Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

조립, 조정 및 단백질 이미징을위한 Apertureless 니어 필드 적외선 분광 현미경의 사용

Published: November 25, 2009 doi: 10.3791/1581

Summary

이미징 단백질 집계에 nearfield 적외선 현미경의 어셈블리가 설명되어 있습니다.

Abstract

본 논문은 회절 한계 이상의 이미징을위한 적외선 니어 필드 현미경의 조립 및 운영에 독자를 지시하는 것을 목표로하고있다. apertureless 니어 필드 현미경 써카 20 nm의 해상도에서 적외선 스펙트럼을 제공하는 광 산란 형태의 악기이다. 구성 요소와 사용하기 위해 단계별로 프로토콜의 전체 목록이 제공됩니다. 조립 및 악기 튜닝에 일반 오류가 설명합니다. 아밀로이드 근모의 차 구조를 보여주는 대표적인 데이터 집합이 제공됩니다.

Protocol

배경 :

Apertureless 프로브 니어 필드 적외선 현미경은 높은 공간 해상도의 영상을 제공합니다. 그것은 사건 적외선 광선이 가까운 샘플로 캔틸레버의 공진 주파수로 진동 날카로운 원자 힘 현미경 (AFM) 팁에 의해 흩어져있는 비교적 새로운 기술입니다. IR 탐지기가 흩어져 빛을를 수집하고이 공진 주파수 또는 그 고조파에 복조된입니다. 이러한 방법으로 샘플 표면의 나머지 부분에 초점을 맞춘 레이저 빔 사건의 배경 분산을 줄일 수 있으며, 멀리 빛의 회절 한계 이상의 공간 해상도 nanoscale 공간적 해상도 I, II, III와 적외선 대비를 얻을 얻을 수 . AFM 팁의 꼭대기에서 레이저 광선의 초점 영역보다 훨씬 작은 있기 때문에, 흩어져 불빛이 약한 것입니다. 참조 필드가 수집 흩어져 필드와 필드의 상대적인 위상에 추가됩니다 곳이 흩어져있는 분야를 강화하기 위해 homodyne 감지가 사용이 같은 것을 최대 건설 간섭이 검출기에서 발생 설정되어 있습니다. 산란 강도는 다음 참조 전기장 IV, V, 바이올렛의 크기에 비례합니다. 가까운 현장 영상에서 중요한 문제는 AFM 팁 VII, VIII, IX, X, 사이의 Z - 모션에 의해 만들어진 유물을 방지하는 것입니다. 이 문제는 적절한 homodyne 단계의 조정 및 대형 지형 등 이전 뮐러 입증 제외로 줄일 수 있습니다.이 방법은 다음 안정적으로 30 nm의 15 공간적 해상도 재료의 실험 분산 스펙트럼을 얻을하는 데 사용됩니다 . 생물 학적 물질에 대한 니어 필드 현미경의 사용은 특히 이전과 같은 담배 모자이크 바이러스 XII와 E. 콜리 박테리아 XIII 등 macromolecules 위해 증명되었습니다.

이 보고서에서 우리는 같은 이미징 장치의 조립을 설명합니다. 우리는 또한 적외선 현미경 (ANSIM)를 스캔 apertureless 근처 분야 얻은 β의 # 21-31 펩티드 조각 2 m에서 구성된 아밀로이드 원섬유의 차 구조 정보를 제시한다. 니어 필드 이미지는 개별 원섬유의 산란 스펙트럼의 탐지 및 컬렉션을 사용, 지형과 동시에 수집하고 있습니다.

우리 apertureless 니어 필드 스캔 적외선 현미경 (ANSIM) 측정이 만든 장치입니다. 실험 설정의 개략도는 계획 1 표시됩니다. AFM 현미경은 (멀티모드, Veeco 인 스트 루먼트, 산타 바바라, CA) 샘플의 지형을 측정뿐만 아니라 팁 진동 주파수에서 변조된 가까운 필드 향상된 산란를 생산하는 데 사용됩니다. 2천cm -1 1천6백cm -1, PL3 CO 가스 레이저, : 도청 모드, NSC14/Ti-Pt 백금 코팅 cantilevers (MicroMasch, 에스 토니아)은 지속적으로 조정할 수있는 IR 레이저 (주파수 범위의 분산을 향상하는 데 사용됩니다 표면 근처에 에딘버러 계측기, 영국). 헬륨 네온 레이저 (Melles Griot, 알버커키, NM) 필드가 눈에 보이지 않는 적외선 방사를위한 가이드로 사용됩니다. IR 레이저 빛은 ZnSe 부분 반사경을 통과 후 렌즈 방향으로 전파됩니다. 그것은 다음 프로브의 긴 축에 평행 광선의 편광과 진동 AFM 팁의 꼭대기에 초점을 맞추고 있습니다. 렌즈에 의해 수집된 IR 방사는 다음 참조 homodyne 신호에 추가됩니다. paraboloidal 미러는 수은 카드뮴 텔루라이드 (MCT) 적외선 감지기 (적외선 Graseby, 올랜도, FL)에 IR 방사선을 집중하는 데 사용됩니다. 압전 드라이버 (Thorlabs, 뉴턴, NJ) homodyne 조명의 단계를 수정하여 감지된 신호를 최대화하기 위해 활용됩니다. 위에서 설명한 광학 부품의 대부분은 플랫폼에 단단히 부착된와 XY 또는 translational 단계를 사용하여 Z의 위치에 이동됩니다. 감지 신호의 AC 분율이 전달되는 잠금에 앰프 (모델 SR844 RF, 스탠포드 연구 시스템, 서니 베일, CA) 어느 팁 진동 주파수에서 신호를 demodulates. AFM 팁이 샘플 표면을 스캔하고 지형 데이터를 동시에 취득이므로 산란 강도가 관찰됩니다. 데이터 및 이미지 수집에 사용되는 소프트웨어는 Nanoscope V5.31r1 (Veeco 인 스트 루먼트, 산타 바바라, CA)입니다.

Scheme1
방식 1

그림 1은 - 누구의 조립 및 사용 우리가 설명됩니다 이미징 시스템의 부분을 보여줍니다
figure1

0) 광학 테이블
MM AFM 1)베이스
MM AFM 2) 스캐너
3) 고가 광학 브레드 보드
(13 "X 18"X 3 / 8 ", Thorlabs)
4) 가이딩 거울 (골드 코팅, 1 "디아.)
6) 광 큐브 W / ZnSe 부분의 반사판
7) 광 관은 이팅 플랫폼에 설치 (17)를 확보에 사용
8) IR의 목적
(FL 16mm, NA 0.28, 일링)
9) 수집 백업 흩어진 빛이 광 튜브
10) 큐브 W / 오프 축 paraboloidal 거울
(90 °, FL 5 ", 야노쉬)
GE 플레이트에게 @ 45 개최 11) 큐브 °
12) 현미경의 접안 렌즈 (X10)
13) XY - 스테이지 장착 핀홀 (0.5 ㎜)
14) MCT IR 검출기 (Graseby 적외선)
15) IR 검출기 preamp (AC 및 DC)
16) 빔 위치를 이동 XY 스테이지
17) 빔을 초점을 이팅 테이블
18) Z - 스테이지 IR 감지기 위치
19) X - 스테이지 IR 감지기 위치

그림 1

광학 설치의 I. 초기 조립

조립 단계 I.1

광학 설정을 구성하고 튜닝 미러와 위치의 중심에서 광학 브레드 보드 (3) 거리 (D) 위에 약 올바른 높이 (H)의 광학 테이블 (0) 헬륨 - 네온 (HeNe) 빔 병렬로 스캐너 (2).

이 높이 H와 거리 D는 광 표 위에있는 광학 테이블에서 스캐너 (2) 발생의 원하는 각도 (α), 브레드 보드의 상단의 높이의 상단에있는 샘플의 높이 (H1)에서 예상 수 (H), 광학 큐브 및 IR 목표 (그림 1 6 8) 및 IR 목표의 작동 거리 (모두 함께 D, 여기에 D = 1 "2"2 ")의 기하학적 크기

그림 2
그림 2

H = H1 + D * 죄 (α) - H

D = D * 왜냐하면 (α)

어셈블리 단계 I.2

그림 3
그림 3

그림 3 : 큐브 (5)의 beamsplitter없이와 큐브 (6)의 다른 끝에 길쭉한 광학 튜브로이 튜브의 끝에 붙어있는 붓꽃을 통해 그가 - NE 광선을 직접.

조립 단계 I.3

그림 4
그림 4

그림 4 : 스캐너 (2) 제거를 통해 IR 목적 대신에 끝에있는 홍채와 함께 긴 광학 튜브를 연결합니다. 긴 광학 튜브를 여행하여 샘플을 향해 빔을 직접하는 ZnSe 부분 반사경을 삽입합니다. ZnSe 부분 반사는 HeNe 빔이 부분 반사체를 가지고있는 광학 큐브의 기하학적 중심에 반사판의 전면 표면을 치는 것과 같은 장착해야합니다.

그림 5
그림 5

그림 5 : 부분 반사경을 회전함으로써, 폐쇄 출력 홍채를 통해 HeNe 광선을 직접. 부분 반사의 마운트 정확히 직각을 보유하지 않기 때문에, 두 가정 설치된 조정 나사는 빔의 수직 운동에 대한 수있다. 그 필요한 경우를 사용합니다.

그림 6
그림 6

조립 단계 I.4

그림 6. 광학 큐브에 고무 O - 링 (그림 5 1 참조)과 함께 paraboloidal 미러를 탑재합니다. 나사를 강화함으로써, O - 링은 거울 조정있게 압축합니다.

그림 7 그림 7

그림 7 그림과 같이 추가적인 거울와 (과 하나가 그림 7에 표시됩니다), 반대 방향으로 HeNe 광선을 직접. 이전에 사용 붓꽃을 통과하는 광선을 조정합니다. 이 광선은 paraboloidal 미러를 조정하는 데 사용됩니다.

그림 8
그림 8

그림 8 : 광학 큐브 (10)에 배치 paraboloidal 미러 검출기의 위치 방향으로 빛을 반영합니다. 조정 나사는 게르마늄 (GE) 창을 개최됩니다 큐브 (11)의 출력에 배치 핀홀을 통해 광선을 직접. 빔가 핀홀을 통해 조정되면 MCT D 배치etector은 핀홀을 닫습니다. 그는 - NE 빔은 검출기의 감지 요소에 이러한 IR 검출기의 위치를​​ 조정합니다. ~ 2mm (IR 광선은 GE 창에서 아래로 이동합니다)의 검출기를 이동합니다.

조립 단계 I.5

그림 9
그림 9

그림 9 : 광학 큐브 (11)에 GE 창으로 마운트를 삽입합니다. 반사 (AR)는 코팅 GE 창이 IR 필터와 허용 시각적 관찰 캔틸레버 및 샘플 역할을합니다. 접안 렌즈 (12)를 연결합니다. 큐브와 관련하여 큐브 (11)의 각도를 복잡하게하는 것은 (10) 그 중 하나가 원하는 방향으로 접안 렌즈를 가리 키 수 있습니다. GE 윈도우의 마운트를 회전함으로써, HeNe 빔은 접안 렌즈 중앙으로 이동합니다.

그림 10
그림 10

그림 10 : 연결 IR 목적 (8)과 AFM 스캐너 (2). 광학 튜브 (5)의 출력 끝에 beamstop을 첨부합니다. 접안 렌즈를 통해 HeNe 광선을 볼 때 보호 필터를 사용합니다. 스캐너에 샘플을 위치 입력 광 튜브 (5)를 통해 HeNe 광선을 직접. HeNe 빔이 beamstop를 통해 유출 정도로 다양한 있는지 확인하십시오. beamstop 때문에 단지 빔의 주변에서 들어오는 빛을 수집 Cassegrain 목표의하는 데 사용됩니다. 접안 렌즈의 스레드를 조정하여 샘플에 초점을 HeNe 빔의 선명한 이미지를 얻을 수 있습니다.

조립 단계 I.6

paraboloidal 거울의 최종 조정이 필요합니다. 출력 핀홀이 paraboloidal 거울의 초점 위치에있는 홍채로 바뀝니다. GE 창 및 IR 탐지기 (IR 탐지기의 마크 위치!)를 제거합니다. 홍채에서 렌즈의 대략적인 초점 거리에서 홍채 후 추가 렌즈를 부착합니다. 이 순간에 종사 캔틸레버는 렌즈를 통해 볼 수 있습니다. 센터 폐쇄 홍채를 통해 팁의 끝을 위해 paraboloidal 거울의 위치를​​ 조정합니다. HeNe 빔이 올바르게 끝에 초점을 맞춘 경우, 이것은 시료의 표면에 팁과 반영의 사이에 밝은 '스파클하게합니다. GE 창을 다시 장착, 캔틸레버의 편리한 시각적 관찰을 위해 조정합니다. 핀홀과 아이리스 교체 및 IR 감지에 사용되는 핀홀이 GE 창으로 IR 빔 변위로 인해 중심을 이동한다는 사실을 기억하십시오. 이전에 표시된 위치에 IR 감지기를 놓습니다.

그것이 조정에 사용되는 표시 HeNe 빔와 함께 여행을되도록 마지막으로, IR 광선을 직접.
지금은 모든것을 일상적인 조정을위한 준비를해야합니다.

정기적인 조정 :

조정 단계 A.1 :

HeNe 레이저로 정렬

그것은 눈에 보이지 않는 적외선 (6μm 정도)보다 보이는 HeNe (632nm)로 정렬하기 쉽게.

HeNe 및 IR 광선의 경로는 tiltable 거울에서 함께. 이 미러가 아래로 기울어져있다면 HeNe은 미러 위치에있다면 IR 광선은 거의 현장 설치에​​ 전파, 전달할 수 있습니다. 빔 중 하나의 정렬에 대해서만, 다른 경로로 공통의 두 거울을 사용하지하고 tiltable 거울 앞에 위치하고 있습니다. 실수로 다른 미러를 이동하는 경우, 먼저 오래된 위치에 돌려 거울을 가져보십시오.

A.1.1. 이 거울 조잡해 정렬

가까운 필드 단계의 경로를 따라 모든 붓꽃을 통해 빔을 정렬 HeNe 레이저에 가까운 두 거울을 사용합니다. 당신이 homodyne 암의 빔 보면 코로나 같은 빔 프로필 (광학 튜브의 빔 차단으로 인해) 관찰해야합니다. 이것은 레이저가 바로 튜브 통과했음을 나타냅니다.

A1.2. 니어 - 필드 스테이지와 파인 정렬

AFM의 머리를 첨부하여 샘플로 캔틸레버 팁을 참여. 이미징 캔틸레버의 끝에 위에 HeNe 광선을 초점. 입력 광 튜브 A.1 (5) 반복 조정 단계의 중간에서 이렇게 displaces에게 광선을하는 경우. 그리고 A.1.2. 빔이 중심 때까지.

translational 광학 무대를 이동하여, 반사 현미경의 목적은 그것이 흩어져있는 캔틸레버 팁의 꼭대기에 빛을 초점을 조정됩니다.

접안 렌즈 아래에 GE의 미러 (광학 큐브에 위치) 회전과 접안 렌즈를 통해보세요. 빔은 paraboloidal 거울에 의해이 시점 (또는 GE의 거울이 큐브에서 철수하는 IR 탐지기에)에 초점을두고 있습니다. 샘플 표면에 끝과 반성의 날카로운 이미지가 관찰 때까지 뒤로 또는 앞으로 무대를 이동합니다. 두 O를 사용하여방향 (위 / 아래와 오른쪽 / 왼쪽)은 약 접안 렌즈의 중간에있는 AFM 팁을이 자리합니다.

망원경을 통해 찾고, AFM의 캔틸레버과 팁을이 관찰됩니다. 다시 HeNe 광선을 볼 때 보호 필터를 사용해야합니다. HeNe 빔없이 일부 빨간 불빛은 여전히​​ AFM 거리 컨트롤의 내부 빛으로부터 유래하는 관찰이다. 밝은 빨간색 '스파클'가 팁 꼭대기에서 관찰 때까지 오른쪽에서 왼쪽 및 / 또는 위, 아래 방향으로 translational 단계로 이동합니다. 정렬이 매우 나쁜 경우, AFM의 왼쪽에있는 무대를 이동하고 천천히 오른쪽으로 이동합니다. 반사 샘플 표면에 걸쳐 이동 붉은 반성보세요. 붉은 반사가 아직 관찰되지 않은 경우, 다시 왼쪽으로 무대를 번역하고 최대 다운 방식으로 이동합니다. 당신은 AFM 팁의 꼭대기에있는 HeNe 광선을 초점으로 붉은 스파클 '이 관찰 때까지 왼쪽, 오른쪽, 위, 아래 번역을 계속.

A1.3. 흩어진 빛이 함께 homodyne 필드를 중복

homodyne의 팔을 열고 접안 렌즈를 철저하게보세요. 감소 강도와 라인에 세 개 이상의 장소는 본 이들 명소는 프런트와 다른 광학의 등을 여러 반사의 결과가있다는거다. homodyne 암에서 미러를 이동 끝과 반성이 함께 오는 어디있는 팁의 밝은 이미지와 두 번째 자리는 (바닥에서와 강도) 중복 있도록.

A1.4. 감지기 위치

GE 미러를 제거하고 HeNe 빔는 IR 탐지기가있는 방향으로 가야한다. 광 관 뒤쪽 두 ringlike 반점이 관찰됩니다. 두 번째 지점은 (강도)는 IR 탐지기의 얼굴에 열 보호 호일의 구멍을 통과해야 곳입니다. 최고의 강도와 장소는 구멍의 경계에서 볼 수 있습니다.

A1.5. 한 샘플에서 다른 변경

샘플을 변경 후 AFM 팁을는 이전과 동일한 위치에 더 이상 없지만, 너무 멀리해서는 안됩니다. 차이는 일반적으로 매우 큰되지 않았기 때문에 단계 A.1.2와 함께 시작합니다.

참고 : 정렬이 꺼져있다면, HeNe 빔 여전히 모든 붓꽃 통해 이뤄지과 AFM 팁에 밝은 빨간색 '스파클'을 만들어 있는지 확인합니다. 때때로 당신은 만져 때문에 원래 위치에서 미러를 이동한 것을 알 수 없습니다. 정렬 여전히 나쁜 경우, 불행히도 전체 정렬 절차를 다시 완료합니다.

조정 2 단계 : IR 빔의 정렬

이 같은 강도 / 전원 (최소 100 MW) 높은와 CO 레이저 라인을 사용 정렬이 쉽게됩니다. 액체 질소로 감지기를 작성하고 적어도 30 분 동안 평형을 보자.

2.1. 이 거울 조잡해 정렬

들어오는 IR 광선의 전원을 모니터링하는 최초의 홍채 뒤에 전원 측정기를 놓습니다. 다음 최고 전력 독서를 얻기 위해 tiltable 거울 앞에있는 거울을 조정합니다. 전원 측정기를 가지고 가까운 필드 단계로 가장 가까운이며 최대 전력 독서를 얻을 때까지 tiltable 미러를 조정 아이리스 뒤에 그것을 잡아. 이 단계에게 최적의 조정에 대한 몇 번 반복합니다.

2.2. 1 층 신호를보고

의 참조 잠금 기능 증폭기 AFM의 진동 주파수는 1 층 (내선)으로 설정하여 팁 진동 주파수의 주파수를 분리로 설정해야합니다. 3 μm의에 Nanoscope 소프트웨어의 힘 플롯 모드에서 스캔 크기를 설정합니다. 2.1.에서는 굵은 조정 후, 1 층 신호의 오른쪽 모양을 찾습니다. 다음, 압전 드라이버를 조정하여 팁 및 homodyne 암에서 homodyned 빛으로부터 수집한 흩어진 빛 사이의 단계를 조정. 이것은 1 층 신호의 첫 번째 최소 제로에서 시작해서 약 500 nm의되도록 압전의 전압을 변경하여 homodyne 암에서 미러를시킵니다. 정렬의 모든 변화는 두 빛의 경로 따라서 그들의 상대적인 단계의 길이를 변경할 수 있기 때문에, 단계는 압전과 함께 수정해야합니다.

당신은 (1 층 신호)는 무엇을 볼 것인가?
잘못된 정렬 : 3 μm의 Z 스캔 크기에 두 개의 충돌이 관찰됩니다.
중간 정렬 : 첫 번째 범프의 곡률은 볼록보다는 ​​조금 더 오목 모양과 두 번째 범프는 첫 번째보다 작습니다.
(거의) 잘 정렬 : 두 개의 충돌이 관찰됩니다. 첫 번째 아기는 두 번째 밤보다되며, 첫 번째 범프의 오른쪽에있는 굴곡은 (오목) 음수가 될 것입니다.
무엇이 정렬을 위해 할 수?
잘못된 정렬 : 필요에 따라 단계 2.1 정렬 절차를 반복합니다. IR 빔 직경이 큰이기 때문에, 빔의 대부분은 그것이 완벽하게 정렬되지 않은 경우에도 붓꽃 전달합니다. 이 충돌이 여전히 관찰하더라도, 1 층 신호의 금액은 조정 하나 또는 정렬 미러의 양쪽 증가 수 있습니다. 첫 번째 범프의 곡률에 약간의 변경보세요. 이 정렬의 가장 어려운 부분이기 때문에 모두의 대부분은, 인내심을 가져야한다.
중간 정렬 : 정렬 미러 중 하나 또는 둘 모두가 거의 좋은 정렬을 얻기 위해 조정하려고합니다. 뿐만 아니라 XYZ translational 무대를 이동하지만, 아주 작은 단위로하여 그것을 조정보십시오.
(거의) 잘 정렬 : 거울을 조정하고 첫 번째 범프의 최대를 증가하십시오. 1F 신호는 적은 낮은 입력 파워에 대한, 8-16 V 주위에 일반적으로있다. 첫 번째 최소 0으로 가까이 오는 있도록 압전 드라이버를 사용하여 전압을 변경하여 단계를 변경합니다. 상당한 층 신호가있는 경우의 참조 스위치 잠금 기능 증폭기 2F 신호를 분리합니다. 신호의 일부는 관찰 매우 약간 거울 튜닝 및 위상을 변경하여 조금 더 그것을 개선하기 위해 노력한다.

2.3. 한 샘플에서 다른 변경

HeNe 빔의 정렬에 따라 A.1.5 단계 실행합니다. AFM 팁을 참여하고 현미경을 통해 IR 광선을 전파. 1 층 신호를보세요. 1 층 신호가 계속 관찰하면, tiltable 미러를 조정하고 단계를 조정합니다. 신호 따라서 좋은 2 층 신호를 IF 좋은 여전히​​ 관찰 수 있습니다. 그렇지 않다면, 잘게 단계 2.2를 사용하여 광선을 맞춥니다.

대표 결과 :

샘플 준비는 # 21-31 펩타이드는 HPLC에 의해 피츠버그, 정화 (> 95%)의 대학에서 생물 공학 및 생물에 대한 센터에서 합성되었다. 아밀로이드 원섬유, TMAO (시그마 - 알드리치)의 0.8 MG를 합성하려면 1 ㎜의 솔루션을 양 의해 실행 절차와 비슷한 18 MΩ 물에 # 21-31 펩타이드에 추가되었습니다. XIV

Ultraflat 골드 기판 XV이되었다. 한 달 된 솔루션 (상온 보육, 산도 5.5) 40 μL는 신선한 ultraflat 골드 기판에 몇 분 동안 입금했습니다. 그들은 잠시 N 2 가스를 흐르는와 건조하고 ANSIM 악기의 위치, 18 MΩ 물의 흐름과 함께 씻어서되었습니다.

그림 11 # 21-31 펩타이드 원섬유에 대한 수집 지형과 가까운 현장 이미지를 보여줍니다. A) 지형 이미지는 해당 가까운 현장 이미지로 동시에 획득. 라벨 개별 원섬유을 나타내는 각 근모가 가진 차 형태의 유형을 기능을하는 데 사용됩니다. 1631 및 1천6백91cm -1 : B 및 C) 대응 니어 필드에 이미지는 두 가지 wavenumbers에서 수집했습니다. 각 이미지의 면적은 1 × 1 μm의 2입니다. 왼쪽 규모 높이를 나타내는 마우스 오른쪽 규모에서 흩어져 분야 잠금 기능 증폭기입니다.

그림 11
그림 11

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

우리는 기꺼이 NSF, NSERC, NIH, 그리고 ONR을 인정합니다.

References

  1. Mueller, K., Yang, X., Paulite, M., Fakhraai, Z., Gunari, N., Walker, G. C. Chemical imaging of the surface of self-assembled polystyrene-b-poly(methyl methacrylate) diblock copolymer films using apertureless near-field IR microscopy. Langmuir. 24, 6946-6951 (2008).
  2. Lahrech, A., Bachelot, R., Gleyzes, P., Boccara, A. C. Infrared-reflection-mode near-field microscopy using an apertureless probe with a resolution of lambda/600. Opt. Lett. 21, 1315-1317 (1996).
  3. Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. Performance of visible and mid-infrared scattering-type near-field optical microscopes. J. Microsc. 210, 311-314 (2003).
  4. Kim, Z. H., Leone, S. R. Polarization-selective mapping of near-field intensity and phase around gold nanoparticles using apertureless near-field microscopy. Optics Express. 16, 1733-1741 (2008).
  5. Bridger, P. M., McGill, T. C. Observation of nanometer-scale optical property discrimination by use of a near-field scanning apertureless microscope. Opt. Lett. 24, 1005-1007 (1999).
  6. Stebounova, L., Akhremitchev, B. B., Walker, G. C. Enhancement of the weak scattered signal in apertureless near-field scanning infrared microscopy. Rev. Sci. Instrum. 74, 3670-3674 (2003).
  7. Akhremitchev, B. B., Pollack, S., Walker, G. C. Apertureless Scanning Near-Field Infrared Microscopy of a Rough Polymeric Surface. Langmuir. 17, 2774-2781 (2001).
  8. Hecht, B., Bielefeldt, H., Inouye, Y., Pohl, D. W., Novotny, L. Facts and Artifacts in Scanning Near-Field Optical Microscopy. J. Appl. Phys. 81, 2492-2498 (1997).
  9. Labardi, M., Patane, S., Allegrini, M. Artifact-free near-field optical imaging by apertureless microscopy. Appl. Phys. Lett. 77, 621-623 (2000).
  10. Palanker, D. V., Simanovskii, D. M., Huie, P., Smith, T. I. On Contrast Parameters and Topographic Artifacts in Near-Field Infrared Microscopy. J. Appl. Phys. 88, 6808-6814 (2000).
  11. Akhremitchev, B. B., Sun, Y., Stebounova, L., Walker, G. C. Monolayer-Sensitive Infrared Imaging of DNA Stripes Using Apertureless Near-Field Microscopy.Langmuir. 18, 5325-5328 (2002).
  12. Brehm, M., Taubner, T., Hillenbrand, R., Keilmann, F. Infrared Spectroscopic Mapping of Single Nanoparticles and Viruses at Nanoscale Resolution. Nano Lett. 7, 1307-1310 (2006).
  13. Dazzi, A., Prazeres, R., Glotin, F., Ortega, J. M. Analysis of nano-chemical mapping performed by an AFM-based ("AFMIR") acousto-optic technique. Ultramicroscopy. 107, 1194-1200 (2007).
  14. Yang, D. S., Yip, C. M., Huang, T. H. J., Chakrabartty, A., Fraser, P. E. Manipulating the Amyloid-β Aggregation Pathway with Chemical Chaperones. J. Biol. Chem. 274, 32970-32974 (1999).
  15. Meadows, P. Y., Walker, G. C. Force Microscopy Studies of Fibronectin Adsorption and Subsequent Cellular Adhesion to Substrates with Well-Defined Surface Chemistries. Langmuir. 21, 4096-4107 (2005).

Tags

세포 생물학 제 33 nearfield 이미징 적외선 아밀로이드 근모 단백질
조립, 조정 및 단백질 이미징을위한 Apertureless 니어 필드 적외선 분광 현미경의 사용
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Paulite, M., Fakhraai, Z.,More

Paulite, M., Fakhraai, Z., Akhremitchev, B. B., Mueller, K., Walker, G. C. Assembly, Tuning and Use of an Apertureless Near Field Infrared Microscope for Protein Imaging. J. Vis. Exp. (33), e1581, doi:10.3791/1581 (2009).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video
Waiting X
Simple Hit Counter