نحن هنا بالتفصيل طريقة للجراثيم الأسنان الثقافة في شرائح الفك السفلي باستخدام المروحية الأنسجة. هذا الأسلوب يسمح بالوصول فريدة من نوعها في الأسنان خلال التنمية، وتوفير فرصة ممتازة للتلاعب والنسب تتبع، لا تتوفر باستخدام أساليب الثقافة التقليدية.
الثقافة ازدراع يسمح بالتالي التلاعب في تطوير الأجهزة في نقاط زمنية محددة وغير وسيلة هامة للعالم الأحياء التنموية. بالنسبة للعديد من الأجهزة فإنه من الصعب الوصول إلى الأنسجة النامية للسماح برصد خلال فيفو السابقين الثقافة. يسمح أسلوب ثقافة شريحة الوصول إلى الأنسجة بحيث الحركات التخلق يمكن اتباعها ويمكن أن تستهدف السكان خلية معينة للتلاعب أو تتبع النسب.
في هذه الورقة نحن تصف طريقة للثقافة شريحة التي كانت ناجحة جدا للثقافة الجراثيم الأسنان في مجموعة من الأنواع. يوفر أسلوب الوصول ممتازة لجراثيم الأسنان، والتي تنمي بمعدل مماثلة لتلك التي لوحظت في الجسم الحي، وتحيط بها الأنسجة الفك الأخرى. وهذا يسمح التفاعلات الأنسجة بين الأسنان والأنسجة المحيطة بها ليتم رصدها. على الرغم من أن هذه الورقة تركز على الجراثيم الأسنان، نفس البروتوكول يمكن تطبيقها لمتابعة تطوير عددمن الأجهزة الأخرى، مثل الغدد اللعابية، والغضروف ميكل والغدد الأنفية، واللسان، والأذن.
لعدد من التجارب من المهم أن تكون قادرة على زراعة الأنسجة فيفو السابقين لمتابعة التنمية. ثقافة تطوير الأنسجة يوفر الوصول في فترات محددة من التنمية ويتيح التلاعب في الجينات من خلال إضافة عوامل في مستنبت، أو على حبات تحميلها، واستخدام ترنسفكأيشن و electroporation 1. بالنسبة للعديد من التجارب من المهم أن تكون قادرا على تصور الأنسجة لأنها تنمو، على سبيل المثال، لمتابعة مصير الخلايا النسب وصفت بأنها الأنسجة يخضع التشكل. هذا يمكن أن يكون مشكلة خاصة بالنسبة للأنسجة التي تنمي في أعماق الجنين، والتي ليست واضحة عندما كتلة من الأنسجة من الجنين هو مثقف. الأسنان هي أمثلة جيدة على ذلك، لأنها تضع ضمن عملية الأنف الفك السفلي، الفك العلوي والأمامي. عندما يتم زرعها في الفك السفلي كله الهياكل السطحية من الأسنان يمكن أن ينظر إليها ولكن التغييرات في مورفولوجية لا يمكن تحليلها بعد باجتزاء الأنسجة الثابتة <sتصل> 2. تكيفنا حية شريحة التقنية الثقافة مما يسمح لنا لمتابعة تطوير جرثومة الأسنان وتوفير سبل الوصول إلى أجزاء مختلفة من الأسنان خلال التنمية. ثقافات تقنية شرائح الجرثومية الأسنان في واجهة الغاز السائل، وذلك باستخدام طريقة تراويل تعديل 3. وكانت هذه الثقافات شريحة مفيدة جدا في التشكل التالية مباشرة من الأسنان، والسماح تتبع نسب مكونات متميزة، مثل عقدة المينا والحليمة السنية وبصيلات 1،4-7. تقنية لا يقتصر على أجنة الفئران وتمت بنجاح استخدمت لثقافة شرائح حية من الخنزير والثعبان الأسنان 8،9 الأنسجة. بالإضافة إلى الاستفادة من القدرة على تصور نمو الأسنان، لديه طريقة شريحة أيضا ميزة أن شرائح رقيقة من الأنسجة وزيادة فرص الحصول على المواد الغذائية من المتوسط والهواء من الحاضنة. هذه النتائج في تحسين نمو جراثيم الأسنان، والتي تتطابق التنمية في الجسم الحي، وتظهر invasأيون الخلايا البطانية في الحليمة 7. في المقابل، جراثيم الأسنان في الفك السفلي كله الثقافات تطوير أبطأ من تلك الموجودة في الجسم الحي ومركز للثقافة في كثير من الأحيان نخرية في الثقافات على المدى الطويل. في ثقافة شريحة والأسنان يتطور داخل شريحة من الفك، وتفاعله مع وضع العظام والأنسجة الأخرى المحيطة يمكن رصدها. في المنهج في آن والمفروم الأنسجة مباشرة بعد تشريح مع عدم وجود الحاجة إلى تضمين في المتوسط 10،11 الدعم، وهناك حاجة لأي نظام لإرفاق الأنسجة لتقطيع كتلة. هذه الطريقة بالتالي موسع وسريع، مما يتيح العديد من الفك السفلي إلى أن مقطوع في جلسة واحدة.
هذا الأسلوب من الثقافة الأسنان لديه ميزة أن الوصول إلى الجرثومية الأسنان ممتازة، مما يتيح تتبع النسب دقيقة والتنسيب من الخرز داخل ظهارة أو اللحمة المتوسطة. وبالتالي، يمكن تعريف المناطق من الأسنان النامية الجرثومية أن تستهدف على وجه التحديد. خلال الثقافة التشكل الم?…
The authors have nothing to disclose.
ويتم تمويل سارة A. Alfaqeeh حسب نوع سعود كلية طب الأسنان، وزارة التعليم العالي، المملكة العربية السعودية.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
Ethanol | VWR | 101077Y | 100% ethanol was diluted in distilled H2O to 70%. |
DMEM F12 | Gibco | 12634-010 | Advanced Dulbecco's Modified Eagle Medium F12 |
GlutaMAX | Gibco | 35050-061 | |
Invitrogen | |||
Penicillin-streptomycin | Sigma | P0781 | |
DiI (Molecular probes) | Vybrant | V-22885 | Cell-labeling solution |
Invitrogen | Cell tracker CM-DiI, C-7000 | ||
DiO (Molecular probes) | Vybrant | V22886 | |
Invitrogen | |||
Geminator 500 | Thomas | Thomas No. 3885A20 | Dry-heat sterilization |
McIlwain tissue chopper | Ted Pella, Inc. | 10180 | Standard table |
Organ culture dish (Center-Well Organ Culture Dish) | Falcon | 353037 | |
Membranes (Cell Culture Inserts, 0.4 μm pore size) | BD Falcon | 353090 | PET track-etched membrane, 6-well format |
Metal grids (Stainless Steel – AISI 304 – Mesh) | Goodfellow | FE228710 | (Fe/Cr18/Ni10) |
AutoFlow Direct Heat CO2 Incubator | Nuaire | NU-5500 | |
Picospritzer III | Intracel Ltd | 051-0500-900 0-100 psi | Single channel picospritzer III |
Glass capillary with filament 1 mm | WPI | TW100F-4 | |
Tungsten wire 0.1 mm | Goodfellow | W005138 | |
Tungsten wire 0.38 mm | Goodfellow | W005155 | |
Aspirator tubes | Sigma | A5177 | Used for mouth aspiration lineage tracers |