Cellule staminali neurali sono stati preparati da ippocampo di adulti non-letargo yearling scoiattoli artici (AGS). Queste cellule staminali neurali può essere espansa attraverso numerosi passaggi, differenziate e mantenuto come un neurone quasi 50:50 alla cultura gliali.
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Articolo metodologico
Crescita e la differenziazione degli adulti ippocampale suolo artico Cellule Staminali neurali Squirrel
In questo articolo
Sommario
Abstract
Scoiattoli artici (Urocitellus parryii, AGS) sono unici nella loro capacità di letargo con una temperatura interna del corpo vicino o sotto lo zero 1. Questi animali anche resistere al danno ischemico cerebrale in vivo 2,3 e deprivazione di ossigeno e glucosio in vitro 4,5. Queste qualità uniche fornito l'impulso di isolare i neuroni AGS di esaminare le caratteristiche intrinseche dei neuroni che potrebbe spiegare la capacità dei neuroni AGS a resistere lesioni e la morte cellulare causata da ischemia e temperature estremamente fredde. L'identificazione delle proteine o obiettivi gene che consentono le proprietà distintive di queste cellule potrebbero essere di aiuto nella scoperta di terapie efficaci per una serie di indicazioni ischemica e per lo studio della resistenza al freddo. Adulto ippocampo AGS contiene cellule staminali neurali che continuano a proliferare, consentendo una facile espansione di queste cellule staminali in coltura. Descriviamo qui i metodi con cui i ricercatori possono utilizzare queste cellule staminali e neuroni differenziati per qualsiasi numero di scopi. Da seguire con attenzione questi passaggi il neurali cellule staminali AGS può essere espansa attraverso due o più passaggi e poi differenziato a una cultura ad alto contenuto di TUJ1-positivi neuroni (~ 50%) senza utilizzare sostanze chimiche tossiche per minimizzare il numero di cellule in divisione. Ischemia induce neurogenesi 6 e neurogenesi che procede attraverso MEK / ERK e percorsi di sopravvivenza PI3K/AKT segnalazione contribuisce alla resistenza ischemia in vivo in vitro 7 e 8 (Kelleher-Anderson, Drew et al., In preparazione). Un'ulteriore caratterizzazione di queste cellule neurali unica possibile anticipo su molti fronti, utilizzando alcuni o tutti questi metodi.
Protocollo
1. AGS Neural Stem Cell e Media Preparazione
- Adulti dell'ippocampo scoiattolo di terra Artico (AGS), le cellule staminali neurali isolate in un modo descritto in precedenza 9 possono ora essere ottenuti commercialmente come fiale crioconservati. Le cellule sono pillole in confezioni isolati contenenti ghiaccio secco per assicurare che le cellule rimangono in uno stato crioconservati. Per mantenere l'integrità, decomprimere le cellule immediatamente dopo la ricezione e conservare a inferiore a -150 ° C, o in fase vapore di un Dewar di azoto liquido.
- Preparare agsNSC medio basale + 5% FBS FBS aggiungendo 5 ml (LS-1012) a 95 ml di mezzo a....
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Discussione
AGS cellule staminali adulte neurali sono robusti e può essere ampliato per numerosi passaggi che li rende una fonte eccellente di cellule staminali neurali per lo studio delle proprietà delle cellule staminali neurali di base. Il tasso di espansione è di circa un raddoppio ogni 24 ore, ma queste cellule devono essere diversi passaggi prima di confluenza raggiungere perché il contatto tra le cellule favorirà la differenziazione di astrociti. Contatto mediato differenziazione quindi causa il rapporto tra i neuroni al num.......
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Dichiarazioni
JA Kelleher-Andersson è il fondatore di Neuronascent ed è l'inventore delle applicazioni scoiattolo di terra di brevetto Artico. Neuronascent riceve royalties sulla vendita di AGS media e cellule staminali. RC McGee è un dipendente Lifeline, Inc. che distribuisce le cellule staminali neurali media e AGS.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalla US Army Medical Research e Materiel Command concedere # 05178001 e NS041069-06 presso l'Istituto nazionale dei disordini neurologici e colpo. Ringraziamo Joel Vonnahme per gli utili commenti sul protocollo.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| agsNSC | Lifeline Cell Technology | FC-0004 | |
| Kit di espansione agsNSC | Lifeline Cell Technology | LL-0008 | Fonte alternativa per DMEM/F12, B27 e rhFGFb (www.invitrogen.com) |
| Kit di differenziazione agsNSC | Lifeline Cell Technology | LL-0009 | Fonte alternativa per DMEM/F12 e ITS-x (www.invitrogen.com) |
| Kit di mezzi di mantenimento NeuraLife | Lifeline Cell Technology | LL-0012 | Fonti alternative sono NeuraBasal (LifeLine) o Neurobasal (in vitrogen), glutammina e B27 (www.invitrogen.com) Le cellule differenziate vengono mantenute fino a 3 settimane in NeuroLife, ma non più di 2 settimane in Neurobasal (www.invitrogen.com) |
| Micrometro (ad esempio una camera di conteggio Bright Line) | Hausser Scientific | 1490 | http://www.hausserscientific.com/hausserbrightlinedirect.htm |
| Piastre da 96 pozzetti rivestite con poli-L-lisina Biocoat | BD Biosciences | 356516 | www.bdbiosciences.com |
| Punte di pipetta con orifizio largo | Fisher Scientific | 02-707-141 | Evita danni alle cellule neuronali durante la pipettaggio. http://www.fishersci.com |
Riferimenti
- Barnes, B. M. Freeze avoidance in a mammal: body temperatures below 0 degree C in an Arctic hibernator. Science. 244, 1593-1595 (1989).
- Dave, K. R., Prado, R., Raval, A. P., Drew, K. L., Perez-Pinzon, M. A. The Arctic ground squirrel brain is res....
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Ristampe e permessi
