Immunocytochemistry : 인간 신경 줄기 세포
Summary
Immunocytochemistry은 존재, subcellular 지방화 및 교양 세포에 대한 관심의 항원의 상대적인 풍부를 결정하는 강력한 방법입니다. 이 프로토콜은 선물 쉬운 따라 하나가 항체를 절약 하나의 얼룩을 최대한 활용 수있게 단계 시리즈.
Abstract
Immunocytochemistry은 존재를 결정하는 매우 강력하고 매우 간단 방법, subcellular 지방화, 그리고 가장 일반적으로 흥미, 교양 세포에있는 단백질의 항원의 상대적인 풍부합니다. 이 프로토콜은 선물 쉬운 따라 자신의 얼룩 밖으로 고품질 재현할 질적 및 양적 데이터를 가져오는 동안 연구자 기본 및 보조 항체를 보존하기 위해 사용됩니다 단계 시리즈. 얼룩에 필요한 항체의 볼륨을 보존하는 데 도움이 프로토콜의 두 측면이 있습니다. 하나의 세포는 조직 문화 판의 우물에 배치됩니다 작은 원형 coverslips에 성장하고 있습니다. 고정 후 coverslips에있는 세포는 접시의 우물에서 제거할 수 있습니다. 항체 얼룩 경우, 세포와 coverslip은 parafilm에 대한 항체 솔루션의 작은 방울로 반전하고 건조 방지하기 위해 parafilm의 두 번째 조각으로 덮여있다. 이 방법을 사용하여 항체 솔루션만이 ~ 25 μl가 물들다 각 coverslip (또는 샘플) 필요합니다. 이 프로토콜은 인간의 신경 줄기 / 전구체 세포 (hNSPCs)의 immunostaining 설명하지만, 많은 다른 세포 유형에 사용할 수 있습니다.
Protocol
Discussion
이 프로토콜은 필요한 항체의 볼륨을 최소화하고 안정적인 세포 얼룩을 제공 hNSPCs위한 immunostaining 절차를 설명합니다. 설명된 절차는 세포내 항원 최선이지만, 세포 표면 분자를 얼룩이나 cytoskeleton의 얼룩을 향상시키기 위해 수정할 수 있습니다.
Acknowledgements
저자는 어린이 병원 parafilm의 얼룩 기술의 초기 교육에 대해 에모리 대학에서 hNSPC 문화와 박사 게리 Bassell를 제공하는 오렌지 카운티 연구소 국립 인간 신경 줄기 세포 자원의 박사 필립 H. 슈워츠을 인정하고 싶습니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| German glass (Deutsche Spiegelglas) coverslips | Tool | Carolina Biological Supply Company | WW-63-3029 | 12,15,18, 22, 25 mm coverslips available |
| Liquinox phosphate-free detergent | Reagent | Sigma | Z273279 | very viscous |
| Poly-D-lysine hydrobromide | Reagent | Sigma | P7280 | |
| Laminin, natural mouse | Reagent | Invitrogen | 23017-015 | |
| EMEM (1X) | Reagent | Mediatech | MT-10-010-CV | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| 24 well plate | Tool | Fisher | 08-772-1 | |
| Triton X-100 | Reagent | Fisher | BP151-500 | very viscous |
| Paraformaldehyde | Reagent | Sigma | P6148 | potential carcinogen, use caution when using it in powder and solution form |
| Bovine Serum Albumin, IgG-free | Reagent | Jackson Immunoresearch | 001-000-161 | |
| Hoechst 33342 | Reagent | Invitrogen | H-1399 | |
| Vectashield | Reagent | Vector Laboratories | H-1000 | viscous |
References
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