Summary
(1) पूरे खंड के आभासी स्लाइस पर कब्जा, (2) बड़े पैमाने पर डेटा के मास विश्लेषण, (3) 2 डी आभासी स्लाइस के पुनर्निर्माण: उपन्यास बड़े पैमाने पर और immunohistochemically दाग अग्नाशय के नमूनों की खरीद विश्लेषण के कंप्यूटर की सहायता तरीकों में वर्णित हैं 3D आइलेट मानचित्रण (4), और (5) गणितीय विश्लेषण.
Protocol
1. Immunohistochemically सना हुआ छवियाँ के आभासी स्लाइस बनाना
- ओपन StereoInvestigator. साफ नमूना खुर्दबीन धारक में पकड़े स्लाइड प्लेस और स्टीरियो अन्वेषक में यह "अधिग्रहण" पर क्लिक करके और फिर "लाइव छवि" (अधिग्रहण → लाइव छवि) द्वारा कल्पना. प्रत्येक चैनल के लिए जोखिम का स्तर निर्धारित है, हमारे विशिष्ट उदाहरण में, 2 चैनल DAPI, चैनल GFP, आरएफपी, 5 चैनल के लिए चैनल 4 के लिए 3 Cy5 के लिए, और 6 चैनल के लिए Cy7 के लिए प्रयोग किया जाता है. "वीडियो हिस्टोग्राम" खिड़की है, जो प्रतिदीप्ति की तीव्रता प्रदर्शित करता है, के लिए जोखिम के स्तर का निर्धारण का उपयोग करें. उपयुक्त प्रतिदीप्ति तीव्रता तक पहुँच रहे हैं जब वीडियो हिस्टोग्राम का सही अंत में तीव्रता से पूंछ. एक्सपोजर स्तर "कैमरा सेटिंग्स" विंडो में बदला जा सकता है है. वीडियो हिस्टोग्राम खुर्दबीन ध्यान केंद्रित पहिया के साथ ध्यान केंद्रित किया जा सकता है है.
- एक आभासी स्लाइस बनाने से पहले, स्क्रीन पर नमूना से दूर एक बिंदु है, जो एक संदर्भ बिंदु के निशान पर क्लिक करके, और तब नमूना की रूपरेखा के आसपास क्लिक करके नमूना समोच्च. जब समोच्च पूरा हो गया है, ठीक क्लिक करें और "बंद कंटूर" का चयन करने के लिए शुरुआत और अंत अंक कनेक्ट.
- एक बार समोच्च बंद कर दिया है, नमूने के लिए एक आभासी स्लाइस (अधिग्रहण → आभासी स्लाइस मोल) पर कब्जा. जब आभासी स्लाइस खिड़की खुली विकल्पों का चयन करें, "हाई स्पीड मोल" के रूप में के रूप में अच्छी तरह से करने के लिए अगले बॉक्स अनचेक करके स्वत: ध्यान केंद्रित "मैनुअल." फ़ाइल सहेजें.
- आभासी टुकड़ा prefocus का चयन करके कैलिब्रेटेड होना चाहिए (सही → साइट सूची फोकस करने के लिए जोड़ें क्लिक करें) और मैन्युअल कई यादृच्छिक वर्गों ध्यान केंद्रित, यानी, साइटों आभासी स्लाइस पूर्वावलोकन में. जब कई साइटों पर ध्यान केंद्रित किया गया है, आभासी स्लाइस शुरू (ठीक क्लिक करें → Prefocus साथ आभासी स्लाइस प्रारंभ). पहला नमूना के लिए आभासी स्लाइस के बाद पूरा हो गया है, अगले चैनल में स्विच और जोखिम तदनुसार समायोजित. प्रत्येक चैनल के लिए कदम 4 और 5 दोहराएँ.
2. कम्प्यूटर की सहायता की दो - आयामी विश्लेषण
Islets की मात्रा का ठहराव
- छवियों तो एक ImageJ मैक्रो नाम "IHCVS," जो पहले विश्लेषण के लिए भरी हुई छवियों को तैयार और फिर quantifies सेलुलर संरचना जैसे islets की विशेषताएं (यानी बीटा, अल्फा, और डेल्टा सेल आबादी के प्रत्येक क्षेत्र का उपयोग कर संसाधित कर रहे हैं, और आइलेट योग मूल्य पर क्षेत्र). ढेर ImageJ में अपनी अलग चैनल में विभाजित है, जहां प्रत्येक व्यक्ति चैनल immunohistochemical धुंधला के आधार पर एक अलग छवि दिखाता है. प्रत्येक छवि तो स्वतः thresholded है, जिसके बाद एक 8 - बिट काले और सफेद छवि, या thresholded छवि के एक मुखौटा, का उत्पादन किया है. अलग चैनल छवियों को फिर एक साथ arithmetically एक समग्र मुखौटा में जोड़ा और समग्र छवि पर ImageJ कण में बनाया विश्लेषण किया जाता है.
- ROIs तब जबकि एक ही बीटा सेल की तुलना में छोटे कणों को छोड़कर पहचान कर रहे हैं (<170 2 सुक्ष्ममापी, हारा एट अल, 2003; क्षेत्र ~ 15 सुक्ष्ममापी की एक व्यास का उपयोग कर की गणना). परिणामी ROIs का विश्लेषण कर रहे हैं और ImageJ का उपयोग मात्रा निर्धारित मात्रा का ठहराव, परिधि (एक एक क्षेत्र के आसपास दूरी), घेरा (गोलाई का एक डिग्री है जहां 1.0 संख्या एक संपूर्ण चक्र को दर्शाया गया है), Feret व्यास (एक क्षेत्र के भीतर लंबे समय तक दूरी) और केंद्र शामिल कर सकते हैं विश्लेषण प्रत्येक क्षेत्र के लिए निर्देशांक इतना है कि आइलेट वितरण किया जा गणितीय इन मानकों के विभिन्न संयोजनों का उपयोग विश्लेषण कर सकते हैं और एक 3 डी ग्राफ में प्लॉट किए जाते हैं, डेटा जो गणितीय मॉडलिंग के लिए इस्तेमाल किया जाएगा. 30 सेकंड में एक एकल आभासी टुकड़ा छवि विश्लेषण किया है. एकाधिक छवियों को एक पाश ImageJ मैक्रो भाषा के द्वारा समर्थित वाक्यविन्यास में इमेज प्रोसेसिंग और विश्लेषण स्क्रिप्ट embedding द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है. पाश एक भी निर्देशिका में सभी फ़ाइलों को खोलता है, छवियों का विश्लेषण करती है, और outputs के एक Excel फ़ाइल के रूप में एक नया स्थान में परिणाम.
- एकत्रित परिणाम एक एक्सेल स्प्रेडशीट में सहेजे जाते हैं, इसी छवि में लेबल संख्या के साथ क्षेत्र, परिधि, घेरा, Feret व्यास, और प्रत्येक आइलेट के लिए आइलेट केंद्र के रूप में इस तरह के डेटा, भंडारण.
कम्प्यूटेशनल विश्लेषण और हिस्टोग्राम सेटअप
- मेथेमेटिका स्क्रिप्ट है, जो स्वचालित रूप से प्रारंभ बार चलाने के लिए स्प्रेडशीट एकत्र आंकड़ों की प्रक्रिया, प्रविष्टियों की हजारों की सैकड़ों के लिए राशि के लिए किया जाता है. एक महत्वपूर्ण प्रक्रियाओं है कि चला रहे हैं की एक आवृत्ति विश्लेषण है, जो एक आकार के वितरण की जांच करने के लिए और भी डेटा में outliers निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया हिस्टोग्राम constructs है. स्क्रिप्ट के तहत, कुल आइलेट क्षेत्र को मापा और अन्य मानकों की तुलना, समय अंक या अग्न्याशय के उम्र के लिए विशेष रूप से, और फिर उसके अनुसार एक ग्राफ में प्रदर्शित.
3. दो आयामी Immunohistochemically सना हुआ आभासी स्लाइस छवियाँ के तीन आयामी पुनर्निर्माण
आभासी स्लाइस के 3D पुनर्निर्माण
- निर्देशिका है कि (यानी, फ़ोल्डर) में स्क्रिप्ट im_jp2_2_tiff ("") की प्रतिलिपि बनाएँjp2 छवियाँ शामिल हैं. कंसोल में "./im_jp2_2_tiff" टाइपिंग और फिर दबाने में प्रवेश लिनक्स खोल के साथ स्क्रिप्ट चलाएँ. इस स्क्रिप्ट रनिंग स्वचालित रूप से झगड़ा फ़ाइलें, जो आभासी स्लाइस से तीन आयामी ढेर के निर्माण और मात्रा का ठहराव में इस्तेमाल किया प्रारूप है में निर्देशिका में jp2 छवियों के सभी बदल जाएगा. (नोट: प्रकार में "chmod + x im_jp2_2_tiff" यदि स्क्रिप्ट नहीं चला है, जो एक स्क्रिप्ट में पाठ फ़ाइल में परिवर्तित इतना है कि यह ठीक से चला सकते हैं)
- जब कब्जा कर लिया छवियों के सभी jp2 से झगड़ा फ़ाइलों को बदल दिया गया है, वे ImageJ में विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जा करने के लिए तैयार हैं.
- ImageJ के साथ पहला नमूना है (इस मामले में पांच छवियों: DAPI, GFP, आरएफपी, Cy5, Cy7) के लिए छवियों के सभी खुले और उन्हें एक छवि (छवि → रंग → मर्ज चैनल) के रूप में विलय. नमूने के प्रत्येक के लिए इस प्रक्रिया को दोहराएँ. जब नमूने के सभी एकल छवियों के रूप में संयुक्त है, "बहुभुज चयन" उपकरण के साथ अवांछित क्षेत्रों का चयन और उन में भरने (संपादन → भरें) द्वारा छवियों साफ. (एक छोटे आकार के लिए छवियों का आकार बदलना, यदि आवश्यक हो तो). फिर कोई RGB रंग छवि (छवि → प्रकार → RGB रंग) में प्रत्येक छवि परिवर्तित. अंत में, एक ढेर बनाने के बाहर (छवि के ढेर → → ढेर छवि) छवियों की, जिसके बाद वे आगे "ढेर रेग" प्लगइन के साथ गठबंधन किया जा सकता है, यदि आवश्यक है. अंत में, पूरे अग्न्याशय में islets के सभी चैनलों विलय और तब छवियों के संयोजन एक 3D संग्रथित चित्र बनाता है. छवि को देखने के लिए, "प्लगइन्स" पर क्लिक करें और फिर "3D व्यूअर."
4. आइलेट मानचित्रण
छवि ढेर एकत्रित
- माइक्रोस्कोप के अंतर्गत पूरे माउंट अग्नाशय islets बैठाना.
- Slidebook सॉफ्टवेयर खोलें. "पर कब्जा है और नियंत्रण फोकस" Ctrl + Shift + E दबाकर पहुंच "फोकस नियंत्रण" विंडो में, 20X या 40x, आइलेट के आकार के आधार पर करने के लिए उद्देश्य सेट. पानी लागू एक पानी विसर्जन के उद्देश्य लेंस का उपयोग कर यदि.
- आदेश में खुर्दबीन ऐपिस islets पता लगाने, "बिन" 2X और "फोकस नियंत्रण विंडो में User1 करने के लिए फ़िल्टर सेट सेट सेट का उपयोग करने के लिए. "उत्सर्जन चयन" 100% आंखें और 1 के लिए तटस्थ घनत्व के लिए सेट किया जाना चाहिए. "GFP ey" और फिर क्लिक करें "ओपन Fluor."
- Slidebook में नमूना कल्पना करने के लिए, फोकस लौटने खिड़की नियंत्रण और स्विच फ़िल्टर सेट "" जियो "और क्लिक करें" GFP डी एस. " केंद्र कैमरा 1 विंडो में आइलेट के रूप में अच्छी तरह के रूप में संभव करने के लिए जोस्टिक का प्रयोग करें. आइलेट, जहां कोशिकाओं को आसानी से discerned किया जा सकता है के केन्द्र के निकट कहीं गहराई पर ध्यान दें.
- "फोकस नियंत्रण विंडो में," "Z टैब क्लिक करें." चुनें. के लिए एक संदर्भ बिंदु के रूप में वर्तमान गहराई सेट विंडो के ऊपरी बाएँ कोने में सेट करें क्लिक करें. गुंजाइश नियंत्रण का प्रयोग करें आइलेट सुविधाओं जिसमें स्पष्ट रूप से discerned किया जा सकता है के ऊपरवाला गहराई तक स्क्रॉल करें और क्लिक करें "सेट टॉप." आइलेट के नीचे स्क्रॉल करें और क्लिक करें "सेट नीचे." संदर्भ बिंदु पर लौटने के लिए "जाओ" पर क्लिक करें.
- खिड़की पर कब्जा, "बिन फैक्टर 'के सेट के लिए" 2X "और" फ़िल्टर सेट "करने के लिए सेट" जियो. " "3D" (और केवल 3D) के लिए "कैद प्रकार" सेट. विंडो के दाईं तरफ क्लिक करें, "ऊपर और नीचे के पदों का उपयोग करें." पर क्लिक करें "कैद के बाद प्वाइंट संदर्भ लौटें." "चरण साइज" सेट "3."
- नीचे का चयन करें DAPI DSU, GFP DSU, आरएफपी DSU, और Cy5 DSU "फ़िल्टर सेट बॉक्स". हर एक के लिए क्लिक करें, "" एक्सपोजर समायोजित, "तो" टेस्ट "सुनिश्चित करें कि चयनित जोखिम उपयुक्त है बनाना क्लिक करें के तहत सबसे अच्छा लगता है". पर क्लिक करें "प्रारंभ" पर कब्जा करने के लिए शुरू.
- जब कब्जा पूरा हो गया है, आवश्यक के रूप में स्तर को समायोजित और सफेद करने के लिए आरएफपी के लिए प्रदर्शित रंग बदलने. स्लाइड सहेजें और जाने निर्यात → → झगड़ा श्रृंखला देखें. अंत में एक पानी का छींटा के साथ स्लाइड का नाम टाइप करें और इसे सहेजें. व्यक्तिगत झगड़ा फ़ाइलों के दर्जनों पैदा कर रहे हैं, तो यह मददगार हो सकता है के लिए एक अलग फ़ोल्डर में प्रत्येक आइलेट छवि ढेर रख सकते हैं.
छवि के ढेर का मानचित्रण
- स्टीरियो अन्वेषक खोलें. छवि ढेर (ओपन फ़ाइल → छवि ढेर → छवि ढेर) खोलने के द्वारा छवि कल्पना. "छवि स्केलिंग मेनू," 3.00 सुक्ष्ममापी "छवियों के बीच दूरी" पर सेट. Slidebook में 2X binning के लिए सही करने के लिए, "ओवरराइड एक्स और वाई स्केलिंग" और स्केलिंग "एक्स और वाई के स्रोत के लिए निर्दिष्ट उपयोगकर्ता" का चयन करें, और दोनों एक्स और वाई के लिए 0.65 दर्ज करें
- केंद्र में ब्याज की आइलेट के बीच में क्लिक करके छवि "मैक्रो खिड़की." मार्क उपयुक्त मार्कर का उपयोग करके कम से कम एक सेल. बीटा कोशिकाओं हरी दिखाई देगा, अल्फा कोशिकाओं लाल दिखाई देते हैं, और डेल्टा कोशिकाओं सफेद दिखाई देगा, उपयोग 2 मार्कर (एक खोखले चक्र) बीटा कोशिकाओं, 5 मार्कर (एक खोखले त्रिकोण) को चिह्नित करने के लिए अल्फा कोशिकाओं को चिह्नित है, और 6 मार्कर ( डेल्टा कोशिकाओं को खोखला) त्रिकोण. कक्ष उनके नाभिक, जो नीला दिखाई अगर नमूना DAPI के साथ किया गया दाग है के केंद्र में चिह्नित किया जाना चाहिए.
- एक बार कम से कम एक कक्ष के रूप में चिह्नित किया गया है, "विषयेतर देखें" शीर्ष मेनू में चिह्न का उपयोग प्रदर्शित है. "Z-फ़िल्टर" और जाँच करें "सममित" रेंज एसhould 15.00 के लिए सेट किया जाना है. 0.0 जेड स्तर पर शुरू, माउस पहिया का उपयोग आइलेट के माध्यम से स्क्रॉल करें और उपयुक्त मार्कर के साथ प्रत्येक कक्ष के निशान. प्रत्येक कोशिका इसकी गहराई के केंद्र में केवल एक बार चिह्नित किया जाना चाहिए. जेड स्तर के प्रत्येक, "जेड फिल्टर" चेकबॉक्स अनियंत्रित किया जा सकता है अंकन परिष्करण पर. यह जेड स्तर की सब से मार्करों के सभी दिखाएगा.
- जब हर कोशिका के रूप में चिह्नित किया गया है, एक "DAT फ़ाइल के रूप में फ़ाइल को सहेजते हैं, तो → निर्यात अनुरेखण फ़ाइल जाओ. एक "TXT" फ़ाइल के रूप में अनुरेखण सहेजें. "नई डेटा फ़ाइल" क्लिक करने के नए islets नक्शा प्रयास करने से पहले कार्यक्षेत्र स्पष्ट है.
5. प्रतिनिधि परिणाम:
आभासी स्लाइस के बाहर एक immunohistochemically दाग अग्न्याशय नमूना की तैयारी करने के लिए सक्षम बनाता है endocrine कोशिकाओं के सभी जांच (अल्फा, बीटा, डेल्टा और कोशिकाओं) पूरे अग्न्याशय में, islets (चित्रा 1 ए) के रूप में दोनों एक साथ और अलग - अलग चैनलों में व्यक्तिगत ( 1B चित्रा). कंप्यूटर कार्यक्रमों और लिपियों की सहायता के साथ, इन आभासी स्लाइस पर बड़े पैमाने पर डेटा के एक बड़े पैमाने पर विश्लेषण किया जा सकता है. विशेष रूप से, समग्र मास्क (चित्रा 1C) के एक कण विश्लेषण एक आँकड़े तालिका युक्त आइलेट क्षेत्र, परिधि (एक दूरी आसपास के क्षेत्र), घेरा (गोलाई का एक डिग्री है, जहां 1.0 एक संपूर्ण चक्र का प्रतिनिधित्व करता है) के रूप में इस तरह के मापदंडों के रूप में उत्पादन में है, और प्रत्येक आइलेट लिए Feret व्यास (एक क्षेत्र के भीतर लंबे समय तक दूरी) का पता चला (चित्रा 1D). कुल आइलेट संख्या और आकार के वितरण histograms के रूप में के रूप में अच्छी तरह से अल्फा, बीटा, और डेल्टा सेल क्षेत्रों की एक विस्तृत तुलना के उत्पादन में इन छवियों के परिणामों की बड़े पैमाने पर विश्लेषण. इसके अलावा, प्रत्येक आभासी स्लाइस लगभग 5 सुक्ष्ममापी की गहराई में ले लिया है, और व्यक्तिगत 2D आभासी स्लाइस की सभी को आगे के लिए पूरे अग्नाशय के नमूने के एक 3D पुनर्निर्माण बनाने के लिए खड़ी दिखती हैं. आइलेट मानचित्रण न केवल 3 डी में islets पर कब्जा करने का एक और उदाहरण को दर्शाता है, लेकिन यह भी विस्तृत विश्लेषण कंप्यूटर की सहायता की. आइलेट मानचित्रण अलग islets के कब्जा (2A चित्रा) और का अंकन बाद के होते हैं, अल्फा, बीटा, और डेल्टा कोशिकाओं विभिन्न Z - विमानों (चित्रा 2B) में 3 डी (चित्रा -2 सी, डी) में एक छोटा सा टाप कल्पना. मैप किए गए islets की स्वचालित गणितीय विश्लेषण उनके सेलुलर संरचना और वास्तुकला सेल सेल (चित्रा 2 ई) दूरी और सेल सेल दूरी वितरण (चित्रा 2 एफ) की संचयी संभावनाओं सहित, प्रदर्शित करता है.
चित्रा 1 बड़े पैमाने पर और आइलेट आभासी स्लाइस का उपयोग कर वितरण के कब्जा विश्लेषण. ए वर्चुअल टुकड़ा एक मानव अग्नाशय के अनुभाग के दृश्य. ए इंसुलिन के लिए धुंधला immunohistochemical (हरा), ग्लूकागन (लाल), (सफेद) सोमेटोस्टेटिन और DAPI (नीला). ज. स्वत: thresholding बाद 8 बिट मुखौटा परिवर्तित. एक बॉक्स्ड क्षेत्र में प्रत्येक चैनल के बी.बी. दृश्य में बढ़ाया है. ए डेल्टा कोशिकाओं, ज. बीटा कोशिकाओं, सी. अल्फा कोशिकाओं, और मृ समग्र छवि विलय. सी. कण विश्लेषण समग्र मुखौटा पर प्रदर्शन किया. ध्यान दें कि प्रत्येक आइलेट छोटे सेल समूहों सहित संरचना (नीले पर प्रकाश डाला) गिने है. विभिन्न व्यक्तिगत संरचनाओं के लिए मापा मापदंडों के डी. सांख्यिकी तालिका, जो आईडी है कि सी में दिखाया गया टैग के अनुरूप है
चित्रा 2 immunohistochemical आभासी स्लाइस का विश्लेषण. चित्रा 1 ए 3D तितर बितर साजिश क्षेत्र, घेरा और feret व्यास जैसे मानकों द्वारा प्रत्येक आइलेट के आकार और आकार वितरण दिखा. चित्रा 1 बी 3D तितर बितर साजिश सेलुलर आइलेट संरचना और आकार दिखा. चित्रा 1 से सी. आइलेट पूरी मानव अनुभाग विश्लेषण के आकार के वितरण एक lognormal प्रायिकता घनत्व वितरण के लिए फिट है. डी. सेलुलर संरचना अनुपात के गणितीय विश्लेषण (बीटा कोशिकाओं हरे, लाल और नीले रंग में डेल्टा कोशिकाओं में अल्फा कोशिकाओं) प्रत्येक आइलेट चित्रा 1 के प्रभावी व्यास बिन के लिए. ई. ए आइलेट यादृच्छिक नमूने immunohistochemical विश्लेषण के आकार के वितरण (बाएं). आइलेट आभासी टुकड़ा विश्लेषण के आकार के वितरण (दाएं). ज. प्रवेश करें - सामान्य यादृच्छिक नमूने immunohistochemical (लाल) विश्लेषण और आभासी टुकड़ा (नीला) की साजिश की तुलना.
चित्रा 3. आइलेट मानचित्रण और सेलुलर संरचना और वास्तुकला का गणितीय विश्लेषण. एक: एक मानव स्टीरियो - अन्वेषक में अपलोड किया आइलेट की छवियों का एक 3D खंगाला ढेर (लाल रंग में हरे, अल्फा कोशिकाओं में बीटा कोशिकाओं, सफेद में डेल्टा कोशिकाओं, और नीले रंग में नाभिक) से एक एकल नाभीय विमान दिखा स्क्रीन पर कब्जा . बी: प्रतिदीप्ति (बाएं) छवियों और तीन अलग अलग फोकल विमानों में इसी मैप किए गए डेटा (दाएं) 10 सुक्ष्ममापी के एक अंतराल पर दिखाया. सी 3D खंगाला आइलेट मानचित्रण डेटा के प्रतिनिधि दृश्य:. : डी तिमाही - कटा हुआ आइलेट मानचित्रण द्वारा प्राप्त निर्देशांक पर आधारित आइलेट के 3D पुनर्निर्माण. ई: सेलुलर संरचना और वास्तुकला का गणितीय विश्लेषण. एलईएफ़टी. एक एकल कोशिका आबादी में दो कोशिकाओं के बीच दूरी सेल सेल के सापेक्ष आवृत्ति. सही है. दो अलग अलग सेल आबादी के बीच सेल सेल दूरी के रिश्तेदार आवृत्ति. एफ: Kolmogorov Smirnov परीक्षण (एस). वाम. की संचयी संभावनाओं सेल सेल करने के लिए दूरी वितरण अल्फा - अल्फा के लिए, बीटा बीटा और डेल्टा - डेल्टा कोशिकाओं. सही है. इसी तीन संचयी संभावनाओं के लिए दूरी के एस.
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Discussion
कंप्यूटर की मदद से बड़े पैमाने पर दृश्य और मात्रा का ठहराव यहाँ प्रस्तुत अग्नाशय आइलेट अध्ययन में चार महत्वपूर्ण बिंदुओं को वहन: (1) अग्नाशय के नमूनों की बड़े पैमाने पर विश्लेषण समग्र आइलेट आकार के वितरण और आइलेट वास्तुकला का एक व्यापक दृष्टि प्रदान करता है. (2) 3 डी और सेलुलर संरचना और वास्तुकला का गणितीय विश्लेषण पुनर्निर्माण आगे एक छोटा सा टाप के भीतर endocrine कोशिकाओं के स्थानिक व्यवस्था की परीक्षा की सुविधा. (3) विभिन्न प्रजातियों के बीच और विभिन्न pathophysiological शर्तों के तहत एक ही प्रजातियों में हड़ताली आइलेट plasticity प्रजातियों मतभेद के बजाय चयापचय परिवर्तनों के जवाब में evolutionarily अधिग्रहीत अनुकूलन सुझाव है कि हो सकता है. (4) endocrine सेलुलर संरचना और कुछ जीन की अभिव्यक्ति में परिवर्तन के साथ साथ आइलेट वास्तुकला की पुनर्व्यवस्था, अपनी कार्यात्मक संपत्तियों में आइलेट अनुकूलन, जो आगे intraislet endocrine सेल नेटवर्क की भूमिका का महत्व पता चलता है को प्रतिबिंबित कर सकते हैं.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
अध्ययन के द्वारा समर्थित है अमेरिका के सार्वजनिक स्वास्थ्य सेवा डी.के.-081,527 अनुदान, डी.के. - ०,७२,४७३ और शिकागो मधुमेह अनुसंधान और प्रशिक्षण केन्द्र (पशु मॉडल कोर) के विश्वविद्यालय, और Kovler परिवार फाउंडेशन से एक उपहार के लिए डी.के.-+२०,५९५.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Fluorescent microscope | Microscope | Olympus Corporation | IX-81 | |
| Stereo Investigator | Program | MBF Bioscience | ||
| MIP-GFP mice | Mice | Jackson Laboratory | ||
| Mathematica | Program | Wolfram | ||
| Image J | Program | National Institutes of Health | ||
| Slidebook | Program | Olympus |
References
- Steiner, D. J., Kim, A., Miller, K., Hara, M. Pancreatic islet plasticity - Interspecies comparison of islet architecture and composition. ISLETS. 2, 135-145 (2010).
- Kim, A., Miller, K., Jo, J., Wojcik, P. l, Kilimnik, G., Hara, M. Islet architecture - a comparative study. ISLETS. 1, 129-136 (2009).
- Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E1331-E1338 (2009).
- Hara, M., Dizon, R. F., Glick, B. S., Lee, C. S., Kaestner, K. H., Piston, D. W., Bindokas, V. P. Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas. Am J Physiol Endocrinol Metab. 290, E1041-E1047 (2006).
- Hara, M., Wang, X., Kawamura, T., Bindokas, V. P., Dizon, R. F., Alcoser, S. Y., Magnuson, M. A., Bell, G. I. Transgenic mice with green fluorescent protein-labeled pancreatic beta -cells. Am J Physiol Endocrinol Metab. 284, E177-E183 (2003).
