過去数年間、新世代内視鏡は、ネズミ大腸炎および結腸直腸腫瘍を評価するための重要な診断研究助剤として浮上している。私たちはここに、マウスにおける炎症と大腸腫瘍の内視鏡的な評価だけでなく、大腸炎および大腸腫瘍の内視鏡的重症度を記録するために小数の識別子を使用して新たなスコアリングシステムのための詳細なプロトコルを提示する。
研究目的のための現代的な内視鏡検査の使用が大幅に胃腸病態の我々の理解を促進してきた。特に、実験的内視鏡検査は、慢性炎症性腸疾患の機構および結腸直腸癌の進行を評価するもののような単一の実験動物で繰り返し評価を必要とする研究のための非常に有用であった。ただし、研究間で使用されている方法は、非常に多様である。少なくとも3の内視鏡スコアリングシステムは、マウス大腸炎のために出版され、結腸直腸腫瘍の評価のためのプロトコルが付随大腸の炎症の存在に対処するために失敗した公開されている。この研究は同時に、炎症や腫瘍の両方の評価を統合し、再現性の内視鏡スコアリングシステムを開発し、検証します。肛門周囲の知見に基づいて、大腸の炎症の程度や重症度の1)評価(、WALの透明性:この新規なスコアリングシステムは、3つの主要コンポーネントがありますL、粘膜出血、および局所性病変)、2)腫瘍病変(グリッドマップとバーグラフ)と、観察された病変の割り当てられたカテゴリでは、小数点単位に基づいて病理学的研究の関連性による臨床例の3)数値的なソートを定量的に記録し、内視鏡の合併症(小数点識別子)。ここに提示された映像や原稿は、近位の内視鏡大腸炎(D-PECSから遠位を区別するためのシステムオプションを指定して、研究者は十分に検証され、再現性の高い内視鏡の方法論を用いて、独自の実験用マウスを獲得できるようにするために、動物実験委員会が承認したプロトコルに従って、調製した)。
マウス内視鏡検査は、十年以上1-3有用な研究ツールとして行われている。いくつかはまた、軟性S状結腸鏡検査を使用していたが、現在までに、マウス内視鏡検査を採用するほとんどの研究は、硬性内視鏡を使用している。マウスの内視鏡検査は、すぐに結果を提供し、腸の正常、炎症の重症度、並びに体重減少、下痢、および組織のような間接的な尺度、(病変が斑状である場合、最適以下である)と比較して、腫瘍進行の程度をより客観的推定、一方大腸の全体的な健康についての洞察を提供しています。安楽死させなければとコロンは、分析1のために収穫されるために、動物を必要とする伝統的な組織学的検査とは対照的に、最も顕著なのは、内視鏡検査は、時間をかけて実験動物モデルを繰り返し評価を可能にする。これらの利点にもかかわらず、マウスの内視鏡技術の使用は普及しておらず、implementatiための標準化されたプロトコルの欠如によって制限される上および病理学的所見のスコア化。適切に実装され、マウスの内視鏡検査は、さらに我々の理解や炎症性腸疾患、大腸炎、および結腸直腸腫瘍を含む複数の慢性胃腸疾患状態の動物モデルの特徴付けを容易にするための大きな可能性を秘めています。
ネズミの内視鏡技術の有用性は、標準化された審査手続の存在と腸の異常のための一貫性のある、非冗長、かつ信頼性のスコアリングシステムを必要とし、その再現性と客観性、にかかって。大腸4-6の内視鏡的評価のためだけでなく、マウスでの大腸腫瘍は4,7,8のための少なくとも3わかりやすいスコアリングシステムが発表されている。しかし、これらの報告されたアプローチやスコアリングシステムは、研究間で容易に比較することはできません。多くの場合、病変の分類のために使用される基準の明確な定義は存在せず、基準が与えられたとき、それらは広く変化。また、大腸腫瘍、単一の測定ツールに同時に発生し、結果にインタラクティブな効果を持つことができる最も一般的な結腸病変の2、両方の評価を統合しないと報告スコアリングシステムは存在しない。最後に、大腸炎のために存在する内視鏡的スコアリングシステムは、多くの場合、限られた差別を伴う炎症のカテゴリーがある( すなわち 。短整数スケール、多くの場合、1〜4の上の狭いスコアリングオプション)が正しく、疾患の進行のシナリオを表しており、パラメトリック統計解析の使用を可能にする。
本論文では、マウスの大腸炎および結腸腫瘍の重症度を評価し、肛門周囲、直腸、および遠位結腸の解剖学的評価にこの技術を採用するための標準化されたプロトコルを記述するための軟性内視鏡の使用を記載している。私たちは、外傷や画像アーティファクトを最小限に抑えるために、内視鏡検査の際に効果的なトラブルシューティングを説明し、我々は再現性のスコアリングシステムを説明検証公表された臨床パラメータに基づいて。スコアリングシステムは、(特定の診断値との調査結果を強調するために12の炎症、腫瘍のマッピングの可能性等級とプロットオプション、および新規の小数単位系(すなわち、小数の識別子)との差別の高いレベルを使用して、腸の炎症や腫瘍の両方の評価を統合すなわち腫瘍発生、内視鏡検査などの際の合併症)。小数識別子の使用は、さらに下流の分析に関連するデータセットの迅速な追跡を可能にする。最後に、我々は大腸炎および大腸炎関連癌(デキストラン硫酸ナトリウム(DSS)誘発性大腸炎、 クロストリジウム·ディフィシル感染症、及びアゾキシメタン/ DSS誘発結腸癌)の複数のマウスモデルにおいてスコアリングシステムの信頼性と妥当性テストを実行します。
マウスでの内視鏡技術の改良やトラブルシューティングに関するいくつかの考慮事項があります。柔軟な内視鏡検査の使用中に習得する必要がある手順の重要な側面は、アンギュレーションとトルクコントロールの調整で腹部膨満とマウスの呼吸障害を防止するために必要空気量の調整、およびビューコントロールのマイナー技術的な側面を含んで。トルク制御は、腸穿孔の危険性を最小限?…
The authors have nothing to disclose.
彼らの実験動物の内視鏡的評価の間に彼らのコラボレーションのためのサラKossak、ミッチェルGuanzon、宋YeunヤンとLi郭嘉、に感謝します。
Isoflurane, USP | Webster Veterinary | ||
Surgical lubricant | Savage laboratories | surgilube, 0281-0205-45 | |
Phosphate Buffered Saline | Thermo Scientific | SH30256 | |
RNAlater | Ambion | AM7021 | |
Methylene Blue 1% Aqueous Solution | Fisher Science Education | S96393 | |
Flexible digital ureteroscope | Olympus America | URF-V | |
Video system center | Olympus America | VISERA Pro OTV-S7 Pro | |
Xenon light source | Olympus America | VISERA Pro CLV-S40 Pro | |
Video recorder | MediCapture, Inc. | MediCap USB200 | |
Flexible biopsy cup forceps | Olympus America | FBC-3115 | |
Anesthesia machine | Euthanex Corporation | EZ-7000 Classic System |