Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Transférer un poisson anesthésié tricaine sur une éponge humide avec le côté dorsal face vers le haut. Placez l’éponge portant le poisson au microscope. Placez une aiguille de micro-injection à un angle de 45 degrés de l’axe du corps près du muscle dorsal.
Ensuite, localisez l’endroit en face de la nageoire dorsale qui n’est pas couverte d’écailles où vous pouvez insérer l’aiguille sans appliquer une grande force. Puis insérez doucement l’aiguille et injectez lentement le composé d’intérêt avec un marqueur tel que le rouge phénol dans le muscle.
Si le composé d’intérêt contient du matériel génétique, électroporer les cellules en plaçant des électrodes de chaque côté du site d’injection et en administrant le courant. Le courant rend les cellules musculaires perméables et capables de prendre efficacement le matériel génétique. Après la procédure, transférez immédiatement le poisson dans un réservoir de récupération. Dans le protocole suivant, nous effectuerons une injection intramusculaire sur un poisson zèbre adulte pour administrer un vaccin contre la mycobactériose.
Pour garder le poisson dans une position fixe pendant l’injection, utilisez un morceau d’éponge avec une rainure coupée au milieu comme rembourrage. Tremper l’éponge à fond dans l’eau du système et la placer dans une boîte de Pétri. À l’aide d’une cuillère en plastique, transférer un poisson zèbre anesthésié à l’éponge humide avec le côté ventral du poisson vers le bas dans la rainure. Sous le microscope, placez l’aiguille à un angle de 45 degrés près du muscle dorsal du poisson zèbre. Puis trouvez la petite tache sans écailles devant la nageoire dorsale et poussez l’aiguille dans le muscle.
Si une résistance se fait sentir, essayez un endroit adjacent. Utilisez un interrupteur pour injecter graduellement la solution plasmide dans le muscle. Sous le microscope, le phénol rouge doit être visible à mesure qu’il pénètre dans le tissu musculaire.
Électroporer le poisson immédiatement après l’injection en plaçant les électrodes de type pince à épiler de chaque côté du site d’injection. Appuyez sur le bouton Démarrer sur l’électroporateur et donnez-lui six impulsions de type pince à épiler de 40 volts et 50 millisecondes. Puis transférez doucement le poisson dans un réservoir de récupération. Enfin, après avoir anesthésié le poisson selon le protocole de texte, utilisez une lumière UV pour voir l’expression EGFP près du site d’injection.
