektors. Einstellschrauben direkten der Strahl durch das Loch am Ausgang des Würfels (11), die das Germanium (Ge)-Fenster halten platziert. Nach der Strahl durch das Loch abgestimmt ist, legen Sie die MCT detector der Lochkamera zu schließen. Passen Sie die Position des IR-Detektors, so dass He-Ne-Strahl auf das Sensorelement des Detektors ist. Bewegen Sie den Detektor nach ~ 2 mm (IR-Strahl wird von den Ge-Fenster verschoben werden).
Montage Schritt I.5
Abbildung 9 
Abbildung 9: Setzen Sie die Halterung mit Ge-Fenster in optischen Würfel (11). Die Anti-Reflex (AR) beschichtet Ge-Fenster dient als IR-Filter und ermöglicht die visuelle Beobachtungen der Cantilever und Probe. Bringen Sie das Okular (12). Verdrehwinkel des Würfels (11) in Bezug auf Würfel (10) erlaubt es, das Okular in die gewünschte Richtung zu weisen. Durch Drehen der Halterung des Ge-Fenster, wird die HeNe-Strahl durch die Mitte des Okular geleitet.
Abbildung 10 
Abbildung 10: Connect IR Ziel (8) und AFM-Scanner (2). Bringen Sie die beamstop den Ausgang des optischen Tubus (5). Verwenden Sie einen Schutzfilter bei der Anzeige der HeNe-Strahl durch das Okular. Position einer Probe auf den Scanner und leitet die HeNe-Strahl durch die Eingabe optischen Tubus (5). Sicherstellen, dass die HeNe Strahl breit genug, um überschwappen der beamstop. Die beamstop ist wegen der Cassegrain Ziel, das nur sammelt einfallendes Licht von der Peripherie des Strahls verwendet. Durch die Anpassung der Faden des Okular ein scharfes Bild des HeNe Strahl auf die Probe fokussiert wird erhalten.
Montage Schritt I.6
Eine endgültige Einstellung der Parabolspiegel ist nicht erforderlich. Der Ausgang Loch ist mit der Iris in der Fokuslage des Parabolspiegel ersetzt. Entfernen Sie die Ge-Fenster-und IR-Detektor (mark Position des IR-Detektor!). Bringen Sie eine zusätzliche Linse nach der Iris an die ungefähre Brennweite der Linse von der Iris. In diesem Augenblick beschäftigt Cantilever sichtbar sein soll durch die Linse. Passen Sie die Position der Parabolspiegel bis Mitte Ende der Spitze durch die geschlossene Blende. Beachten Sie, dass, wenn die HeNe Strahl richtig auf die Spitze konzentriert, ist es ein helles Funkeln zwischen der Spitze und es ist Reflexion über der Oberfläche der Probe macht. Re-attach die Ge-Fenster; passen Sie für die bequeme, visuelle Beobachtung des Auslegers. Ersetzen Sie die Iris mit der Lochkamera und denken Sie daran, dass die Pinhole für IR-Detektion verwendet off-Zentrum sollte durch die IR-Strahl Verschiebung von der Ge-Fenster verschoben. Legen Sie die IR-Detektor bei der zuvor markierten Position.
Schließlich direkten IR-Strahl, so dass es zusammen reist mit dem sichtbaren HeNe Strahl für die Abstimmung verwendet.
Jetzt sollte alles bereit sein für die routinemäßige Anpassung.
Routine Einstellung:
Adjustment Schritt A.1:
Die Angleichung an HeNe-Laser
Es ist einfacher, mit dem sichtbaren HeNe (632nm) align als mit dem unsichtbaren IR (ca. 6μm).
Der Weg des HeNe und der IR-Strahlen zusammen an der kippbaren Spiegel kommen. Wenn dieser Spiegel ist nach unten geneigt die HeNe passieren kann, wenn der Spiegel in Position der IR-Strahl auf die Nahfeld-Setup ausbreitet. Zur Ausrichtung von einem der Balken, verwenden Sie die beiden Spiegel nicht gemeinsam mit den anderen Weg und werden vor dem kippbaren Spiegel befindet. Wenn Sie versehentlich einen anderen Spiegel bewegt haben, versuchen Sie zunächst dieser Spiegel zurück zu bringen, in seiner alten Position.
A.1.1. Grobausrichtung mit zwei Spiegeln
Verwenden Sie die beiden Spiegel in der Nähe des HeNe-Laser, um den Strahl durch alle die Iris auf dem Weg zur Nahfeld-Bühne auszurichten. Wenn man sich die Balken in der Homodyn Arm aussehen sollte eine Corona-like Strahlprofil beobachtet (wegen der Strahl-Blocker in den optischen Tubus) werden. Dies deutet darauf hin, dass der Strahl geradeaus durch die Rohre fließt.
A1.2. Fein-Ausrichtung mit Near-Field Stadium
Bringen Sie die AFM Kopf und greifen die Cantileverspitze auf die Probe. Fokus der HeNe Laserstrahl auf das Ende der Bildgebung Freischwinger. Wenn dabei verdrängt den Strahl aus der Mitte des Eingangs optischen Tubus (5) wiederholen Sie den Einstellvorgang Schritte A.1. und A.1.2. bis der Strahl zentriert ist.
Durch Bewegen der translationalen optische Stufe ist die reflektierende Mikroskop-Objektiv justiert, um das Licht auf der Spitze des Auslegers Spitze, wo sie verstreut konzentrieren.
Drehen Sie das Ge Spiegel unten das Okular (mit Sitz in der optischen Würfel) und schauen Sie durch das Okular. Der Strahl wird an dieser Stelle (oder auf der IR-Detektor, wenn die Ge Spiegel außerhalb des Würfels gezogen) durch den Parabolspiegel fokussiert. Bewegen Sie die Bühne nach hinten oder nach vorne, bis ein scharfes Bild von der Spitze und seine Reflexion auf der Probenoberfläche zu beobachten ist. Mit den beiden oEs Richtungen (oben / unten und rechts / links) auf die AFM-Spitze etwa in der Mitte des Okulars Platz.
Blick durch ein Teleskop, ist die AFM-Cantilever und die Spitze beobachtet. Auch daran denken, ein Schutzfilter verwenden bei der Anzeige der HeNe Strahl. Ohne die HeNe Strahl ist etwas rotes Licht noch zu beobachten, die stammt aus dem internen Licht der AFM Abstandsregelung. Bewegen Sie die translationale Stufe in einer Rechts-Links-und / oder oben-unten, bis ein leuchtend roten Glanz an der Spitze Spitze beobachtet wird. Wenn die Ausrichtung ist ziemlich schlecht, bewegen die Bühne auf der linken Seite des AFM und nach rechts bewegen sich langsam. Achten Sie auf eine rot Reflexion bewegt über den reflektierenden Probenoberfläche. Wenn die rote Reflexion ist noch nicht beobachtet, übersetzen die Bühne wieder nach links und bewegen sich in einer up-down Mode. Halten Sie die Übersetzung links-rechts, oben-unten, bis ein roter Glanz beobachtet, wie Sie die HeNe Strahl Fokus auf der Spitze des AFM-Spitze.
A1.3. Überlappung der Homodyn Feld mit Streulicht
Öffnen Sie die Homodyn Arm und Blick gründliche das Okular. Drei oder mehr Punkte in einer Linie mit abnehmender Intensität wahrgenommen wird und diese Flecken sind das Ergebnis einer mehrfachen Reflexionen auf Vorder-und Rückseiten der verschiedenen Optiken. Bewegen Sie den Spiegel in der Homodyn Arm so, dass die zweite Stelle (von unten und in der Intensität) überschneidet sich mit dem hellen Bild von der Spitze, die, wo die Spitze und ihre Reflexion zusammen kommen wird.
A1.4. Positionieren Sie den Detektor
Entfernen Sie die Ge Spiegel und dem HeNe Strahl sollte in die Richtung, wo der IR-Detektor befindet sich gehen. Hinter dem optischen Tubus sind zwei ringförmige Flecken beobachtet. Der zweite Fleck (Intensität) ist die Stelle, die durch das Loch der Hitzeschutz-Folie auf dem Gesicht des IR-Detektors gehen sollte. Der Spot mit der höchsten Intensität sollte an der Grenze zwischen dem Loch zu sehen.
A1.5. Der Wechsel von einer Probe zur anderen
Nach dem Wechsel der Probe der AFM-Spitze ist nicht mehr in der exakt gleichen Position wie zuvor, sollte aber nicht zu weit weg sein. Beginnen Sie mit Schritt A.1.2, da die Differenz in der Regel nicht sehr groß ist.
Hinweis: Wenn die Ausrichtung nicht leuchtet, überprüfen Sie, ob die HeNe Strahl geht noch durch all die Iris und schafft eine helle rote Funkeln auf der AFM-Spitze. Manchmal muss man nicht merken, dass Sie berührt haben und deshalb zog einen Spiegel aus ihrer ursprünglichen Position. Wenn die Ausrichtung ist nach wie vor schlecht, leider die ganze Ausrichtung Verfahren muss erneut durchgeführt werden.
Adjustment Schritt 2: Ausrichtung der IR-Strahl
Verwenden Sie ein CO-Laser mit einer hohen Intensität / Leistung (mindestens 100 mW), da dies macht die Ausrichtung zu erleichtern. Füllen Sie den Detektor mit flüssigem Stickstoff und lassen Sie es für mindestens 30 Minuten ausgleichen.
2.1. Grobausrichtung mit zwei Spiegeln
Legen Sie einen Leistungsmesser hinter der ersten Blende, um die Macht der eingehenden IR-Strahl zu überwachen. Als nächstes stellen Sie den Spiegel, der vor dem kippbaren Spiegel befindet, um die höchste Leistung zu lesen bekommen. Nehmen Sie den Leistungsmesser und halten Sie sie hinter der Iris, die am nächsten an der Nahfeld-Stadium ist und stellen Sie die kippbare Spiegel, bis eine maximale Leistung Messwert erreicht ist. Wiederholen Sie diesen Schritt ein paar Mal für optimale Anpassung.
2.2. Watching the 1f Signal
Der Bezug der Lock-In Verstärker muss auf die Isolierung der Frequenz der Spitze Schwingungsfrequenz, indem Sie ihn bis 1F (ext.), die die AFM Schwingungsfrequenz ist. Stellen Sie die Scan-Format in Kraft Plot-Modus in der Nanoscope Software bis 3 um. Nach Grobeinstellung in 2.1., Für die richtige Form der 1F-Signal zu suchen. Als Nächstes passen die Phase zwischen dem Streulicht von der Spitze und der homodyned Licht aus dem Homodyn Arm durch Anpassung der Piezo-Treiber gesammelt. Dies treibt den Spiegel in der Homodyn Arm Durch die Veränderung der Spannung der Piezo, so dass das erste Minimum der 1F-Signal um 500 nm ab Null ist. Denn jede Veränderung in der Ausrichtung der Länge der beiden Wege des Lichts und somit ihre relativen Phasen ändern wird, muss die Phase mit dem Piezo korrigiert werden.
| Was werden Sie sehen (1f-Signal)? | |
| Bad Alignment: | Zwei Beulen auf dem 3 um z Scangröße beobachtet werden. |
| Medium Alignment: | Die Krümmung der ersten Beule sieht ein bisschen mehr konkav als konvex und der zweite Stoß ist kleiner als die erste. |
| (Fast) Gute Alignment: | Zwei Beulen werden eingehalten. Die erste Beule ist höher als die zweite Beule, und die Krümmung auf der rechten Seite des ersten Stoß wird negativ sein (konkav). |
| Was für die Ausrichtung zu tun? | |
| Bad Ausrichtung: | Wiederholen Sie die Ausrichtung Verfahren in Schritt 2.1 als erforderlich. Da der IR-Strahl Durchmesser groß ist, wird der Großteil der Strahl passieren die Iris, auch wenn es nicht perfekt ausgerichtet. Selbst wenn zwei Bodenwellen noch eingehalten werden, kann die Menge der 1F-Signal durch Abstimmung eine oder beide der Ausrichtung Spiegel erhöht werden. Achten Sie auf leichte Veränderungen in der Krümmung der ersten Erhebung. Vor allem Geduld, da dies der schwierigste Teil der Ausrichtung. |
| Medium Alignment: | Versuchen Sie, passen Sie eine oder beide der Ausrichtung spiegelt eine fast gute Ausrichtung zu erhalten. Versuchen Sie, die XYZ-translationale Bühne als gut, aber unter Anpassung von sehr kleinen Schritten. |
| (Fast) Gute Alignment: | Stellen Sie den Spiegel und versuchen, das Maximum der ersten Beule zu erhöhen. 1F-Signale werden in der Regel etwa 8 bis 16 V, für Low-Input Kräfte ist es weniger. Ändern Sie die Phase durch Änderung der Spannung mit dem Piezo-Treiber, so dass das erste Minimum nähert sich Null. Wenn es einen signifikanten 1F-Signal, schalten Sie die Referenz des Lock-in-Verstärker an die 2F-Signal zu isolieren. Einige der Signal zu beachten und die versuchen, es ein bisschen mehr zu verbessern, indem sehr leicht Abstimmung der Spiegel und die Änderung der Phase. |
2.3. Der Wechsel von einer Probe zur anderen
Führen Sie Schritt A.1.5 unter der Ausrichtung des HeNe Strahl. Engage der AFM-Spitze und propagieren den IR-Strahl durch das Mikroskop. Beobachten Sie die 1F-Signal. Wenn ein 1F Signal noch beobachtet wird, passen Sie die kippbare Spiegel und stellen Sie die Phase. Eine gute ZF-Signal und somit ein guter 2F Signal kann noch beobachtet werden. Wenn nicht, fein ausrichten Strahl mit Schritt 2.2.
Repräsentative Ergebnisse:
Probenvorbereitung Die # 21-31 Peptid wurde am Center for Biotechnology and Bioengineering an der Universität von Pittsburgh und gereinigt (> 95%) durch HPLC synthetisiert. Um die Amyloid-Fibrillen, 0,8 mg TMAO (Sigma-Aldrich) zu synthetisieren wurde zu einer Lösung von 1 mM # 21-31 Peptid in 18 MOhm Wasser, ähnlich wie bei einem Verfahren von Yang et al ausgeführt aufgenommen. Xiv
Ultraflache Goldsubstraten xv wurden. 40 ul der einmonatigen alten Lösung (Inkubation bei Raumtemperatur, pH 5,5) wurde für einige Minuten auf frische ultraflache Gold Substraten abgeschieden. Sie wurden kurz mit einem Strom von 18 MOhm Wasser gespült, getrocknet mit fließendem N 2-Gas und positioniert in der ANSIM Instrument.
Abbildung 11 zeigt Topographie und Nahfeld-Bilder für die # 21-31 Peptid-Fibrillen gesammelt. A) Topographie Bild gleichzeitig mit dem entsprechenden Nahfeld-Bild erhalten. Die Etiketten stellen einzelne Fibrillen und werden verwendet, um die Art der sekundären Konformation jeder Fibrille hat Funktion. 1631 und 1691 cm -1: B und C) Entsprechende Nahfeld-Bilder in zwei verschiedenen Wellenzahlen gesammelt. Die Fläche jedes Bild ist 1 x 1 &mgr; m 2. Linke Skala repräsentiert Höhe, ist rechte Skala die verstreuten Feld aus der Lock-in-Verstärker.
Abbildung 11 
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Acknowledgments
Wir danken der NSF, NSERC, NIH und ONR.
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