גרורה ניסויית Assay
Summary
מאמר זה מתאר את הנהלים של assay גרורות ניסיוני המשמש כדי לקבוע את פוטנציאל גרורתי של שורות תאים סרטניים אנושיים.
Abstract
גרורה היא הגורם המוביל למוות בקרב חולי סרטן. כדי להבין את המנגנון של גרורות, assay גרורות ניסיוני הוקם באמצעות עכברים immunodeficient. מאמר זה מתאר את ההליכים הכרוכים assay זה, כולל הכנת המדגם, הזרקה תוך ורידית, ותאי culturing של גרורות בריאות. בקצרה, מספר שנקבע מראש של תאים סרטניים אנושיים היו מוכנים<em> במבחנה</em> ו מוזרק ישירות לתוך מחזור הדם של עכברים immunodeficient בוורידים הזנב שלהם. מספר קטן של תאים לשרוד את הטלטלה במחזור ולגדול כמו גרורות באיברים פנימיים, כגון הריאות. הם הזריקו לעכברים גזור לאחר תקופה מסוימת. הפצה הרקמה של גרורות נקבע תחת מיקרוסקופ לנתח. מספר גרורות ברקמה מסוימת נחשבת וזה ישירות בקורלציה עם היכולת גרורתי של תאים סרטניים מוזרקים. גרורות שקמה מבודדות תרבותי<em> במבחנה</em> כמו שורות תאים, אשר לעיתים קרובות להראות יכולות משופרות גרורתי מ קו הורית כאשר הזריקו לעכברים immunodeficient שוב. אלה נגזרים גרורתי מאוד להיות כלי שימושי עבור זיהוי גנים או מסלולים מולקולריים המווסתים התקדמות גרורתית.
Protocol
Discussion
גרורה היא הגורם המוביל למוות בקרב חולי סרטן. היא כוללת ארבעה צעדים מרכזיים: ניתוק של תאים סרטניים מ לוקוסים העיקרי שלהם, כניסתם למחזור (intravasation), יציאתם מן המחזור (extravasation), הישרדות וצמיחה באיבר מרוחק. גרורות האדם נחשב תהליך איטי לידי ביטוי לעתים קרובות, לאחר שנים של חבי…
Acknowledgements
פרוטוקול זה נבדק אופטימיזציה תחילה במעבדה של ד"ר ריצ'רד היינס (MIT). המימון ניתן על ידי פרס NYSTEM IDEA (ל LX) ורות ל Kirschstein בפרס הלאומי לחקר שירות (כדי LX).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 10313-021 | ||
| FBS | Hyclone | SH30088.03 | ||
| HBSS | Invitrogen | 14175-095 | ||
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9888 | ||
| KCl | Mallinckrodt Chemicals | 6838-04 | ||
| Na2 HPO4.7H2O | Mallinckrodt Chemicals | 7896-04 | ||
| KH2PO4 | Mallinckrodt Chemicals | 7100-12 | ||
| Phenol red | Sigma-Aldrich | P3532 | ||
| EDTA-Na | EMD Biosciences | 4010 | ||
| Trypan Blue | Invitrogen | 15250-061 | ||
| Trypsin 2.5% | Invitrogen | 15090-046 | ||
| Ethanol | Ultrapure | 200-CSGP | ||
| 50 ml Falcon Tube | VWR | 89039-656 | ||
| Microcentrifuge Tubes | Axygen Scientific | MCT-175-C | ||
| Falcon 70µm Cell Strainer | BD Biosciences | 352350 | ||
| 5ml Falcon Culture Tube | VWR | 60818-576 | ||
| Hemacytometer | Hausser Scientific | 15170-208 | ||
| 1 ml syringe | BD Biosciences | 329650 | ||
| 30 ½ gauge needle | BD Biosciences | 305106 | ||
| Mouse restrainer | Plas Labs Inc. | 551-BSRR | ||
| Surgical scissors | Fisher Scientific | 08-940 | ||
| Forceps | Fisher Scientific | 08-902 | ||
| Dissecting Microscope | Nikon | SMZ1500 | ||
| Benchtop Centrifuge | Thermoscientific | 75003491 |
References
- Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
- Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis reveals an essential role for RhoC. Nature. 406 (6795), 532-532 (2000).
- Xu, L., Begum, S., Hearn, J. D., Hynes, R. O. GPR56, an atypical G protein-coupled receptor, binds tissue transglutaminase, TG2, and inhibits melanoma tumor growth and metastasis. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (24), 9023-9023 (2006).
- Kozlowski, J. M., Hart, I. R., Fidler, I. J., Hanna, N. A human melanoma line heterogeneous with respect to metastatic capacity in athymic nude mice. J Natl Cancer Inst. 72 (4), 913-913 (1984).
- Kang, Y. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer Cell. 3 (6), 537-537 (2003).
