Experimentell Metastas analys

Summary

Den här artikeln beskriver förfaranden för en experimentell metastaser analysmetod som används för att bestämma metastaserande potential humana cancercell.

Abstract

Metastaser är den vanligaste dödsorsaken hos cancerpatienter. För att förstå mekanismen av metastaser, var en experimentell metastaser analys fastställts med nedsatt immunförsvar möss. Denna artikel skisserar de förfaranden som ingår i denna analys, inklusive provberedning, intravenös injektion och celler odling av lungmetastaser. Kortfattat var ett förutbestämt antal mänskliga cancerceller förberedda<em> In vitro</em> Och sprutas direkt in i cirkulationen av immundefekta möss genom sin svans ådror. Ett litet antal celler överlever turbulensen i omlopp och växa som metastaser i inre organ, exempelvis lunga. Den injicerade möss är dissekeras efter en viss tid. Vävnaden distribution av metastaser bestäms enligt en dissekera mikroskop. Antalet metastaser i en specifik vävnad räknas och det direkt korrelerar med metastaserande förmåga injicerade cancerceller. Den uppkomna metastaser är isolerade och odlade<em> In vitro</em> Som cellinjer, som ofta visar förbättrade metastaserande förmågor än föräldrarnas linje när det injiceras igen till nedsatt immunförsvar möss. Dessa mycket metastaserande derivat bli användbara verktyg för att identifiera gener eller molekylära vägar som reglerar metastaserande progression.

Protocol

1. Provberedning Grow celler till ~ 70% konfluenta i deras specifika media med tillväxtfaktorer eller FBS (t.ex. DMEM med 10% FBS för MC-1 celler). Aspirera media från plattan och försiktigt tvätta flera gånger med 1 x PBS (8 g / L NaCl, 0,2 g / L KCl, 1,15 g / L Na 2 HPO 4 0,7 H 2 O, 0,2 g / L KH 2 PO 4, pH 7,3). Aspirera PBS och tillsätt 2 mL 0,05% Trypsin i versene (0,014 g / L av fenol rött och 0,2 g / L EDTA-Na i 1 x PBS, pH 7,2). S…

Discussion

Metastaser är den vanligaste dödsorsaken hos cancerpatienter. Det handlar om fyra viktiga steg: avskiljandet av cancerceller från deras primära loci, sättas i omlopp (intravasation), deras utträde ur cirkulation (extravasation), och överlevnad och tillväxt i en avlägsen orgel. Metastaser i mänskliga anses vara en långsam process och ofta manifesteras efter år av latens. Att studera dess progression i tid, var det ovanstående relativt snabbt experimentell analys etablerat i immundefekta möss. ⁴ S…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM		Invitrogen	10313-021
FBS		Hyclone	SH30088.03
HBSS		Invitrogen	14175-095
NaCl		Sigma-Aldrich	S9888
KCl		Mallinckrodt Chemicals	6838-04
Na2 HPO4.7H2O		Mallinckrodt Chemicals	7896-04
KH2PO4		Mallinckrodt Chemicals	7100-12
Phenol red		Sigma-Aldrich	P3532
EDTA-Na		EMD Biosciences	4010
Trypan Blue		Invitrogen	15250-061
Trypsin 2.5%		Invitrogen	15090-046
Ethanol		Ultrapure	200-CSGP
50 ml Falcon Tube		VWR	89039-656
Microcentrifuge Tubes		Axygen Scientific	MCT-175-C
Falcon 70µm Cell Strainer		BD Biosciences	352350
5ml Falcon Culture Tube		VWR	60818-576
Hemacytometer		Hausser Scientific	15170-208
1 ml syringe		BD Biosciences	329650
30 ½ gauge needle		BD Biosciences	305106
Mouse restrainer		Plas Labs Inc.	551-BSRR
Surgical scissors		Fisher Scientific	08-940
Forceps		Fisher Scientific	08-902
Dissecting Microscope		Nikon	SMZ1500
Benchtop Centrifuge		Thermoscientific	75003491