タンパク質のミスフォールディングサイクリック増幅(PMCA)はプリオン変換とひずみと種の壁の研究のためのin vitroアッセイである。また、プリオン検出アッセイとして使用することができます。
プリオンは、動物とヒト9,18で必然的に致命的な伝達性 海綿状脳症(TSE)を引き起こす感染性病原体である。プリオンタンパク質は、2つの異なるアイソフォームは、非感染性宿主でエンコードされたタンパク質(PrP C)および感染質(PrP Sc)は、PrP Cの8の異常に折り畳まれたアイソフォームを持っています。
プリオン剤での作業の課題の1つは、ホスト13接種後の臨床徴候の開発の前に長い潜伏期間があります。これは、伝統的に長く、高価な動物のバイオアッセイ研究を命じた。さらに、PrP Scの生化学的および生物物理学的特性はあまり彼らの異常なコンフォメーションと凝集状態に起因する特徴がある。
PrP Sc は 試験管 14 内 の PrP ScへのPrP Cの種子変換することができます。 PMCAはアドバを取るのin vitro手法ですのPrP CとPrP Scの種子19微量の過剰な量を含んでいるシステムから、加速度的に、PrP Scのを大量に生成するために超音波処理およびインキュベーションサイクルを使用してこの能力のntage。この手法は、効果的にプリオン株の干渉をエミュレートするためには、PrP CからPrP Scの変換の種および株特異性を再現するために、感染した組織、体液、および環境試料6,7,16からPrP Scの非常に低いレベルを増幅することが証明されています23。
一貫性のある結果を生成し、それらの結果を定量化、汚染を最小限にするための提言を含め、本稿では詳細PMCAプロトコルを、。我々はまた、感染性プリオン株、プリオン株の干渉、及び環境中のプリオンの検出の発生と特性化など、いくつかのPMCAアプリケーションを、議論する。
感染性プリオンタンパク質を増幅するという課題は、長い潜伏期間および in vivo実験での経費です。 PMCA技術は感染性プリオンエージェントを増幅するための費用効果的な手段です。いくつかの研究室では、正確に試験管 7、9、12、14、19,24 のプリオン株を増幅するPMCAの能力を確認しています。
プリオン病は、種間で送信することができ…
The authors have nothing to disclose.
我々は、原稿の批判的な読みのために博士はヴェスパーのFeマリーラモスに感謝したいと思います。この作業は、研究資源のためのナショナルセンター(P20 RR0115635-6、C06 RR17417-01とG20RR024001)と国立神経疾患研究所およびストローク(2R01 NS052609)によってサポートされていました。
Reagent / Equipment | Manufacturer | Cat. Number |
Misonix 3000 | Misonix | S-3000 |
Misonix 4000 | Misonix | S-4000 |
Tenbroeck Tissue Grinder | Kontes | 885000-0007 |
Neslab EX-7 Water Bath | Thermo Electron | Neslab EX-7 |
0.2 ml PCR Tube Strips | Thermo Scientific | AB-0451 |
Triton X-100 | Sigma Aldrich | T9284-100ML |
Complete Protease Inhibitor | Roche | 11 697 498 001 |
EDTA | J.T. Baker | 4040-00 |
DPBS | Mallinckrodt Baker Mediatech | 21-031-CV |
Versi-Dry Lab Soakers | Fisher Scientific | 14 206 28 |
Repti Therm Heater | Zoo Med Laboratories, Inc. | RH-4 |