<em> במבחנה</em> שיטת לחקות<em> In vivo</em> בידול האפיתל המתואר. וירוסים רבים למקד לתאי האפיתל במסגרת מחזור החיים הנגיפי שלהם, שיטה זו מספקת אמצעי לבחינת וירוס: אינטראקציות מארחים יותר מקרוב דומה לזו המתרחשת<em> In vivo</em>. טכניקה זו ניתן להשתמש עם קרטינוציטים ראשוניים, שורות תאים שהוקמו, כמו גם נורמלי או חולה רקמות ביופסיה.
פיתוח organotypic תרבויות רפסודות אפיתל סיפקה לחוקרים עם ויעיל במערכת במבחנה כי משחזר בנאמנות בידול אפיתל. ישנם שימושים רבים עבור מערכת זו. למשל, היכולת לגדול תלת ממדי תרבויות רפסודות organotypic של קרטינוציטים הייתה ציון דרך חשוב במחקר של וירוס הפפילומה האנושי (HPV) 1. מחזור החיים של HPV הוא קשור קשר הדוק בידול של האפיתל הקשקשי 2. Organotypic תרבויות רפסודות אפיתל כפי שתואר כאן לשחזר את כל מחזור החיים וירוס הפפילומה, כולל ייצור וירוס 3,4,5. בנוסף, אלה תרבויות רפסודות התערוכה נגעים שומות דומות לאלה שנצפו על זיהום vivo עם HPV. לכן מערכת זו יכולה לשמש גם כדי ללמוד סרטן תאים אפיתל, כמו גם את ההשפעה של תרופות על התמיינות תאים אפיתל בכלל. פותח במקור על ידי Asselineau ו Prunieras <sלמעלה> 6 ו שונה על ידי Kopan et al. 7, התרבות organotypic אפיתל מערכת רפסודה התבגר לתוך המודל, בכלל התרבות קל יחסית, הכוללת את הצמיחה של תאים על קולגן המתחבר שמרו על הממשק אוויר נוזלי (איור 1 א). במשך 10-14 ימים, התאים לרבד להבדיל, ויצרו אפיתל בעובי מלא שמייצר בידול ספציפיים cytokeratins. רפסודות שנקטפו ניתן לבדוק בהיסטולוגיה, כמו גם על ידי שיטות מולקולריות ביוכימיים סטנדרטיים. במאמר זה, אנו מתארים שיטה לייצור של תרבויות הרפסודה של קרטינוציטים אדם מן המעלה הראשונה. באותה טכניקה ניתן להשתמש שהוקמו שורות תאים אפיתל, והוא יכול בקלות להיות מותאם לשימוש עם רקמות אפיתל מ ביופסיות נורמלי או חולה 8. וירוסים רבים היעד או אפיתל עורית או הרירית כחלק ממעגל החיים שלהם replicative. בשנים האחרונות, את הכדאיות של שימוש כת רפסודה organotypicures כשיטה של לימוד וירוסים המארחות אינטראקציות סלולריים הוכח על herpesviruses כמה, כמו גם adenoviruses, parvoviruses ו poxviruses 9. תרבויות רפסודות Organotypic ולכן יכול להיות מותאם לבחון הפתוגנזה ויראלי, הם האמצעי היחיד לבחון סוכני נגיפים חדשים עבור אותם וירוסים שאינם לעיבוד של שורות תאים קבע.
המתואר כאן שיטה, שניתן להשתמש בהם כדי ללמוד בידול אפיתל בכלל, אבל יכול גם להיות מותאם בקלות ללמוד הפתוגנזה ויראלי, כמו גם את היעילות של הרפוי פוטנציאליים. וירוסים רבים למקד לתאי האפיתל או כאתר העיקרי של זיהום, כמו במקרה של HPV, או בשלב מסוים במחזור החיים ויראלי, כמו herpesvir…
The authors have nothing to disclose.
המחברים מבקשים להודות סאלי רוברטס (אוניברסיטת בירמינגהם, בירמינגהם בבריטניה) מתנה סוג של נוגדנים E1E4. עבודה זו נתמכה על ידי מענק מטעם המכון הלאומי לסרטן (4R00CA137160-03).
Name of Reagent | Company | Catalog number |
Rat Tail Collagen type 1 (4-5mg/ml) | BD Biosciences | 354236 |
DMEM without NaHC03 | Invitrogen | 12100-061 |
NaHC03 | Sigma | S5761 |
Hepes | Calbiochem | 391338 |
Stainless Steel metal grids | Williams and Mettle Co. | CR-03063-040-100-S |
E medium11 | ||
Epidermal Growth Factor | BD Biosciences | 354010 |