In questo articolo vengono descritte le procedure di un test metastasi sperimentale che viene utilizzato per determinare il potenziale metastatico di linee cellulari tumorali umane.
Abstract
Metastasi è la principale causa di morte nei pazienti oncologici. Per capire il meccanismo di metastasi, un test sperimentale metastasi è stata stabilita utilizzando topi immunodeficienti. Questo articolo delinea le procedure coinvolte in questo test, compresa la preparazione del campione, l'iniezione endovenosa, coltura e le cellule di metastasi polmonari. In breve, un pre-determinato numero di cellule tumorali umane sono state preparate<em> In vitro</em> E iniettato direttamente nella circolazione di topi immunodeficienti attraverso le loro vene coda. Un piccolo numero di cellule di sopravvivere alle turbolenze nella circolazione e crescere come metastasi in organi interni, come quello al polmone. I topi iniettati vengono sezionati dopo un certo periodo. La distribuzione tissutale delle metastasi è determinato sotto un microscopio da dissezione. Il numero di metastasi in un tessuto specifico è contato e si correla direttamente con la capacità metastatica delle cellule tumorali iniettate. Le metastasi sono sorti isolate e coltivate<em> In vitro</em> Come linee cellulari, che spesso mostrano una maggiore capacità metastatica rispetto alla linea parentale quando iniettato nuovamente in topi immunodeficienti. Questi derivati altamente metastatico diventare strumenti utili per identificare geni o pathway molecolari che regolano la progressione metastatica.
Protocol
1. Preparazione del campione Crescere le cellule a confluenti ~ 70% nelle loro supporto specifico con fattori di crescita o FBS (ad esempio, con DMEM 10% FBS per MC-1 le cellule). Aspirare multimediali da piastra e lavare delicatamente più volte con 1 x PBS (8 g / L di NaCl, 0,2 g / L di KCl, 1,15 g / L di Na 2 HPO 4 0,7 H 2 O, 0,2 g / L di KH 2 PO 4, pH 7,3). Aspirare il PBS e aggiungere 2 ml di tripsina 0,05% a versene (0,014 g / L di rosso f…
Discussion
Metastasi è la principale causa di morte nei pazienti oncologici. Si tratta di quattro fasi principali: il distacco delle cellule tumorali dal loro loci primaria, la loro entrata in circolazione (intravasation), la loro uscita dalla circolazione (stravaso), e la sopravvivenza e la crescita in un organo lontano. Metastasi in umano è considerato un processo lento e spesso si manifesta dopo anni di latenza. Per studiare la sua progressione in modo tempestivo, quanto sopra relativamente rapido test sperimentale è stato s…
Acknowledgements
Questo protocollo è stato testato e ottimizzato inizialmente in laboratorio del Dr. Richard Hynes (MIT). Il finanziamento è fornito dalla PREMIO IDEA NYSTEM (a LX) e Ruth L. Kirschstein Premio Nazionale Research Service (a LX).