Injection intramusculaire (GI) : Livraison composée dans le muscle dorsal d’un poisson zèbre adulte

Overview

Cette vidéo décrit la technique d’injection intramusculaire pour la livraison de composés dans les muscles dorsal d’un poisson zèbre adulte.

Protocol

1. Injection du vaccin contre l’ADN et électroporation

1. Pour les vaccinations selon ce protocole, utilisez du poisson zèbre adulte de 6 à 12 mois en bonne santé. Gardez le poisson dans un système d’écoulement avec un cycle lumière/obscurité de 14/10 h, avec un maximum de sept poissons par 1 L d’eau.
2. Préparer une solution éthyl ester (tricaine) de 0,02 % d’acide 3 aminobenzoïques (tricaine) dans l’eau du réservoir pour anesthésier le poisson. Utilisez une boîte de Pétri de 10 cm ou quelque chose de similaire.
3. Préparer un réservoir de récupération en remplissant un bécher de 5 L avec 3 L d’eau propre du système.
4. Préparer un rembourrage de vaccination pour maintenir le poisson dans une position fixe pendant la vaccination. Prenez un morceau de 5 x 7 cm² d’une éponge de 2 à 3 cm d’épaisseur. Couper une rainure dans l’éponge à l’aide d’une lame de scalpel ou de ciseaux pointus.
   REMARQUE: Le même rembourrage de vaccination peut être utilisé dans de multiples expériences. Désinfecter l’éponge entre les expériences en la trempant dans 70% d’alcool éthylique et laisser sécher.
5. Bien tremper l’éponge dans l’eau du système et mettre l’éponge sur une boîte de Pétri.
6. Jeûner le poisson 24 h avant les vaccinations.
7. Anesthésier un poisson zèbre en le plaçant sur une boîte de Pétri contenant 0,02% de tricaine. Attendez que le poisson ne réponde pas à la stimulation tactile et jusqu’à ce qu’il n’y ait pas de mouvement des branchies. Anesthésier un seul poisson à la fois.
8. À l’aide d’une cuillère en plastique, transférer le poisson zèbre anesthésié sur l’éponge humide et mettre le côté ventral du poisson vers le bas dans la rainure. Dans la bonne position, assurez-vous que la tête et la plupart du corps du poisson sont à l’intérieur de la rainure et la nageoire dorsale et la queue dépassent de la rainure.
9. Au microscope, placez soigneusement l’aiguille dans un angle d’environ 45° près du muscle dorsal du poisson zèbre, à l’aide des roues de réglage fin x et y-axe sur le micromanipulateur.
10. Trouvez la petite tache sans écailles devant la nageoire dorsale, où pousser l’aiguille ne demande pas de force. Si la résistance se fait sentir, essayez un endroit adjacent. Évitez de blesser la colonne vertébrale, la nageoire dorsale ou les écailles.
    REMARQUE: Si l’aiguille se plie en poussant, raccourcissez légèrement l’aiguille en la coupant.
11. Utilisez le commutateur de pied pour injecter graduellement la solution vaccinale dans le muscle. Observez l’injection au microscope : le rouge phénol est visible à mesure qu’il pénètre dans le tissu musculaire. Ajustez la durée de l’impulsion si nécessaire.
    REMARQUE: Alternativement, utilisez le bouton initiateur d’impulsion sur le panneau avant de la pompe pneumatique pour l’injection. Toutefois, l’utilisation d’un interrupteur à pied à distance permet d’utiliser l’autre main pour ajuster la longueur d’impulsion par la roue de cadran de 10 virages. Évitez d’injecter la solution trop rapidement, car cela peut causer des lésions tissulaires excessives. Assurez-vous de ne pas injecter d’air.
12. Électroporer le poisson immédiatement après l’injection. Assurez-vous que le poisson est toujours sous anesthésie. Gardez le poisson sur l’éponge et placez le poisson entre des électrodes de type pince à épiler, de sorte que les électrodes soient situées de chaque côté du site d’injection. N’appuyez pas trop fort sur les pinces à électrode, mais gardez les deux électrodes en contact avec le poisson.
    1. Appuyez sur le bouton de démarrage de l’électroporateur pour donner six impulsions de 40 V et 50 ms.
    2. Transférer délicatement le poisson dans le réservoir de récupération.
    3. Nettoyez les électrodes après chaque électroporation en les faisant glisser avec 70 % d’éthanol.
       REMARQUE: Surveillez attentivement le bien-être du poisson après la vaccination. Euthanasier tous les poissons présentant des signes d’inconfort (un lent rétablissement de l’anesthésie, natation aberrante, haletant) dans 0,04% tricaine. Après la récupération, transférez le poisson à l’unité d’écoulement et nourrissez-le normalement.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Phenol red sodium salt	Sigma-Aldrich	114537-5G
Tricaine (ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt)	Sigma	A5040-100g	anestesia and euthanasia solution
Tweezertrodes Electrodes (7 mm) Kits	BTX Harvard apparatus	BTX 450165	tweezer type electrodes
Aluminosilicate capillaries	Harvard apparatus	30-0108
Micromanipulator	Narishige	MA-153
Microscope	Olympus	ZS61
ECM Electro Square Porator	BTX Harvard apparatus	BTX ECM 830
Plastic spoon
Sponge
Styrofoam workbench