Summary

גרורה ניסויית Assay

Published: August 24, 2010
doi:

Summary

מאמר זה מתאר את הנהלים של assay גרורות ניסיוני המשמש כדי לקבוע את פוטנציאל גרורתי של שורות תאים סרטניים אנושיים.

Abstract

גרורה היא הגורם המוביל למוות בקרב חולי סרטן. כדי להבין את המנגנון של גרורות, assay גרורות ניסיוני הוקם באמצעות עכברים immunodeficient. מאמר זה מתאר את ההליכים הכרוכים assay זה, כולל הכנת המדגם, הזרקה תוך ורידית, ותאי culturing של גרורות בריאות. בקצרה, מספר שנקבע מראש של תאים סרטניים אנושיים היו מוכנים<em> במבחנה</em> ו מוזרק ישירות לתוך מחזור הדם של עכברים immunodeficient בוורידים הזנב שלהם. מספר קטן של תאים לשרוד את הטלטלה במחזור ולגדול כמו גרורות באיברים פנימיים, כגון הריאות. הם הזריקו לעכברים גזור לאחר תקופה מסוימת. הפצה הרקמה של גרורות נקבע תחת מיקרוסקופ לנתח. מספר גרורות ברקמה מסוימת נחשבת וזה ישירות בקורלציה עם היכולת גרורתי של תאים סרטניים מוזרקים. גרורות שקמה מבודדות תרבותי<em> במבחנה</em> כמו שורות תאים, אשר לעיתים קרובות להראות יכולות משופרות גרורתי מ קו הורית כאשר הזריקו לעכברים immunodeficient שוב. אלה נגזרים גרורתי מאוד להיות כלי שימושי עבור זיהוי גנים או מסלולים מולקולריים המווסתים התקדמות גרורתית.

Protocol

1. לדוגמא הכנה לגדל תאים ומחוברות ~ 70% בתקשורת הספציפיים שלהם עם גורמי גדילה או FBS (למשל, DMEM עם FBS 10% MC-1 תאים). לשאוב התקשורת מהצלחת בעדינות לשטוף מספר פעמים עם 1 x PBS (8 g / L של NaCl, 0.2 גר '/ L של KCl, 1.15 גר' / L של Na 2 HPO 4 0…

Discussion

גרורה היא הגורם המוביל למוות בקרב חולי סרטן. היא כוללת ארבעה צעדים מרכזיים: ניתוק של תאים סרטניים מ לוקוסים העיקרי שלהם, כניסתם למחזור (intravasation), יציאתם מן המחזור (extravasation), הישרדות וצמיחה באיבר מרוחק. גרורות האדם נחשב תהליך איטי לידי ביטוי לעתים קרובות, לאחר שנים של חבי…

Acknowledgements

פרוטוקול זה נבדק אופטימיזציה תחילה במעבדה של ד"ר ריצ'רד היינס (MIT). המימון ניתן על ידי פרס NYSTEM IDEA (ל LX) ורות ל Kirschstein בפרס הלאומי לחקר שירות (כדי LX).

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
DMEM   Invitrogen 10313-021  
FBS   Hyclone SH30088.03  
HBSS   Invitrogen 14175-095  
NaCl   Sigma-Aldrich S9888  
KCl   Mallinckrodt Chemicals 6838-04  
Na2 HPO4.7H2O   Mallinckrodt Chemicals 7896-04  
KH2PO4   Mallinckrodt Chemicals 7100-12  
Phenol red   Sigma-Aldrich P3532  
EDTA-Na   EMD Biosciences 4010  
Trypan Blue   Invitrogen 15250-061  
Trypsin 2.5%   Invitrogen 15090-046  
Ethanol   Ultrapure 200-CSGP  
50 ml Falcon Tube   VWR 89039-656  
Microcentrifuge Tubes   Axygen Scientific MCT-175-C  
Falcon 70µm Cell Strainer   BD Biosciences 352350  
5ml Falcon Culture Tube   VWR 60818-576  
Hemacytometer   Hausser Scientific 15170-208  
1 ml syringe   BD Biosciences 329650  
30 ½ gauge needle   BD Biosciences 305106  
Mouse restrainer   Plas Labs Inc. 551-BSRR  
Surgical scissors   Fisher Scientific 08-940  
Forceps   Fisher Scientific 08-902  
Dissecting Microscope   Nikon SMZ1500  
Benchtop Centrifuge   Thermoscientific 75003491  

References

  1. Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
  2. Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis reveals an essential role for RhoC. Nature. 406 (6795), 532-532 (2000).
  3. Xu, L., Begum, S., Hearn, J. D., Hynes, R. O. GPR56, an atypical G protein-coupled receptor, binds tissue transglutaminase, TG2, and inhibits melanoma tumor growth and metastasis. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (24), 9023-9023 (2006).
  4. Kozlowski, J. M., Hart, I. R., Fidler, I. J., Hanna, N. A human melanoma line heterogeneous with respect to metastatic capacity in athymic nude mice. J Natl Cancer Inst. 72 (4), 913-913 (1984).
  5. Kang, Y. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer Cell. 3 (6), 537-537 (2003).

Play Video

Cite This Article
Mohanty, S., Xu, L. Experimental Metastasis Assay. J. Vis. Exp. (42), e1942, doi:10.3791/1942 (2010).

View Video