ゲートウェイ互換二分子蛍光相補（BiFC）システムを使用してプラントにおけるタンパク質相互作用の検出
Summary
我々は、植物におけるタンパク質間相互作用をテストする手法を開発した。黄色蛍光タンパク質（YFP）がつの非オーバーラップフラグメントに分割されます。各断片は融合タンパク質の発現を可能にする、ゲートウェイのシステムを経由して目的の遺伝子にインフレームでクローニングされる。検死のタンパク質が相互作用するときにYFPシグナルの再構成にのみ発生します。
Abstract
我々は、 生体内の 2つのタンパク質間相互作用をテストするBiFC技術を開発しました。これは二つの非重複フラグメントに分割することにより、黄色蛍光タンパク質（YFPを）実現されます。各断片は、目的の遺伝子にインフレームでクローニングされる。これらのコンストラクトは、融合タンパク質の輸送の発現を可能にする、 アグロバクテリウム媒介形質転換によりタバコbenthamianaに同時形質転換することができる。検死のタンパク質が1-7をやり取りするときにYFPシグナルの再構成にのみ発生します。タンパク質 – タンパク質相互作用をテストおよび検証するために、BiFCは酵母ツーハイブリッド（Y2H）アッセイと一緒に使用することができます。これは、Y2Hで見落とされることができる間接的な相互作用を検出する場合があります。 Gatewayテクノロジは、できるだけ8,9限り多くの発現および機能解析システムにシャトルに興味のある遺伝子（GOI）の研究者を可能にする普遍的なプラットフォームです。方向とリーディングフレームの両方が表現対応のクローンを作るために制限酵素やライゲーションを使用せずに維持することができます。結果として、一つは実験全体で一貫した結果を確保するために、すべての再シーケンシングのステップをなくすことができます。我々はBiFCとY2H両方アッセイ10を実行するために使いやすいツールを研究者に提供するゲートウェイ互換BiFCとY2H一連のベクトルを作成している。ここで、我々は、Nのタンパク質-タンパク質相互作用をテストするために私達のBiFCシステムを使用してのしやすさを示すbenthamiana植物 。
Protocol
Discussion
BiFCアッセイはタンパク質相互作用を研究するための強力なツールです。従来のY2Hアッセイとは異なり、BiFCだけでなく、タンパク質 – タンパク質相互作用を可視化できるだけでなく、サブ細胞内局在などのタンパク質複合体の詳細な情報を提供します。また、2つの候補タンパク質が第三のパートナーが十分に近づけることができる限り、間接的な相互作用を検出することが可能です。あらゆ…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
私たちは、原稿と一般的なラボの援助を読み取るためのVi Nguyenさんに感謝。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Acetosyringone | Sigma | D134406 |
| MES hydrate | Sigma | M2933 |
| 1 mL slip-tip tuberculin syringe | BD | 309602 |
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