Мы разработали методику для тестирования белок-белковых взаимодействий в растение. Желтый флуоресцентный белок (YFP) расщепляется на два непересекающихся фрагментов. Каждый фрагмент клонировали в рамке интересующего гена через шлюз системы, что позволяет выражение плавления белков. Восстановление сигнала YFP только тогда, когда следствие белки взаимодействуют.
Мы разработали BiFC технику для проверки взаимодействия двух белков в естественных условиях. Это достигается за счет расщепления желтый флуоресцентный белок (YFP) на два непересекающихся фрагментов. Каждый фрагмент клонировали в рамке гена. Эти конструкции могут быть совместно преобразован в Nicotiana benthamiana через преобразование опосредованной Agrobacterium, что позволяет транзитным выражение плавления белков. Восстановление сигнала YFP только тогда, когда следствие белки взаимодействуют 1-7. Для проверки и подтверждения белок-белковых взаимодействий, BiFC могут быть использованы вместе с дрожжами два гибридных (Y2H) анализа. Это может обнаружить косвенные взаимодействия, которые могут быть пропущены в Y2H. Шлюз технология является универсальной платформой, которая позволяет исследователям трансфер интересующего гена (ГОИ) на столько экспрессии и функциональные системы анализа в качестве возможных 8,9. Обе ориентации и рамки считывания может быть обеспечена без использования ферментов рестрикции или лигирования, чтобы выражения готовых клонов. В результате, один может устранить все заново последовательность шагов для обеспечения последовательного результаты на протяжении всего эксперимента. Мы создали серию шлюзов совместимы векторов BiFC и Y2H которые предоставляют исследователям с помощью простых в использовании инструментов для выполнения как BiFC и Y2H анализов 10. Здесь мы демонстрируем, простота использования наших BiFC комплекс для тестирования белок-белковых взаимодействий в Н. benthamiana растений.
BiFC анализ является мощным инструментом для изучения белковых взаимодействий. В отличие от традиционного анализа Y2H, BiFC не только позволяет визуализировать белок-белковых взаимодействий, но также предоставляет дополнительную информацию из белкового комплекса, таких как субклеточные …
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарны В. И. Нгуен за чтение рукописи и общую помощь лаборатории.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Acetosyringone | Sigma | D134406 |
MES hydrate | Sigma | M2933 |
1 mL slip-tip tuberculin syringe | BD | 309602 |