Summary

Градиент генерирующих микрожидкостных Устройство для клеточной биологии

Published: August 30, 2007
doi:

Summary

Мы опишем протокол для микротехнологий градиента генерирующих микрожидкостных устройств, которые могут генерировать пространственные и временные градиенты в четко определенных микроокружения. При таком подходе, градиент генерирующих микрожидкостных устройство может быть использовано для изучения направлены миграции клеток, эмбриогенез, заживление ран и рака метастазы.

Abstract

Изготовления и эксплуатации градиент генерирующих микрожидкостных устройств для изучения сотовой поведение описано. Микрожидкостных платформа позволяет экспериментальный инструмент, потому что она может точно управлять потоками жидкости, обеспечивают высокую пропускную экспериментов, а также генерировать стабильный растворимый градиенты концентрации. По сравнению с обычными генераторами градиент, поли (диметилсилоксана) (PDMS)-основанной микрожидкостных устройств может генерировать стабильный градиент концентрации факторов роста, с четко определенными профилями. Здесь, мы разработали простой градиент генерирующих микрожидкостных устройств с тремя раздельными входами. Три микроканалов объединены в один микроканальных для создания градиентов концентрации. Стабильность и форму градиенты фактор роста были подтверждены флуоресцеина isothyiocyanate (FITC)-декстрана с молекулярной массой похож на эпидермальный фактор роста (EGF). Используя этот микрожидкостных устройств, мы показали, что фибробласты подвергается градиентов концентрации ЭФР мигрировал в сторону более высоких концентраций. Направленной ориентации миграции клеток и моторику мигрирующих клеток были количественно оценены ячейки отслеживания анализа. Таким образом, этот градиент генерирующих микрожидкостных устройство может оказаться полезным для изучения и анализа поведения мигрирующих клеток.

Protocol

А. микротехнологий градиента генерирующих микрожидкостных устройств Пластины кремния обрабатывают реактивные кислородной плазмы (5 мин при 30 Вт, Harrick Научные, Нью-Йорк). Отрицательные фоторезиста (ГУ-8 50, Microchem, MA) является спин-покрытием при 1000 оборотов в минуту в течение 1 мин…

Discussion

Клетки подвергаются стабильный градиент концентрации ЭФР в микрожидкостных устройств мигрировал в сторону более высоких концентраций. Направленной ориентации клеточной миграции, хемотаксиса индекс, моторику мигрирующих клеток были исследованы по мобильному отслеживания анализа. Таким образ?…

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Dextran-FITC Reagent Sigma Aldrich FD10S Fluorescein isothiocyanate (FITC) conjugated-dextran (10kD)
hr-EGF   Invitrogen 13247-051 human recombinant Epidermal growth factor
PDMS   K.R. Anderson Co. Inc. 2065622 Poly(dimethylsiloxane) (PDMS), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb)
Negative photoresist   Microchem SU-8 50  
Si wafer       silicone wafer, 4 inch
Petri dishes        
Polyethylene tubing   Becton Dickinon PE 20  
PBS   Invitrogen    
Fibronectin        
NIH 3T3 cell-line     fibroblast cells
Inverted microscope   Nikon TE 2000  

References

  1. Jeon, N. L., Baskaran, H., Dertinger, S. K. W., Whitesides, G. M., Van de Water, L., Toner, M. Neutrophil chemotaxis in linear and complex gradients of interleukin-8 formed in a microfabricated device. Nat. Biotechnol. 20, 826-830 (2002).
  2. Lin, F., Nguyen, C. M., Wang, S. J., Saadi, W., Gross, S. P., Jeon, N. L. Effective neutrophil chemotaxis is strongly influenced by mean IL-8 concentration. Biochem. Biophys. Res. Commun. 319, 576-581 (2004).
  3. Chung, B. G., Flanagan, L. A., Rhee, S. W., Schwartz, P. H., Lee, A. P., Monuki, E. S., Jeon, N. L. Human neural stem cell growth and differentiation in a gradient-generating microfluidic device. Lab Chip. 5, 401-406 (2005).
  4. Saadi, W., Wang, S. J., Lin, F., Jeon, N. L. A parallel-gradient microfluidic chamber for quantitative analysis of breast cancer cell chemotaxis. Biomed. Microdevices. 8, 109-118 (2007).
  5. Chung, B. G., Park, J. W., Hu, J. S., Huang, C., Monuki, E. S., Jeon, N. L. A hybrid microfluidic-vacuum device for interfacing with conventional cell culture platform. BMC Biotechnol. 7, (2007).

Play Video

Cite This Article
Chung, B. G., Manbachi, A., Saadi, W., Lin, F., Jeon, N. L., Khademhosseini, A. A Gradient-generating Microfluidic Device for Cell Biology. J. Vis. Exp. (7), e271, doi:10.3791/271 (2007).

View Video