Vi beskriver en enkel och billig teknik för att införa höga koncentrationen av fluorescerande och kalcium-känsligt färgämnen till neuroner eller någon neuronala tract användning av en pipett polyeten sugning.
Retrograd märkning av neuroner är en vanlig metod anatomisk 1,2 som också har använts för att lasta kalcium och spänningskänsliga färgämnen till neuroner 3-6. I allmänhet är de färgämnen som används fasta kristaller eller genom lokal injektion tryck med användning av glaspipetter. Emellertid kan detta resultera i utspädning av färgämnet och reducerad märkning intensitet, särskilt när flera timmar krävs för att färgdiffusion. Här visar vi en enkel och billig teknik för att införa fluorescerande och jon-känsliga färgämnen till neuroner som använder en pipett polyeten sugning fylld med färglösningen. Denna metod erbjuder ett pålitligt sätt för att upprätthålla en hög koncentration av färgämnet är i kontakt med axoner hela laddningsproceduren.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Company | Catalogue number | Comments | |
Tubing | PE90 (IDxOD:0.034″x0.050″; Wall Thikness:0.008″) | Clay Adams Brand Intermedic | 427421 | For Type I & Type II pipettes |
NSF-51(IDxOD:1/16×1/8; Wall Thikness:1/32) | PharMed BPT, Cole-Parmer | AY242002 | For Flexible tubing | |
Syringe | 1ml insulin Syringe U-100 | Becton Dickenson | 329650 | |
Needle | 19G x1-1/2″ Metal Hub Needle | MONOJECT | 200136 | Connecting Type II pipette to syringe |
Alcohol Lamp | ||||
Stopcock | Three-way Stopcock with Male Luer Slip Adapter | Baxter Healthcare Corp. | 2C6241 | Use with syringe |
Holder | H-1 electrode holder | Narishige | H-1/12 | |
Magnet stand | Narishige | GJ-8 | ||
Micromanipulator | Narishige | M-3333 | ||
Tweezers | S&T DUMONT Swiss 00632-11 | DUMONT | JF-5 TC |
*Those are suggested materials. Can be replaced with any compatible products