तुलनात्मक Vivo में Gp96 Adjuvanticity मेंढक में अध्ययन Xenopus laevis</em
Summary
मेढक<em> Xenopus laevis</em> Gp96 रूप में गर्मी झटका प्रोटीन प्रतिजन विशेष CD8 टी सेल प्रतिक्रिया को बढ़ावा देने की क्षमता की खोज के लिए एक आकर्षक विकल्प गैर स्तनधारी मॉडल प्रदान करता है. हम तरीकों का अध्ययन करने के लिए वर्तमान<em> Vivo में</em> Gp96 द्वारा त्वचा और ट्यूमर प्रतिजनों के पार प्रस्तुति के सरलीकरण.
Abstract
हम उभयचर Xenopus में विकसित किया है एक अद्वितीय गैर स्तनधारी ऐसे gp96 के रूप में chaperoned प्रतिजनों के पार प्रस्तुति को सुविधाजनक बनाने के लिए और सहज और अनुकूली टी सेल प्रतिक्रिया प्रकाश में लाना. Xenopus त्वचा भ्रष्टाचार अस्वीकृति कुछ गर्मी झटका प्रोटीन (hsps) की क्षमता का अध्ययन मॉडल laevis gp96 की क्षमता शास्त्रीय MHC वर्ग (वर्ग आइए) आइए प्रतिबंधित टी सेल प्रतिक्रिया प्रकाश में लाना का अध्ययन करने के लिए एक उत्कृष्ट मंच प्रदान करता है. इसके अतिरिक्त, Xenopus मॉडल प्रणाली भी gp96 की क्षमता ट्यूमर है कि उनके वर्ग आइए अणुओं नीचे विनियमित जिससे प्रतिरक्षा निगरानी से बचने के खिलाफ प्रतिक्रियाओं उत्पन्न की खोज के लिए चूहों को एक आकर्षक विकल्प प्रदान करता है. हाल ही में, हम Xenopus प्रतिजन कोशिकाओं (APCs) के रूप में peritoneal leukocytes का उपयोग कर क्लोनों में एक दत्तक सेल हस्तांतरण परख विकसित किया है, और दिखाया कि gp96 प्रधानमंत्री CD8 मामूली उतक अनुरूपता त्वचा प्रतिजनों के खिलाफ के रूप में के रूप में अच्छी तरह से Xenopus thymic 15 ट्यूमर के खिलाफ vivo में कर सकते हैं टी सेल प्रतिक्रिया 0 / है कि कक्षा आइए अणुओं व्यक्त नहीं करता है. हम यहाँ peritoneal leukocytes निकालना स्पंदन, और दत्तक हस्तांतरण, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से त्वचा भ्रष्टाचार और ट्यूमर प्रत्यारोपण assays सहित इन assays के प्रदर्शन के लिए शामिल पद्धति का वर्णन. इसके अलावा हम भी और परिधीय रक्त प्रवाह cytometry और प्रसार assays जो effector त्वचा अस्वीकृति और विरोधी ट्यूमर प्रतिक्रियाओं में शामिल आबादी के आगे लक्षण वर्णन के लिए अनुमति देते हैं के लिए इस्तेमाल किया leukocytes की कटाई जुदाई का वर्णन कर रहे हैं.
Protocol
Discussion
उभयचर Xenopus एक अद्वितीय बहुमुखी गैर स्तनधारी मॉडल के अध्ययन के लिए प्रतिरक्षा है . जैव चिकित्सा और प्रतिरक्षाविज्ञानी अनुसंधान में इसका व्यापक उपयोग MHC परिभाषित एलजी-6 क्लोन और एलजी-15 के रूप में अच्छी ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
विशेषज्ञ पशु पालन टीना मार्टिन और डेविड अलब्राइट द्वारा प्रदान की कृतज्ञता की सराहना की है. इस शोध T32 – ऐ – 07,285 (हेमवती) अनुदान, एनआईएच R25 2GM064133 (टीसीएल), NIH से 1R03-HD061671-01, R24 – ऐ – ०,५९,८३०-06 द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Reagents needed: | ||||
| Amphibian Phosphate Buffered Saline (APBS): | ||||
| NaCl, 1.15 g/L | ||||
| Na2HPO4, 0.2 g/L | ||||
| KH2PO | ||||
| 10N NaOH | ||||
| Tricaine Methane Sulfonate (TMS, MS-222) | Crescent Research Chemicals | CAS#886-86-2 | ||
| Sodium bicarbonate | Fisher Scientific | S-233-500 | ||
| Histopaque-1077 | Sigma-Aldrich | 10771 | 100ml | |
| Heparin Sodium Salt | Sigma-Aldrich | H3149-50KU | ||
| Culture medium for Xenopus 15/0 tumors [see 3 for more details]: | ||||
| Iscove DMEM basal medium | Gibco-Invitrogen | 11965 | ||
| Insulin | ||||
| Non-essential amino acids | ||||
| Penicillin-streptomycin | ||||
| Kanamycin | ||||
| Primatone | Sheffield Products Division | |||
| β2-mercaptoethanol | ||||
| NaHCO3 | ||||
| 30% double distilled water | ||||
| 5% featal bovine serum | ||||
| 20% superantant from a Xenopus kidney cell line A6 | ||||
| 0.25% of normal Xenopus serum | ||||
| Materials and Equipment: | ||||
| 50 and 15 ml conical centrifuge tubes (sterile) | ||||
| 25 gauge 5/8 Precision Glide sterile needles | BD | |||
| 18 gauge 1½ Precision Glide sterile needles | BD | |||
| 1 ml Tuberculin Slip Tip Syringe sterile | BD | |||
| 10 ml Slip Tip Syringe sterile | BD | |||
| 1.5 ml MicroCentrifuge tubes (sterile) | ||||
| 60 X 15 mm Polystyrene Petri Dishes sterile | Falcon | |||
| Razor blades | ||||
| 25 X 75 mm X 1 mm Premium Microscope Slides | Fisher Scientific | |||
| 10 cm glass petri dishes | ||||
| 9″ Pasteur Pipetes Durex Borosilicate Glass Cotton Plugged Disposable | VWR | |||
| Tygon tubing | ||||
| Two # 5 Swiss Jeweler’s Forceps | Miltex Inc. | |||
| Micro Dissecting Spring Scissors McPherson-Vannas straight cutting edge 6 mm | Roboz | |||
| Helios calipers | ||||
| Dissecting microscope | ||||
| High intensity illuminator | ||||
| Hemacytometer | ||||
| Un-bunsen burner | ||||
| 37°C shaking incubator | ||||
| Centrifuge |
References
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