Summary
생쥐의 양이온 liposomes/siRNA/ITSN-1s 단지 24 일 동안 72 시간마다 반복적으로 복고풍 궤도 주사 효율적으로 75 %에 ITSN - 초 발현 및 단백질 발현을 감소 마우스 폐 미세 혈관에 siRNA의 양면을 제공합니다. 이 기술은 동물 모델에서 높은 재현성, 부작용이없고 사망을 방지합니다.
Abstract
이전 연구는 ITSN - 초 (KD ITSN), 폐 혈관 투과성과 내피 세포 (내피) 생존에 의한 세포 사멸 세포 죽음, ITSN - 초 장기와 세포 배양 시스템 개발의 주요 장애물을 조절에 관여 endocytic 단백질의 최저를 보였다 억제 1. 사업자로서 양이온 성 리포좀을 사용하여, 우리는 ITSN-1 유전자 (의 siRNA ITSN) 대상의 siRNA의 전신 투여가 마우스 폐에 ITSN - 초 유전자의 침묵을 탐구. 2 생산, 반복 투여에 안전 nonimmunogenic, 비 독성, 쉬운 : 양이온 리포좀의 siRNA 전달을위한 몇 가지 장점을 제공합니다. 리포솜의 성능 및 생물 학적 활동은 콜레스테롤과 디메틸 dioctadecyl 암모늄 브로마이드 조합을 사용하여 크기, 전하, 지질 구성, 안정성, 용량 및 투여 3의 경로를 여기에, 효율적으로 획득 한 마우스의 폐에서 특정 KD ITSN에 따라 달라집니다. 정맥 배달의 siRNA ITSN의 / 양이온 성 리포좀과의 복합체는 일시적으로 추가 3 일 후에 회수 3 일에서 마우스 폐 ITSN - 초 단백질 발현을 무너 뜨렸다. 반복 안전한 항공사로서 양이온 성 리포좀의 활용, 연구는 24 일 연장했다. 따라서, 갓 생성 된 단지 레트로 궤도 치료 연구 4에 걸쳐 지속적인 KD ITSN을 유도마다 3 일 투여 하였다. 여러 시점 이후의 siRNA ITSN에서 수집 마우스 조직은 폐 내피에서, 만성 KD ITSN의 효과를 평가하기 위해 전자 현미경 (EM) 분석을 실시 하였다. 고해상도 EM 영상은 우리가 폐 혈관 침대에 KDITSN에 의한 형태 학적 변화를 평가 할 수 광학 현미경으로 특성을 비 감지 (내피 장벽 즉, 중단, caveolae의 수 및 대체 수송 경로의 upregulation를 감소). 전반적으로 이러한 연구 결과는 impor에 설립ECS의 기능과 폐 항상성 ITSN-1의 TANT 역할, 생체 내에서의 siRNA - 리포좀 전달의 효과를 설명하면서.
Introduction
알몸의 siRNA는 세포막을 통과 할 수없는 부정 청구되고, 그것은 혈액에있는 효소, 조직, 세포로 쉽게 저하됩니다. 심지어 안정성을 향상시키기 위해 최근 구조 변경과 함께 투여 후 대상 사이트에서 siRNA의 축적은 매우 낮고 효율적으로 세포 내 자동차는 5 필요합니다. 양이온 성 리포좀 캡슐화 및 효소 분해 6에서 핵산을 보호하여 세포에 DNA / RNA의 큰 조각을 전송하는 잠재적 인 안전 핵산 항공사로 나타났다. 또한, 양이온 성 리포좀은 저절로 따라서 세포 2 유전자 전달을 촉진, DNA / RNA와 상호 작용합니다. 더 최근 리포솜 백신과 저 분자량 약 7을 제공하기 위해 적용되었습니다. 플라스미드 마이크로 RNA-7-표현의 리포좀 전달 폐암 세포 8 표피 성장 인자 수용체 티로신 키나제 억제제 저항을 극복한다. 을 대상으로 할 때단지는 내피 장벽을 통과하고 간질 9에 extravasate 할 가능성이 있기 때문에 혈관 내피 세포는 정맥 배달이 필수적이다. 다른 기관과 비교하여 폐의 미세 혈관에서 ECS 가장 큰 이해를 가지고 탐욕스럽게 림프절과 Peyer의 패치를 9 다음에 양이온 성 리포좀과 DNA / RNA 복합체를 내면화. 복고풍 궤도 또는 꼬리 정맥 주사를 통해 siRNA의의 설치류 모델에서 정맥 배송은 심지어 50 ㎎ / ㎏ 10 높은 농도에 무해 입증되었습니다. 게시 된 문헌에서 양이온 성 리포솜의 구성은 지질 정립과 같은 몰 비율이 11, 12에 따라 다릅니다. 백신이나 항 종양 치료 13-15의 전달 단백질의 down-regulation/over-expression을 대상으로하는지, 생체 내 유전자 전달을위한 양이온 리포좀을 사용하여 잠재적 인 응용 프로그램의 광범위한 배열이 있습니다. 기억하는 것이 중요합니다DNA / RNA-세포막 상호 작용의 효율성이 생성 단지와 막 지질 사이의 결합 형태에 의해 규제되는 것입니다. 이 대상 세포막의 프로필에 지질 성분을 맞게하는 특정 세포 유형 6 형질의 높은 속도에 유익하고 결과가 될 수 있다는 것을 제안합니다.
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Protocol
1. 양이온 성 리포좀 준비
- lipososmes 준비에 사용되는 깨끗한 둥근 바닥 플라스크를 압력솥.
- 주식 솔루션을 준비 :
- - 작은 유리 병을 사용하여 10 ㎖의 클로로포름에 디메틸 dioctadecyl 암모늄 브로마이드 (DOAB)의 200 밀리그램을 녹인다.
- - 작은 유리 병을 사용하여 10 ㎖의 클로로포름 콜레스테롤 200 mg의 녹인다.
- - 준비 및 100 RNA의 ML / DNA-ASE 무료 증류수에 5 % 포도당을 살균하는 압력솥.
- 클로로포름과 둥근 바닥 플라스크를 씻어. 플라스크, 소용돌이 5-10 ML을 추가하고 몇 분 동안 앉아 보자. 항상 알루미늄 호일로 덮여 플라스크를 유지합니다. 플라스크에서 클로로포름을 비 웁니다.
- 리포좀의 제조 :
- - 둥근 바닥 플라스크에 DOAB 원액 315 μL를 추가합니다.
- - 플라스크 콜레스테롤 원액 200 μL를 추가합니다.
- - 플라스크에 클로로포름 9.5 ML을 추가합니다ND는 소용돌이로 섞는다.
- 37 rotavapor을 설정 ° C 100 분당 회전 수 (rpm) 이상 (100 ~ 120 RPM). rotavapor가 제대로 연결되어 흡입 튜브 물 펌프 진공 제어에 연결해야합니다.
- 아르곤 가스 탱크와 rotavapor를 연결합니다.
- rotavapor에 플라스크를 부착하고 수욕을 낮추는 전에 최적의 설정을 조정합니다. 반 시계 방향으로 돌려 완전히 아르곤의 첫 번째 밸브를 엽니 다. 항상 먼저이 밸브를 열고 닫습니다. 두 번째 밸브는 플라스크에 부는 아르곤 압력을 제어합니다. 압력은 항상 부드럽게해야한다.
- 완전히 침수되지 않고 물을 터치 속도를 설정하는 플라스크에 충분한, 물 목욕 rotavapor을 낮 춥니 다.
- 약 10 분, 모든 클로로포름이 증발 될 때까지 기다립니다. 그런 다음 컴퓨터를 중지합니다.
- rotavapor 속도와 아르곤 탱크 밸브를 끕니다. 이제 플라스크 제거해야합니다.
- 일에 5 % 포도당 2 ML을 추가합니다전자 플라스크 지질을 용해합니다.
- 철저하게 모든 지질을 분해하는 1 ML의 피펫 팁을 사용하여 플라스크의 바닥을 긁어. 필요한 경우 긁힘 후, 두 번째 팁, 1 ML의 끝에서 플라스크에 남아있는 지질을 제거합니다.
- 천천히 (15 회전) 플라스크를 소용돌이로 동안 42 ° C의 물을 욕조에 얻은 솔루션을 품어.
- 냉수 sonicator 부가 가치세 (VAT)를 입력합니다. 겨우 물을 만지는 개최 플라스크 바닥 적어도 20 ~ 30 분 동안 용액을 초음파 처리.
- 물에 잠겨 둥근 바닥이 시간 제로 속도에서 42시 20 분 ° C에 대한 rotavapor의 물을 욕조에 플라스크를 가열한다.
- 0.47 미크론 이후, 0.22 마이크론 주사기 필터를 통해 리포좀을 필터링합니다.
- 작은 압출기 사용 unilamellar 리포좀 소포의 동질적인 인구를 생성하는 50 nm의 세포막을 통해 리포좀을 필터링합니다.
- 에펜 도르프 튜브에 리포좀을 전송하고 얼음에 놓으십시오.
2. 리포좀을 준비 siRNA를 - ITSN-1 단지
- 2 ㎍ / μL의 최종 농도 20 mM의 HEPES 및 150 염화 나트륨, 산도 7.4를 포함하는 siRNA를 버퍼에 표적 마우스의 siRNA ITSN을 resuspend을. 혼합 전에 얼음에 보관하십시오.
- 2 μg의 RNA (또는 400 nmol의 리포좀 : 100 μg의의 siRNA ITSN) 8 nmol의 리포좀의 비율의 siRNA ITSN 단지 : 리포좀을 준비합니다. 본 연구에서는 RNA / DNA-ASE 무료 에펜 도르프 튜브를 사용하여 갓 준비 리포좀 100 μL에 원액 (50 μM)에서의 siRNA ITSN의 50 μl를 추가했습니다. 혼합물 150 μL의 최대 한 번에 마우스 양자와 복고풍 궤도 주입 할 수 있기 때문에의 siRNA ITSN의 농도가 매우 중요합니다.
- 쥐를 주입 기다리는 동안 얼음에 혼합물을 유지합니다.
3. 마우스 레트로 궤도 정맥 주입 (눈 소켓의 내부 각도)
jove_content "> 모든 마우스 실험은 러쉬 대학 기관 애니멀 케어 및 사용위원회의 지침에 따라 승인 하였다.- 50 ㎎ / ㎏ 체중 케타민 5 ㎎ / ㎏ 체중 xylazine (시판 혼합물)의 복강 주사로 마우스를 마취. 동물의 체중과 나이에 따라, 마취 볼륨과 농도를 조정합니다. 연구 결과 마우스에 사용되는 생쥐 6-8 주 이전 CD1 수컷 생쥐이며, 25g의 주위에 무게. 주사기 바늘이 부착 된 투베르쿨린 1 ML의 유형입니다.
- 한 손으로 마우스의 귀를 잡고 눈의 내부 각도를 노출면에 마우스를 낮추십시오. 습벽 semilunaris에 중간 목표, 눈을 만지지 마십시오.
- 세 축에 45도 각도로 혼합물을 포함 주사기를 들고 눈의 눈물 볏 접근.
- 천천히 혼합물을 주입하고 주입 사이드와 복구 마우스를하자. 만약 큰 액체바늘 삽입 장소에서 물방울 형태의 주사기에 다시 바늘, 흡입 액을 철회하고 다시 시도하십시오. 반복 주사가 가장 완벽하게 복구 할 수 있도록, 눈을 교대로 수행됩니다. 모르는 경우,이 기술은 청색 염료 (50 μL, 메탄올 0.5 % 크리스탈 바이올렛) 주입과 푸른 혈관을 관찰하기 위해 마우스 폐를 노출하여 확인할 수 있습니다.
- 이 연구에서 쥐가 사망하거나 부작용없이 3 주 동안 매일 3 회 하루 주입 하였다.
4. 생화학 연구를위한 마우스 폐 관류 및 조직 컬렉션
- 1.5 ML / 분에 실행되도록 연동 펌프를 설정합니다.
- 인공 호흡기, 수술대, 악기, 멸균 면봉, 면봉, 문자열, 비커, 증류수, 행크의 균형 소금, 추적 : 설정을 준비합니다.
- 마취 혼합물 (100 ㎎ / ㎏ 체중 케타민을 10 ㎎ / ㎏ 체중 xylazine)를 복강 내 주사로 마우스를 마취. 목 수준에서 침샘을 제거하고기도를 노출합니다.
- 개복술, 소비세 격막과 함께 시작하고, 폐와 심장을 노출, 개흉술에 따릅니다.
- 흉선을 제거합니다.
- 더 나은 정확도를 위해 광학 현미경을 사용하여 폐 동맥 카테 테르를 꽂다.
- 기관 절개술을하고 tracheostoma를 사용하여 마우스를 삽관. 150 스트로크 / 분, 150 μL의 박출량의 비율로 인공 호흡기를 설정합니다.
- 출구로, 왼쪽 심방을 엽니 다.
- 연동 펌프와 행크의 솔루션을 사용하여 5 분 동안 혈액의 무료 마우스 폐 혈관을 붓는다 37 예열 ° C.
- 동일한 유량에서 추가로 10 분 동안 추적 (8 nm의 금 알부민 16) 붓는다.
- 행크의 솔루션 5 분 폐 관류하여 언 바운드 추적을 세척하십시오.
- 0.1 파이프의 10 분의 4 %의 관류 (중량 / 부피) 포름 알데히드, 2.5 % 글루 타르 알데하이드, 1 % 탄닌산에 의해 폐의 현장 정착에에 따라버퍼, 산도 7.2.
- 폐를 수집, 과도한 조직을 제거 작은 블록 (3분의 3 밀리미터) 잘라 고정액 혼합물의 2 ㎖를 포함하는 레이블 섬광 유리 병에 배치합니다.
마우스 절차를 수행하는 동안 완전히 마취 만료됩니다.
5. EM에 대한 마우스 폐 조직 처리
- 주식 솔루션을 준비 : 1 % Palade 오소 4 veronal 아세테이트, 및 켈렌 버거 버퍼입니다.
- - 1 % Palade-OSO 4 버퍼는 포함한다 : 1 ML 초산 veronal 주식, 1.25 ML 4 % 오소 4 일까지 최종 볼륨 5 ㎖에 0.1 ㎖의 N 염산과 증류수.
- - 아세테이트 veronal 원액은 1.15 g 나트륨 아세테이트 andydrous 증류수 100 mL에 바르 비탈 2.94 g을 용해하여 얻을 수 있습니다.
- - 켈렌 버거 솔루션은 아세테이트 veronal 주식의 2 ㎖, 0.1 N 염산 0.05 g의 우라 닐 아세테이트 2.8 mL를 5.1 mL를 포함증류수, pH가 6.
- 간단히 0.1 M 나트륨 cacodylate 버퍼, 산도 = 7.4, 3 번 폐 블록을 씻으십시오.
- 실온에서 1 시간 동안 0.1 파이프 버퍼, 산도 7.2의 4 % (중량 / 부피) 포름 알데히드에 시험편을 고정, 2.5 % 글루 타르 알데히드.
- 어둠 속에서, 얼음, 후드에 1 시간 동안 1 % Palade-오스뮴과 후 고정합니다.
- 켈렌 버거 버퍼를 한 번 씻어.
- 실온에서 하룻밤에 2 시간 동안 켈렌 버거 버퍼의 표본을 품어.
- 50 % 에탄올에 한 번 씻어.
- 70 %, 95 %, 다음 2 개 15 분 100 % 에탄올 : 에탄올의 등급 시리즈, 5 분 / 각각 탈수.
- 100 % 프로필렌 옥사이드, 2 개 15 분으로 전환합니다.
- 프로필렌 옥사이드를 제거하고 실온에서, 바퀴 회전, 밤새 품어, 50 %의 프로필렌 옥사이드 및 50 %의 EPON 812의 혼합물을 추가합니다.
- 다음날 아침, 혼합물을 제거하고 적어도 바퀴에 4-5 시간 동안 신선한 EPON 812를 추가합니다.
- 채워진 두 배 테이퍼 형을 사용하여신선한 100 % EPON 812 절반 방법은 선택된 표본을 추가하고 가장자리에 배치합니다.
- 60 ° C에서 인큐베이터 세트에 금형을 이동하고 그들을 48-72 시간 동안 치료하자.
- 중합 할 때, 단면 (두께 60 ~ 70 nm의) 얇게 블록을 보낼 수 있습니다.
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Representative Results
ITSN - 초 단백질과 mRNA의 수준은 서양 얼룩과 4에서와 같이 기존의 정량 PCR로의 siRNA ITSN 배달 후 몇 시간 지점에서 관찰되었다. siRNA를 ITSN 처리 쥐의 폐에있는 ITSN - 초 단백질과 mRNA의 수준 21 일 ITSN-1의 연속 최저 동안 컨트롤을 참조하여 약 75 % 감소했다. ITSN - 초없이, dynamin를-2, 세포막에서 caveolae의 박리 ITSN-1과 핵심 선수의 주요 상호 작용 파트너를 효율적으로 endocytic 사이트에 채용되지 않고 세포막 무료 수포 형성에서함으로써, caveolae 분리 캐리어는 1, 17을 발휘할 수있다. 따라서 효과가 막 분열 및 무료 기공을 갖는 캐리어의 손상 형성 부족 이입과 transendothelial 수송, 간 혈관 장벽의 파괴 및 폐 부종 (그림 1)가 발생했습니다. 또한, ITSN-1의 다운 규제를 닫 다른 TR에게 규제ansport이 부족한 endocytosis를 보상하기 위해 통로. 우리가 적극적으로 흡수 및 수송 골드 알부민과 관련된 일반적인 caveolae (그림 2C)와 융합 막 반지 (그림 2A와 2A1), 다형성 세관 (그림 2B) 및 엔도 확대 나타났습니다. 중요한 발견은 컨트롤에 참조로 ITSN - 초 결핍 마우스 폐 내피 세포에서 caveolae 수의 감소, 표 1. 양이온 성 리포좀 /의 siRNA ITSN 반복적으로 전달 24 일 연장 ITSN - 초 억제는 부분적으로 간 내피 장벽 무결성을 복원하여 생쥐의 폐 부종을 감소시켰다. EM 형태학 연구는 8nm의 금 알부민 추적이 시점에서, 간 혈관 접합을 통과 할 수 없습니다 것을 보여 주었다. 대신, 그들은 접합의 내강 introit의 여과 잔류 물 (그림 3)을 형성했다. 그러나, 혈관 주위 공간이 약간 팽창하고 온화한을 보여 주었다부종, 접합 입자의이 크기에 스며 들지 있지만, 여전히 새는 것을 제안. 또한, 다른 endocytic 경로의 형태 중간체 활성과 높은 숫자에 존재한다. 눈에 띄게, 형태 학적 분석은 컨트롤, 표 1에 비해 금 알부민 입자에 의해 표시 막 반지 / 세관의 수가 ITSN - 초 만성 결핍 마우스 폐 내피에 14 배 증가 지적했다. Caveolae 번호는 부분적으로 컨트롤을 참조하여, 만 17.8 % 감소 복원됩니다. 따라서, 우리의 결과는 양이온 성 리포좀 /의 siRNA ITSN 단지 반복적으로 배송이 생체 내에서 장기간의 단백질 최저의 효과를 연구하기에 적합한 방법입니다 보여줍니다.
그림 1. 오픈 interendothelial 접합을 보여주는 대표적인 전자 현미경 (IEJs)는 일을 표시8 nm의 금 알부민 입자. 화살에 의해 그 길이 roughout 및 포인트 IEJ의 넓은 개방을 나타내는 같은 계획에 서로 가까이 위치하고 3-4 금 알부민 입자로, A1 확대. (- 화살표 A, B) 금 입자는 IEJs의 abluminal 출구와 연결됩니다. 별표)도 caveolae와 pericapillary 공간 개의 팽창의 제한된 수 있습니다. 바 : 200 nm의 (A), 100 nm의 (B, A1).
그림 2. ITSN - 초 표현의 심각한 교란이 다형성 endocytic / transcytotic 중간체를 유도합니다. 대표 EM합니다 8 nm의 금 알부민로드 막 반지의 이미지 (A, A1), 관형 요소 (B, 화살표)과 확대는 엔도 좀 (C, 화살촉), 그리고 caveolae 같은과 관련된형태. 또한 혈관 주위 공간 (PVS)의 심한 팽창과 단백질 성 부종 (A)합니다. 바 : 250 nm의 (A), 200 nm의 (B) 100 nm의 (A1, C).
그림 3. ITSN - 초 표현의 만성적 억제는 부분적으로 IEJ 무결성을 복원합니다. 여과 잔류 IEJ (화살촉)의 내강 introit합니다. PVS의 가벼운 팽창 (*)가 IEJs의 leakiness을 제안한다. Multivesicular 기관 (MVB)는 세포막의 가까이에 8 nm의 금 알부민 입자라는 자신의 내부의 작은 소포 몇 가지가있다. 바 : 100 nm의.
| transcytotic / Endocytic 구조 | 제어 | ITSN - 초 siRNA의 72 시간 | ITSN - 초 siRNA를, 24 D |
| 루멘 *에 열 Caveolae | 106.6 ± 9.5 | 50.46 ± 4.8 | 87.15 ± 5.9 |
| 세포질에 분명히 무료 Caveolae | 173.5 ± 12.0 | 77.41 ± 6.3 | 143.0 ± 9.5 |
| 총 caveolae (내강과 세포질 무료) | 280.1 ± 21.5 | 127.86 ± 11.1 | 230.14 ± 15.4 |
| 이상 endocytic 구조 (확대 엔도) | 2.65 ± .34 | 11.29 ± 2.7 | 14.93 ± 3.8 |
| Caveolae 클러스터 | 3.95 ± 0.4 | 5.64 ± 1.6 | 11.3 ± 2.5 |
| 막 반지 | 1.33 ± .04 | 9.47 ± 2.4 | 12.8 ± 2.8 |
| 세관 | .88 ± .05 | 4.0 ± 1.3 | 18.84 ± 3.4 |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dimethyl Dioctadecyl Ammonium Bromide (DOAB) | Sigma-Aldrich | D2779 | |
| LiposoFast stabilizer (mini-extruder) | Avestin Inc. | LF-STB | |
| Polycarbonate membrane, 19 mm diameter, 50 nm pore | Avestin Inc. | LFM-50 | |
| Cholesterol | Sigma-Aldrich | C-8667 | |
| Chloroform | Mallinckrodt Chemicals | 4432-04 | |
| Hank's balanced salts | Sigma-Aldrich | H1387 | |
| Round-bottom flask | Fisher Scientific | FHB-275-030X | |
| Mouse siRNAITSN - on target | Dharmacon/ThermoScientific | J-046912-11 | |
| Peristaltic pump | Ismatec | REGLO-CDF digital with RHOO pump head | |
| Ventilator | Hugo Sachs Electronik | NA | |
| Barbital | Sigma-Aldrich | B-0500 | |
| Uranyl acetate | EM Sciences | 22400 | |
| Epon812 | EM Sciences | Discontinued by the manufacturer | |
| Propylene oxide | EM Sciences | 20400 | |
| Embedding molds | EM Sciences | 69923-05 | |
| Tannic acid | EM Sciences | 21710 | |
| 8 nm gold-albumin tracer | Prepared in the laboratory as in16 | ||
| Comments | |||
| Equipped with 2 Avestin 1 ml gas-tight syringes (cat. # LF-1) | |||
| Pyrex, 100 ml | |||
| Modified siRNA, in vivo | |||
| Part of IDEX corp. | |||
| D-79232 March, Germany | |||
| Replaced with Embed812, cat. # 14120 | |||
References
- Predescu, S. A., Predescu, D. N., Knezevic, I., Klein, I. K., Malik, A. B. Intersectin-1s regulates the mitochondrial apoptotic pathway in endothelial cells. J. Biol. Chem. 282 (282), 17166-17178 (2007).
- Uddin, S. Cationic lipids used in non-viral gene delivery systems. Biotechnology and Molecular Biology Review. 2 (2), 58-67 (2007).
- Barenholz, Y., et al. Influence of lipid composition on the thermotropic behavior and size distribution of mixed cationic liposomes. J. Colloid Interface Sci. (356), 46-53 (2011).
- Predescu, D. N., Neamu, R., Bardita, C., Wang, M., Predescu, S. A. Impaired caveolae function and upregulation of alternative endocytic pathways induced by experimental modulation of intersectin-1s expression in mouse lung endothelium. Biochem. Res. Int.. (2012), 672705 (2012).
- Higuchi, Y., Kawakami, S., Hashida, M. Strategies for in vivo delivery of siRNAs: recent progress. BioDrugs. 24 (24), 195-205 (2010).
- Caracciolo, G., Amenitsch, H. Cationic liposome/DNA complexes: from structure to interactions with cellular membranes. Eur. Biophys. J. , (2012).
- Barnier Quer, C., Elsharkawy, A., Romeijn, S., Kros, A., Jiskoot, W. Cationic liposomes as adjuvants for influenza hemagglutinin: more than charge alone. Eur. J. Pharm. Biopharm. 81 (81), 294-302 (2012).
- Rai, K., et al. Liposomal delivery of MicroRNA-7-expressing plasmid overcomes epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor-resistance in lung cancer cells. Mol. Cancer Ther. (10), 1720-1727 (2011).
- McLean, J. W., et al. Organ-specific endothelial cell uptake of cationic liposome-DNA complexes in mice. Am. J. Physiol. (273), H387-H404 (1997).
- Soutschek, J., et al. Therapeutic silencing of an endogenous gene by systemic administration of modified siRNAs. Nature. (432), 173-178 (2004).
- Barenholz, Y. Liposomes enhance bioremediation of oil-contaminated soil. J. Liposome Res. (13), 1-8 (2003).
- Zamboni, W. C. Liposomal, nanoparticle, and conjugated formulations of anticancer agents. Clin. Cancer Res. (11), 8230-8234 (2005).
- Newman, M. S., Colbern, G. T., Working, P. K., Engbers, C., Amantea, M. A. Comparative pharmacokinetics, tissue distribution, and therapeutic effectiveness of cisplatin encapsulated in long-circulating, pegylated liposomes (SPI-077) in tumor-bearing mice. Cancer Chemother Pharmacol. (43), 1-7 (1999).
- Martino, S., et al. Efficient siRNA delivery by the cationic liposome DOTAP in human hematopoietic stem cells differentiating into dendritic cells. J. Biomed. Biotechnol. (2009), 410260 (2009).
- Zhang, G., et al. A delivery system targeting bone formation surfaces to facilitate RNAi-based anabolic therapy. Nat. Med. 18 (18), 307-314 (2012).
- Predescu, D., Palade, G. E. Plasmalemmal vesicles represent the large pore system of continuous microvascular endothelium. Am. J. Physiol. (265), H725-H733 (1993).
- Koh, T. W., Verstreken, P., Bellen, H. J. Dap160/intersectin acts as a stabilizing scaffold required for synaptic development and vesicle endocytosis. Neuron. (43), 193-205 (2004).
- Miyawaki-Shimizu, K., et al. Lung Cell Mol. Physiol. (290), L405-L413 (2006).
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