אנו מתארים פרוטוקול עבור ייצור של מכשירים microfluidic שיכולה לאפשר לכידת תא ותרבות. בגישה זו microstructures בדוגמת כגון חריצים בתוך ערוצי microfluidic המשמשים ליצירת מתח נמוך גזירה אזורים בתוך התא שבו ניתן לעגן.
Abstract
אנו מתארים מכשיר microfluidic עם דפוסי microgrooved לחקר התנהגות תאית. זו פלטפורמה microfluidic מורכבת ערוץ fluidic העליון מצע microgrooved התחתונה. כדי לפברק את ערוצי microgrooved, העליון פולי (dimethylsiloxane) (PDMS) עובש המכיל את הרושם של ערוצי microfluidic היה בציר קשור מצע microgrooved. שימוש במכשיר זה, תאים פיברובלסטים עכבר היו משותק בתוך מצעים בדוגמת microgrooved (25, 50, 75, ו – 100 מיקרומטר רחב). כדי ללמוד אפופטוזיס במכשיר microfluidic, מדיה המכילה מי חמצן, Annexin V, יודיד propidium היה perfused לתוך התעלה fluidic למשך 2 שעות. מצאנו כי תאים שנחשפו ללחץ חמצוני הפך אפופטוטיים. תאים אפופטוטיים אלה אושרו על ידי Annexin V כי חייב phosphatidylserine על עלון החיצוני של קרום התא בעת תהליך אפופטוזיס. שימוש המכשיר microfluidic עם דפוסי microgrooved, תהליך אפופטוזיס נצפתה בזמן אמת ונותחו באמצעות מיקרוסקופ הפוך הכולל תא הדגירה (37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2). לכן, זה מכשיר microfluidic משולב עם מצעים microgrooved יכול להיות שימושי עבור לימוד התנהגות הסלולר וביצוע תפוקה גבוהה ההקרנה סמים.
Protocol
א Microfabrication של המכשיר microfluidic 4 אינץ' רקיק סי מטופל עם פלזמה החמצן מגיב (5 דקות ב 30W, Harrick מדעי, ניו יורק). Photoresist שלילית (SU-8 2015, Microchem, MA) היא ספין מצופה בסל"ד 900 דקות 1 על פרוסות סיליקון Si. <li style=…
Discussion
תאים היו משותק בתוך מצעים בדוגמת microgrooved במכשיר microfluidic. תהליך אפופטוזיס של תאים שנחשפו מי חמצן נצפתה בזמן אמת ונותחו באמצעות Annexin V ו יודיד propidium. לכן, זה מכשיר microfluidic המכיל ערוצי microgroove יכול להיות שימושי עבור הקרנת תפוקה גבוהה סמים.
Chung, B. G., Manbachi, A., Khademhosseini, A. A Microfluidic Device with Groove Patterns for Studying Cellular Behavior. J. Vis. Exp. (7), e270, doi:10.3791/270 (2007).