Summary

Los ensayos clínicos y de eliminación de la médula espinal en un modelo murino de esclerosis lateral amiotrófica (ELA)

Published: March 17, 2012
doi:

Summary

Un modelo de ratón para la esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es un examen clínico y de comportamiento. Como un requisito previo para un análisis inmunohistoquímico acompaña la preparación de la médula espinal se representa en detalle.

Abstract

La esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es un trastorno neurodegenerativo fatal que resulta en la degeneración progresiva de neuronas motoras. Pico de aparición es de alrededor de 60 años de la enfermedad esporádica y alrededor de 50 años para la enfermedad familiar. Debido a su curso progresivo, el 50% de los pacientes mueren dentro de los 30 meses del inicio de los síntomas. Con el fin de evaluar nuevas opciones de tratamiento para esta enfermedad, los modelos genéticos de ratón de la ALS se han generado sobre la base de las mutaciones humanas familiares en el gen SOD, tales como la SOD1 (G93A) mutación. Aspectos más importantes que tienen que ser evaluadas en el modelo son la supervivencia global, la evolución clínica y la función motora. En este caso, se demuestra la evaluación clínica, muestran la realización de dos pruebas de motor de comportamiento y proporcionar sistemas cuantitativos de calificación para todos los parámetros. Debido a un análisis en profundidad del modelo de ratón de ALS por lo general requiere un examen inmunohistoquímico de la médula espinal, que demuestran su preparación en detalle la aplicación de la vermétodo de laminectomía rsal. Los ejemplos de los hallazgos histológicos se ha demostrado. La aplicación completa de los métodos de examen que aparecen en los estudios sobre el modelo de ratón de la ELA permitirá a los investigadores para probar de forma fiable las futuras opciones terapéuticas que pueden servir de base para los ensayos clínicos más humanos.

Protocol

Los animales fueron adquiridos de Jackson Laboratory (# 002726) 1. Se anotó clínicamente y se sometió a una prueba de función motora (rotarod prueba) y de la fuerza muscular (colgando prueba de hilo). Todas estas pruebas y el asesinato posterior de los animales a fin de preparar la médula espinal se han realizado de acuerdo muy cerca de las directrices locales para la correcta realización de los experimentos con animales. 1. Puntuación clínica Ap…

Discussion

La SOD1 (G93A) modelo de ratón genético es un modelo animal útil para estudiar el curso de la enfermedad de la pérdida de las motoneuronas progresiva comparable a la humana esclerosis lateral amiotrófica 8. Una variedad de diferentes modelos de tratamientos se han evaluado en este modelo y representan una base para después probar en humanos 8-10 estudios clínicos. Con el fin de ser capaz de detectar diferencias significativas en un estudio de tratamiento experimental en estos ratones, es de …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

LT ha recibido apoyo económico del Forschungsförderungsprogramm de la Medicina de la Universidad de Gotinga. PL y MB fueron apoyados por el Centro de Investigación DFG para la Fisiología Molecular del Cerebro (CMPB), Göttingen. Los autores agradecen al Dr. Lars Tatenhorst para obtener ayuda con la videografía y Liebau Birgit ayuda para edición de audio y vídeo.

Materials

  Manufacturer Ordering Information
Behavioral testing    
Rota-Rod for Mice Ugo Basile, Comerio, Italy # 47600
Hanging wire device Custom-made  
 
Spinal Cord Preparation    
Operation Table
Operation lamp
Protective gloves
   
“Iris” Scissors, angled to side Fine Science Tools, Heidelberg, Germany 14063-09
Cohan-Vannas Spring Scissors, straight Fine Science Tools, Heidelberg, Germany 15000-10
Micro forceps Hammacher, Solingen, Germany HWC 111-10
Scalpel “präzisa plus” Dahlhausen, Köln, Germany 11.000.00.510, FIG 10

References

  1. Gurney, M. E. Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu, Zn superoxide dismutase mutation. Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).
  2. Weydt, P. Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS. Neuroreport. 14 (7), 1051-1054 (2003).
  3. Crawley, J. N. Behavioral phenotyping strategies for mutant mice. Neuron. 57 (6), 809-818 (2008).
  4. Miana-Mena, F. J. Optimal methods to characterize the G93A mouse model of ALS. Amyotroph. Lateral Scler. Other Motor Neuron Disord. 6 (1), 55-62 (2005).
  5. Zhong, Z. Activated protein C therapy slows ALS-like disease in mice by transcriptionally inhibiting SOD1 in motor neurons and microglia cells. J. Clin. Invest. 119 (11), 3437-3449 (2009).
  6. Pitzer, C. Granulocyte-colony stimulating factor improves outcome in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis. Brain. 131 (Pt. 12), 3335-3347 (2008).
  7. Gowing, G. Ablation of proliferating microglia does not affect motor neuron degeneration in amyotrophic lateral sclerosis caused by mutant superoxide dismutase. J. Neurosci. 28 (41), 10234-10244 (2008).
  8. Scott, S. interpretation of studies in the standard murine model of ALS. Amyotroph Lateral Scler. 9 (1), 4-15 (2008).
  9. Turner, B. J., Talbot, K. Transgenics, toxicity and therapeutics in rodent models of mutant SOD1-mediated familial ALS. Prog Neurobiol. 85 (1), 94-134 (2008).
  10. Corse, A. M. Preclinical testing of neuroprotective neurotrophic factors in a model of chronic motor neuron degeneration. Neurobiol Dis. 6 (5), 335-346 (1999).
  11. Knippenberg, S. Significance of behavioural tests in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS). Behav Brain Res. 213 (1), 82-87 (2010).
  12. Burgess, R. W., Cox, G. A., Seburn, K. L. Neuromuscular disease models and analysis. Methods Mol. Biol. 602, 347-393 (2010).
  13. Hayworth, C. R., Gonzalez-Lima, F. Pre-symptomatic detection of chronic motor deficits and genotype prediction in congenic B6.SOD1(G93A) ALS mouse model. Neuroscience. 164 (3), 975-985 (2009).
  14. Ludolph, A. C. Guidelines for preclinical animal research in ALS/MND: A consensus meeting. Amyotroph Lateral Scler. 11 (1-2), 38-45 (2010).
  15. Boillee, S. Onset and progression in inherited ALS determined by motor neurons and microglia. Science. 5778 (3), 1389-1392 (2006).

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Cite This Article
Günther, R., Suhr, M., Koch, J. C., Bähr, M., Lingor, P., Tönges, L. Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS). J. Vis. Exp. (61), e3936, doi:10.3791/3936 (2012).

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