Vi beskriver metoder för att fastställa<em> In vitro</em> Heterotypiska tredimensionella modeller består äggstockarna fibroblaster och normala äggstockar yta eller äggstockscancer epiteliala celler. Vi diskuterar användningen av dessa modeller för att studera stromal-epiteliala samspel som sker under äggstockscancer utveckling.
Epitelial äggstockscancer (EOCs) är den vanligaste orsaken till död i gynekologisk malignitet i västerländska samhällen. Trots framsteg inom kirurgiska behandlingar och förbättrade platinabaserade kemoterapi, har det varit lite förbättring i EOC överlevnad för mer än fyra decennier 1,2. Samtidigt steg I tumörer har 5-årsöverlevnaden> 85%, överlevnad för steg III / IV sjukdom är <40%. Således kunde den höga dödligheten för EOC avsevärt minskas om tumörer upptäcktes vid tidigare, mer behandlingsbara, steg 3-5. För närvarande är den molekylära genetiska och biologiska grunden för tidigt sjukdomens utveckling dåligt förstådd. Mer specifikt är lite känt om den roll som mikromiljön vid tumörinitiering, men kända riskfaktorer för EOCs (t.ex. ålder och paritet) tyder på att mikromiljön spelar en nyckelroll i den tidiga uppkomsten av EOCs. Vi utvecklade därför tredimensionella heterotypiska modellerav både normal äggstock och tidigt stadium äggstockscancer. För den normala äggstocken, samarbetar vi odlade normala äggstockar yta epitelial (IOSE) och normal stromal fibroblast (INOF) celler, som förevigats av retrovrial transduktion av den katalytiska subenheten av humant telomeras holoenzym (hTERT) för att förlänga livslängden på dessa celler i kultur. Att modellera de tidigaste stadierna av äggstockarna epitelceller omvandling, överuttryck av CMYC onkogen i IOSE celler, återigen samodlas med INOF celler. Dessa heterotypiska modeller användes för att undersöka effekterna av åldrande och åldrande på omvandling och invasion av epitelceller. Här beskriver vi de metodologiska stegen i utvecklingen av dessa tredimensionella modell, dessa metoder är inte specifika för utvecklingen av normala äggstockar och äggstockscancer vävnad cancer, och kan användas för att studera andra vävnadstyper där stromala och epiteliala cell interaktioner är en grundläggande aspekt av vävnaden underhåll och di-sjukdomsbekämpning utveckling.
Biologi tidig epitelial äggstockscancer (EOC) är dåligt känd. Kanske en av de största hindren på detta område under många år har varit bristen på förståelse för vävnadsspecifika ursprung sjukdomen, och av betydelsen av den roll som mikromiljön i EOC utveckling. Under de senaste åren har har blivit tydligt att EOC är en heterogen sjukdom med flera olika histophathological subtyper, förmodligen med olika cellulära ursprung för olika subtyper. Till exempel de aktuella data tyder på att hög kvalitet se…
The authors have nothing to disclose.
Denna forskning utfördes vid Keck School of Medicine, University of California, USA, och University College London, Storbritannien. KL finansieras av National Institute of Health bidrag 5 U19 CA148112-02. BG har finansierats av ett projekt bidrag från Eva Appeal gynekologisk onkologi välgörenhet (Storbritannien). En del av detta arbete bedrivs på UCLH / UCL delvis finansiering från Department of Health: s NIHR biomedicinsk forskning Centre stödordning.
Reagent | Supplier | Catalogue Number |
PolyHEMA, suitable for cell culture | Sigma Aldrich | P3932 |
Molecular biology grade ethanol | Sigma Aldrich | E7023 |
Sterile water for cell culture | VWR | 12001-356 |
MCDB105 | Sigma Aldrich | M6395 |
Medium 199 | Sigma Aldrich | M2154 |
Hyclone Fetal bovine serum | Thermo Scientific | SH30088.03 |
Gentamicin | Sigma Aldrich | G1397 |
Amphotericin B | Sigma Aldrich | A2942 |
pBABE-hygro-hTERT | Addgene | 1773 |
PBS | VWR | 12001-766 |
0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-072 |
Cell strainer (40 or 70 μm) | VWR | 21008-949 21008-952 |
Anti-fibroblast surface protein antibody, clone 1B10 | Sigma | F4771 |
Anti-pan-cytokeratin antibody (C11) | Santa Cruz | sc-8018 |
Polybrene (hexadimethrine bromide) | Sigma | 107689 |
TeloTAGGG Telomerase PCR ELISAPLUS | Roche | 12013789001 |
TeloTAGGG Telomere Length Assay | Roche | 12209136001 |
Table 1. Reagents and Equipment Referred to in this study.