Summary
على مدى السنوات القليلة الماضية، ظهرت المناظير الجيل الجديد كمساعدات البحوث التشخيصية الهامة لتقييم التهاب القولون وأورام القولون والمستقيم الفئران. نقدم هنا بروتوكول مفصلة لتقييم بالمنظار لأورام القولون والمستقيم والتهاب في الفئران، فضلا عن نظام التهديف الرواية التي تستخدم معرفات العشرية لتوثيق شدة التهاب القولون بالمنظار وأورام القولون والمستقيم.
Abstract
استخدام المناظير الحديثة لأغراض البحث سهلت إلى حد كبير فهمنا لأمراض الجهاز الهضمي. على وجه الخصوص، وكان التنظير التجريبية مفيدة للغاية للدراسات التي تتطلب تقييمات المتكررة في حيوان مختبر واحد، مثل تلك تقييم آليات مرض التهاب الأمعاء المزمن وسرطان القولون والمستقيم من التقدم. ومع ذلك، فإن الأساليب المستخدمة في دراسات تختلف اختلافا كبيرا. وقد تم نشر ما لا يقل عن ثلاثة أنظمة التهديف بالمنظار لالتهاب القولون الفئران ونشرت تفشل بروتوكولات لتقييم أورام القولون والمستقيم لمعالجة وجود التهاب القولون مصاحبة لذلك. تطور هذه الدراسة ويؤكد نظام التهديف بالمنظار استنساخه أن يدمج تقييم كل من الالتهاب والأورام في وقت واحد. هذا النظام رواية التهديف من ثلاثة عناصر رئيسية هي: 1) تقييم مدى وشدة التهاب القولون والمستقيم (استنادا إلى نتائج حول الشرج، والشفافية في ووللتر، المخاطية النزيف، والآفات البؤرية)، 2) تسجيل الكمي للآفات الورم (شبكة الخريطة وشريط الرسم البياني)، و3) الفرز العددية من الحالات السريرية التي صلتها المرضية والبحوث على أساس وحدة عشرية مع الفئات المعينة من الآفات لوحظ و مضاعفات بالمنظار (معرفات عشري). تم إعداد الفيديو ومخطوطة الواردة في هذه الوثيقة، وبعد بروتوكولات وافق IACUC، لتسمح للمحققين ليسجل فئران التجارب الخاصة باستخدام منهجية بالمنظار التحقق جيدا وقابلة للتكرار للغاية، مع خيار نظام للتمييز القاصي من الداني التهاب القولون بالمنظار (D-PECS ).
Introduction
وقد أجريت التنظير الفئران كأداة بحثية مفيدة لأكثر من عقد من الزمان 1-3. حتى الآن، وقد استخدمت معظم الدراسات التي تستخدم الفئران التنظير المناظير جامدة، وعلى الرغم من أن البعض يستخدم أيضا التنظير السيني مرنة. يوفر التنظير الفئران نتائج فورية وتقدير أكثر موضوعية لمدى الحياة الطبيعية في الأمعاء، وشدة الالتهاب، وتطور الورم مقارنة مع التدابير غير المباشرة، مثل فقدان وزن الجسم، والإسهال، والأنسجة (والذي هو دون المستوى الأمثل عندما الآفات غير مكتمل)، في حين تقدم رؤى على الصحة العامة من القولون. وعلى الأخص، يسمح التنظير لتقييم المتكررة من النماذج الحيوانية المختبرية مع مرور الوقت، في مقابل الفحص النسيجي التقليدية التي تتطلب الحيوان إلى أن يتم التخلص وكولون إلى أن تحصد لتحليل 1. على الرغم من هذه المزايا، واستخدام التكنولوجيا بالمنظار الفئران لم تكن على نطاق واسع ومحدودة بسبب عدم وجود بروتوكولات موحدة لimplementatiوعلى التهديف من النتائج المرضية. نفذت بشكل صحيح، التنظير الفئران يحمل وعدا كبيرا لزيادة تسهيل فهمنا وتوصيف النماذج الحيوانية من دول متعددة المزمنة وأمراض الجهاز الهضمي، بما في ذلك الأمراض الالتهابية الأمعاء، والتهاب القولون، وأورام القولون والمستقيم.
فائدة التكنولوجيا بالمنظار الفئران يتوقف على التكاثر والموضوعية، الأمر الذي يتطلب وجود إجراءات الفحص موحدة و، غير زائدة عن الحاجة، وموثوق بها نظام التسجيل المستمر للأمراض المعوية. وقد تم نشر ما لا يقل عن ثلاثة أنظمة التهديف وصفي لتقييم التهاب القولون بالمنظار 4-6، وكذلك لعلاج أورام القولون 4،7،8 في الفئران. ومع ذلك، ذكرت هذه النهج ونظم التهديف ليست قابلة للمقارنة بسهولة عبر الدراسات. في كثير من الحالات، ليس هناك تعريف واضح للمعايير المستخدمة لتصنيف الآفات، وعندما تعطى المعايير، فإنها تختلف على نطاق واسع. علاوة على ذلك،لا توجد نظم التهديف ذكرت أن دمج تقييم كل من التهاب القولون والأورام، وهما من الأمراض القولون الأكثر شيوعا التي يمكن أن تحدث في وقت واحد ويكون لها آثار التفاعلية على النتيجة، إلى أداة قياس واحدة. أخيرا، ونظم التهديف بالمنظار التي لا توجد لالتهاب القولون غالبا ما يكون التهاب فئات محدودة مع التمييز (أي. خيارات ضيقة التهديف على جداول صحيح قصير، وغالبا 1-4) لتمثيل صحيح سيناريوهات تطور المرض وتمكن من استخدام التحليل الإحصائي حدودي.
في هذه الورقة، ونحن تصف استخدام المنظار المرن لتقييم شدة التهاب القولون وأورام القولون الفئران ووصف بروتوكول موحد لتوظيف هذه التكنولوجيا في تقييم التشريحية في المنطقة حول الشرج والمستقيم، والقولون البعيدة. نحن لتوضيح المشاكل الفعال خلال التنظير لتقليل الصدمة والصورة الفنية، ونحن تصف نظام التسجيل استنساخهعلى أساس التحقق من صحة المعلمات السريرية المنشورة. نظام التهديف يدمج تقييم كل من الالتهاب والأورام المعوية باستخدام مستوى عال من التمييز مع 12 درجات ممكن من الالتهاب، ورسم الخرائط الورم وخيارات التخطيط، ونظام الرواية وحدة عشرية (أي معرفات عشري) لتسليط الضوء على نتائج ذات قيمة تشخيصية محددة ( أي تطور الورم، ومضاعفات أثناء التنظير، الخ). استخدام المعرفات العشرية يسمح لتتبع السريع لمجموعات البيانات ذات الصلة لمزيد من التحليل المصب. أخيرا، ونحن أداء اختبار موثوقية وصلاحية نظام التهديف في نماذج الفئران متعددة من التهاب القولون وسرطان القولون المرتبط (ديكستران كبريتات الصوديوم (DSS) التي يسببها التهاب القولون، المطثية العسيرة العدوى، وazoxymethane / التي يسببها سرطان القولون DSS).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. إعداد نظام التنظير
- إعداد نظام التنظير قبل التخدير الفئران، باتباع إرشادات الشركة المصنعة. استخدام ureteroscope الفيديو المصممة للبشر لهذا البروتوكول (الشكل 1). القطر الخارجي للأنبوب الإدراج 9.9 الأب (3.3 ملم)، ونهايته البعيدة 8.5 الأب (2.8 ملم)، والقطر الداخلي للقناة هو 6 أجهزة الاب (1.2 ملم).
- على الرغم من أن استخدام المناظير لم تم ربط انتقال المرض [9]، تعقيم المنظار وعدسة مع 70٪ من الإيثانول 10 أو مع التقنيات المناسبة عند التعامل مع الكائنات الحية الدقيقة التي تشكل بوغ. إعداد مواد التشحيم العقيمة للجراثيم وغير الخدش مسح والأنسجة لتشبع طرف المنظار.
- نعلق حقنة 3 مل كامل من الهواء (أو مناسبة خليط الغاز CO 2) إلى الجزء العلوي من القناة الأجهزة.
- بدوره على السلطة، واقامة توازن اللون الأبيض في الضوء الأبيض العادي،فضلا عن ضيق نطاق التصوير (مبادرة حوض النيل) واسطة، عند الاقتضاء. منذ عام 2001، وقد وفرت مبادرة حوض النيل فوائد التصوير التشخيصي كما تؤكد هياكل الأوعية الدموية غرامة على الأغشية المخاطية، بما في ذلك الآفات التقرحي ورمي، والتي لها الأوعية الدموية غير طبيعية مميزة 11. وضع مبادرة حوض النيل مرشح يحد من الطول الموجي للضوء القبض على 390-445 نانومتر و530-550 نانومتر، الذي يسلط الضوء على الهياكل مع الهيموغلوبين.
- طباعة النموذج التهديف التقييم (الشكل 2) لتسجيل النتائج الخاصة بك. تصبح مألوفة مع توقع الصور العادية ومبادرة حوض النيل (الشكل 3A) وتعريف ودرجات كل معيار قبل الامتحان (انظر القسم 6.1).
- إعداد الحل القائم على تلوين الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) لchromoendoscopy، إذا رغبت في ذلك. في chromoendoscopy، يتم تنفيذ امتحان باستخدام صبغة على العكس من متوسطة إلى تسليط الضوء على التغيرات المخاطية. استخدام الميثيلين الأزرق (0.1-1٪) واللون القرمزي النيلي (0.1٪) حلول (الشكل 3B). مذكرةأن الميثيلين الأزرق هو عامل الأكسدة والاختزال التي يمكن أن تنتج الجذور المؤكسدة أو غير مباشرة عبر ربط من مخلفات الأحماض الأمينية، وتدهور DNA 12، والتي يمكن أن تتداخل مع تحليل العينة.
2. التخدير العام للماوس
- اختيار مخدر وكيل وإدارة الطريق. استشارة طبيب بيطري من منشأة الموارد الحيوانية أو المؤسسي جنة رعاية الحيوان واستخدام (IACUC) بشأن التداخل المحتمل من الأدوية مع نظام المناعة، وأهداف البحث. بعض الأدوية قد تؤثر على البيانات الشخصية خلوى في التعبير الحيوانات، بما فيها القوارض 13. استخدام ثلاثي بروم إيثانول عن طريق الحقن لإجراءات المحطة أو isoflurane والتنظير للبقاء على قيد الحياة، جنبا إلى جنب مع الضوابط المناسبة.
- لتحريض وإدارة 4-5٪ من 100٪ في isoflurane والأكسجين بمعدل 0.2-0.5 لتر / دقيقة، واستخدام 0.5-2٪ للصيانة. هذا البروتوكول ليس مناسبا لجميع الحيوانات. استشر الطبيب البيطري منشأةللحصول على التعليمات المناسبة والتدريب. تلتزم التوصيات IACUC ذات الصلة لتحقيق أعلى معايير الرفق بالحيوان. تأكد من أن الماوس إذا تخدير كامل.
- 'الشريط' الماوس تخدير إلى جدول السطح الظهري في دعم أو موقف بطني باستخدام شريط لاصق المختبر. حذار من التوجه التشريحية على الشاشة المنظار الخاص بك. تأمين الحدود القصوى في الدنيا والذيل. ويمكن أيضا أن توضع عصابة من الشريط على صدره لمنع الحركة بعيدا عن جهاز التنفس الصناعي، ولكن تجنب تقييد الحركات التنفسية الصدري.
3. مفصلة بالمنظار فحص
- البحث عن الآفات حول الشرج قبل إدخال المنظار في المستقيم، ثم دفع منظار من خلال فتحة الشرج.
- معطف المنظار مع زيوت التشحيم الجراحية المعقمة. تأكد من عدم معطف سطح CCD (جهاز تهمة جانب) أجهزة الاستشعار.
- إدراج المنظار وبدء التسجيل. أشرطة الفيديو المسجلة هي مفيدة لمتقييم eticulous من التنظير إذا لزم الأمر بعد الفحص. حاول تنفيذ التنظير في طول أقل قدر ممكن من الوقت لتقليل تهيج الأمعاء / المخاطية.
- تطبيق الهواء باستخدام حقنة لتعيين ببطء بعيدا جدران الامعاء. اعتمادا على حجم الماوس، استخدم 1-2 مل من الهواء. تجنب الإفراط في نفخ الهواء، بل قد يسبب ضيق في التنفس والموت من الفأرة تخدير.
- دفع المنظار إلى الأمام كما كنت تمهيد الطريق مع الهواء أو دوران لطيف من النطاق. لا تقدم المنظار إذا كنت لا أرى لمعة الأمعاء. الثقوب أو الدموع المستقيم / القولون يمكن أن تحدث في هذه المرحلة، وخاصة في صغار الفئران (<8-10 أسابيع من العمر). التقاط الصور عند الضرورة.
- كما سلف نطاق، وتقييم ما إذا كان هناك نزيف عفوية (كما هو موضح طبيعيا المخاطية نزيف غير المرتبطة التنظير الصدمة). ويمكن ملاحظة نزيف عفوية كما يدخل المنظار المستقيم والقولون.
- كماsess شفافية جدار القولون. يتم تعريف الشفافية والقدرة على تصور الأوعية الدموية جماعية في القولون والتي من الأحشاء الأخرى المحيطة (الشكل 4). اقتراح لطيف من نطاق (الظهر إلى الأمام، في اتجاه عقارب الساعة، عكس عقارب الساعة) سوف يساعد تحديد ما إذا كان يمكن رؤية الأوعية الدموية في سياق الأحشاء الأخرى. ويمكن أيضا أن ينظر الأنسجة الدهنية المساريقي. ملاحظة إذا كان المستقيم داخل تجويف الحوض يبدو أقل شفافية من جدار القولون في تجويف البطن.
- فحص لتحديد نوع وعدد من الآفات البؤرية (المناطق ذمي، تقرحات، والقرحة، ورمي الجماهير). سيسجل هذا في شكل التهديف باستخدام النتيجة التهاب القولون ومعرفات العشرية التي تم وضعها.
- مرة واحدة يتم الوصول إلى المنطقة التي تنثني نحو caudally القولون في القولون الداني، سحب المنظار ببطء والبحث عن وجود اتصال النزيف (والذي يحدث نتيجة لتفتيت المخاطية بعدالمنظار متقدمة أو إزالتها). فإنه ليس من الضروري أن تتخلص من سطح القولون عمدا. الغشاء المخاطي القولون والمستقيم صحية لا تنزف بعد الفحص بالمنظار الصحيح.
4. خزعة
- عندما تكون هناك حاجة الخزعات، إدراج ملقط الخزعة من خلال قناة مخصصة لأجهزة المنظار. رصد النهوض ملقط على الشاشة المنظار لمنع انثقاب الأمعاء.
- فتح أكواب خزعة من ملقط لحوالي 60-80 درجة زاوية كوب إلى كوب، وتوجيههم إلى منطقة الفائدة. ملقط أو ضغط مفرط قد فتحت فهم طبقات اضافية من الأنسجة المعوية، مما يؤدي الى ثقب الناجم عن خزعة من جدران الأمعاء شفافة صحية. في حالة حدوث ثقب، الموت ببطء الحيوان أثناء التخدير التالية توصيات IACUC الخاص بك. الثقوب يؤدي إلى التهاب الصفاق endotoxemia و.
- إغلاق أكواب خزعة، وتسحبهم مع الحفاظ إغلاق ملقط.
- ريمولقد العينة من ملقط من قبل بيغ الأنسجة مع الحل الذي هو لطيف إلى الأنسجة وملقط. الحمض النووي الريبي في وقت لاحق وبرنامج تلفزيوني وحلول العمل المشترك، وإذا لزم الأمر، استخدام إبرة لطرد العينة. تجنب تآكل أكواب forcep أو حواف القطع.
5. التعافي من التخدير
- عند الانتهاء من الفحص، وتوفير بيئة دافئة لالماوس حتى يتعافى. استخدام إما الضوء الكهربائي، أو وسادة دافئة وضعت في 37 درجة مئوية. تجنب ارتفاع درجة الحرارة؛ توسع الأوعية المحيطية يهدد الانتعاش الحيوان. رصد الماوس عن كثب حتى الشفاء التام.
6. نظام متكامل بالمنظار التهديف من القولون والمستقيم الصحة مع عشري معرفات
- استخدام النموذج التهديف (الشكل 2) وتعريفات المعلمة أدناه (التقييم بالمنظار الفئران التهاب القولون والمستقيم وأورام باستخدام نظام عشري المرجحة-التهديف: معلمة التعاريف، والبروتوكول) لأمثلة واختياري "نظام القاصي-الدانية بالمنظار التهاب القولون سجل '(D-PECS) كمبادئ توجيهية لتقييم nonbiased وحفظ السجلات التفصيلية.
- تسجيل المعلمات الأربعة من التهاب القولون والمستقيم وصفها على شكل نظام التسجيل (الشكل 2). تقييم بدقة المنطقة حول الشرج، والشفافية في الأمعاء، ونوع من النزيف المعوي (إذا كان موجودا)، وجود وكمية من الآفات البؤرية (التآكل، التقرحي، و / أو ورمي).
- عند تقييم أورام لأغراض البحث، ودراسة كمية، والموقع، والحجم، ووصفها باستخدام خريطة القولون وشريط الرسم البياني على شكل التهديف. فإن المبلغ العددية من عشرات حصل عليها وعدد من الآفات (عند الاقتضاء) تحديد التهاب القولون الخلفية، النوع الأكثر الغالبة من الآفة، وعدد من الآفات.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تم إعداد البروتوكول والصور المعروضة في هذه الدراسة مع المنظار أوليمبوس URF-V مرنة و14 مبادرة حوض النيل 11،15. تم حفظ الصور في الفيديو MPEG-2 تنسيق والصور في JPG، TIF، PNG، أو تنسيق DICOM مع أقصى 1،280 خ 1،024 بكسل، فلاش USB قابلة للتحويل إلى ذكريات المحمولة القياسية. مبادرة حوض النيل من شأنه أن يعزز النقيض البصرية من الأنسجة التي تحتوي على الهيموغلوبين. الضوء الطبيعي ومبادرة حوض النيل التصوير هي الملامح الرئيسية لتوضيح التشريح الطبيعي من الغشاء المخاطي القولون والمستقيم والاختلافات بين الأوعية الدموية العادية وغير العادية خلال تقرح والتنمية الورم (أرقام 3A و6A). الصور مع الميثيلين الأزرق كما النقيض المتوسطة خلال chromoendoscopy تظهر فوائدها عن قرب صور، وكشف عن ظهور الجوي العادي العسل من الخبايا القولون (انظر قرب في الشكل 3B).
حتى الآن، لقد أجريت أكثر من 500 التنظير الفئران فولو فوتبال شيالجناح هذا البروتوكول، مع حوالي 10٪ تمثل الفحص المتكرر. عموما، يتطلب الإجراء 10-15 دقيقة لكي يكتمل، موزعة بالتساوي بين إدارة التخدير، والتنظير، والتعافي من التخدير. الفحص يغطي من فتحة الشرج إلى الثنية الطحال من القولون البعيدة. كما أجرينا بنجاح الفحوص بعد الوفاة بالمنظار للقولون الداني، الأعور والدقاق في بعض الحالات، وبعد تشريح بعد الوفاة من الأنسجة إلى الأنسجة مباشرة قبل الحصاد لعلم الأنسجة (الشكل 6B). في حالة واحدة، كما لاحظنا وأكد يشتبه تمدد المعدة في الماوس المتضررة مع تضيق الإثنى عشر الشديد والانحشار بسبب التصاقات في الأمعاء. ولوحظ الصورة غير طبيعية transmurally من الجانب الأكثر الجمجمة من القولون ملتهبة البعيدة أقل ما يقال؛ أظهر الفحص بعد الوفاة كان جنبا إلى جنب المعدة منتفخة إلى القولون.
وقد وضعنا ق المرجحة عشرية صحيحة وموثوقةنظام الحفارات لتحسين تطبيق موحدة من التنظير الفئران عبر الدراسات البحثية المنشورة. تم تسجيل ثلاثة أنظمة المستخدمة سابقا وخدم كأساس لتطوير دينا المرجحة عشري النظام 4-6. على الرغم من أن هذه الأنظمة تسمح لتصنيف مختلف المعايير ومستويات شدة الآفة، فإنها تفتقر تعريفات المعايير المناسبة، والبعض منها يصعب تقييم من الصور بالمنظار. في بعض الحالات، وشملت المعلمات غامضة في أنظمة التهديف لها أهمية للفحص بالمنظار مشكوك في الفئران. يتم عرض ملخص من أحد عشر معلمات نشرت 4-6 ومزاياها بالمنظار، والقيود، وأهميتها الفسيولوجية في الجدول 1.
لأنه سيتم استخدام نظام التنظير القولون التهديف الفئران المقترحة لأغراض البحث، وفائدتها لأداء الاستدلال الإحصائي الأساسية. للتأكد من أن نظام التسجيل زيارتهاصحة بناء عالية، ونحن أول من طور إطار مفاهيمي لتحديد المعايير ذات الصلة، تجميع هذه المعلمات إلى معايير أقل (ن = 3)، والمقررة تخاطط؛ تسامت والارتباط مع وجود فعلي من الالتهاب والشفاء (الشكل 7). المقبل، واضاف نحن استنتاجات حول الشرج باستخدام أعداد صحيحة منفصلة لتمثيل مستويات ترتيبي من الشدة، ودمج مفهوم الاستقراء الورم والتطوير باستخدام معرفات العشرية. بالإضافة إلى ذلك، واضاف نحن 'القيود' كمعلمة أخرى لم يسبق بحثها / ذكرت في التنظير المعوية الفئران. عشرات إخراج الناتج إنتاج صلاحية عالية ومناسبة للتحليل الإحصائي حدودي. أخيرا، واضاف نحن ورسم الخرائط وقدرات التآمر العددية لرصد مفصلة المرض.
لتقييم صحة متقاربة من نظام التقييم لدينا، وتمت مقارنة الدرجات التي تم الحصول عليها من المعلمات الثلاث التي نشرت لمدة 36 فحصا بالمنظار للقولون الماوس ضد عشرات obtaiنيد من قبل الشخص نفسه عمياء باستخدام ثلاثة أنظمة التهديف السابقة 4-6. وأظهرت مقارنة كل علاقة إيجابية جيدة، مشيرا إلى صلاحية متقاربة عالية لدينا نظام متكامل التهديف (بيرسون ع <0.0001؛ الشكل 8). يدعم تحليل إدراج النتائج حول الشرج كجزء من المعايير السريرية لتقييم صحة القولون والمستقيم، كما كان حاضرا عادة في حالات التهاب القولون الحاد وتحسين تشتت البيانات (P = 0.0351 بين النتيجة 0 و 1، P = 0.0086 بين النتيجة 2 و 3، الشكل 8B). عندما تمت مقارنة نظام التهديف المتكاملة (بعد إضافة نتائج حول الشرج) إلى غيرها من النظم المتاحة، كان من الواضح أن 2 من 3 أنظمة أخرى لديها الحد استنتاجي كبيرة بسبب تجميع الحالات إلى واحدة من الفئات الأربع صحيح ممكن، كبرى إشارة إلى الأسلوب الخطأ في التصنيف التحيز (الشكل 8C) 16. مع معرفات العشرية، لدينا نظام رواية التهديف لديه أدنى احتمال clustering نقاط البيانات في فئات صحيح.
الشكل 1. الصكوك. المنظار المرن، ونظام مراقبة الفيديو، مصدر الضوء، ومسجل فيديو، واستنشاق آلة التخدير المستخدمة في هذه الدراسة. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
الشكل 2. شكل نظام التسجيل العشرية لتقييم أورام القولون والقولون والمستقيم لدى الفئران. النظام لديه مكون من أربعة التهابات الأساسية المعلمات غير المشارك الخطية والرسومات لرالمعلومات umor، والوحدات العشرية إلى آفات بارزة أو مضاعفات. انظر معايير تفصيلية وأمثلة في القسم التالي (التقييم بالمنظار الفئران التهاب القولون والمستقيم وأورام باستخدام نظام التهديف عشري المرجحة). اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
الرقم 3. الصور المقترنة من الغشاء المخاطي الطبيعي في الوضع العادي ضوء بالمنظار، ووضع مبادرة حوض النيل، ومع chromoendoscopy. إحصار الأوعية الدموية عادة أقل شيوعا في المستقيم. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
FO: محتوى العرض = "5IN" FO: SRC = "/ files/ftp_upload/50843/50843fig4highres.jpg" سرك = "/ files/ftp_upload/50843/50843fig4.jpg" العرض = "500px" />
الشكل 4. التمثيل مستعرضة من الحلقات المعوية لتوضيح مبدأ الشفافية بالمنظار من جدار الأمعاء في الفئران. التصور بالمنظار الأوعية المعوية جدارية والدهون المساريقي، وذلك من الأوعية المساريقي والدهون من الأحشاء صحية مجاورة، هو ممكن من خلال جدار القولون صحية. التهاب وسماكة جدار الأمعاء في الأقسام البريتوني من القولون القاصي يمنع التصور هياكل جماعية وبطريق من الأحشاء الأخرى، حتى لو شرائح المعوية الأخرى يتمتعون بصحة جيدة. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
3/50843fig5highres.jpg "سرك =" / files/ftp_upload/50843/50843fig5.jpg "العرض =" 500px "/>
الرقم 5. استكشاف الأخطاء وإصلاحها. حل انخفاض مستوى الرؤية الناجم عن محتوى الأمعاء والصور الباهتة والحركات تحوي. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
الرقم 6. الصور المقترنة (الضوء العادي مقابل ضيقة النطاق التصوير، ومبادرة حوض النيل) من الغشاء المخاطي القولون والمستقيم المريضة وغيرها من قطاعات الأمعاء القريبة. يساعد مبادرة حوض النيل لتحديد التقرحي والآفات ورمي. بعض القرح تظهر البني مع مبادرة حوض النيل، والبعض الآخر، مع تغطية المواد الفبريني تظهر سميكة والأبيض. الأورام AOM / مفاجآت صيف دبي هي أفضل تتميز مع مبادرة حوض النيل، وخصوصا خلال المراحل المبكرة عندما لا يكونونجاحظ في التجويف. العلامات النجمية (*) تسليط الضوء على قطعة أثرية بالمنظار (تمويج المخاطية) في القولون مليئة PBS، لم يلحظ في جميع الصور الأخرى حيث منتفخة القولون مع الهواء. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
الرقم 7. ارتباط النظرية وزملاء الخطي بين شدة الالتهاب المعوي والقدرة على مختلف المعايير المنشورة نستشف بصريا ودرجة من التهاب القولون (انظر الجدول 1). اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
الرقم 8. مقارنة الأداء بين نظام التسجيل لدينا ونظم التهديف المنشورة سابقا. بيانات من التحليلات أعمى إقران من 36 الماوس التنظير الفيديو. A) مقارنة بين نظام A (5 معلمات) لمعلمات التهابات، باستثناء الآفات حول الشرج (3 معلمات). B) أهمية بما في ذلك النتائج حول الشرج في نظام التهديف؛ الفحص المقدمة حول الشرج باستمرار معلومات إضافية ذات دلالة إحصائية في حالات معتدلة / التهاب القولون الحاد في الفئران C) أداء نظام التهديف بعد بما في ذلك نتائج حول الشرج بالمقارنة مع أنظمة ذكرت سابقا (36 الماوس الفيديو وسجل التنظير مع كل طريقة). نلاحظ أن الأنظمة B و C وجود قيود كبيرة بسبب تجميع الحالات في واحدة من أربع فئات الخاصة مما يؤدي إلى misclassificatالتحيز أيون (نظم B وحالات عنقودية في فئات C nonequivalent). عن طريق إضافة معرفات العشرية، ونحن أيضا خفض فرصة للتجميع في فئات صحيح، في حين يسمح تتبع عشرات العددية الآن مغزى. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
الجدول 1. المعلمات السريرية نشرت كمعايير بالمنظار لتقييم التهاب الأمعاء في الفئران. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
بالمنظار Assessmeالإقليم الشمالي من الفئران التهاب القولون والمستقيم وأورام باستخدام نظام التهديف عشري المرجحة: معلمة التعاريف والبروتوكول
لدينا نظام التهديف بالمنظار المتكاملة لصحة القولون والمستقيم من ثلاثة عناصر رئيسية هي: 1) تقييم مدى وشدة التهاب القولون والمستقيم، مع أربع معلمات و 12 درجات العددية ممكن؛ 2) تسجيل موقع وحجم وعدد الآفات ورمي، و 3 ) وحدات عشرية مع أنواع من الآفات الأولية تعيين أو الغالبة ومضاعفات بالمنظار لتسليط الضوء على نتائج أهمية خاصة للباحث، ويشار إليها هنا "معرفات عشري". يتم تسجيل موقع وحجم الأورام على الخريطة القولون الافتراضي، ويتم تسجيل عدد من الأورام في كل من نسبة نتوء (انسداد) في التجويف على الرسم البياني. توفر هذه المخططات اثنين الورم المعلومات التي يمكن دمجها في ثلاثة أبعاد. الوحدات العشرية لفئات الآفة تتراوح 0،0-0،9. إذا كان الأسطواناتالبر من الآفات لفئة معينة هي المنازل العشرية ذات الصلة والثانية والثالثة يمكن استخدامها للإشارة إلى عدد من الآفات. على سبيل المثال، إذا لوحظ ثلاثة الآفات، مضيفا 0.003 شأنها أن تسمح للباحث أن يعرف أن هناك ثلاث آفات، وإذا كان هناك 12 الآفات، ثم 0.012 ستستخدم. هذا النظام هو تتبع من منفعة خاصة إذا كان متوقعا امتحانات بالمنظار المتكررة. وفيما يلي تعريفات مفصلة للمعايير والدرجات شدة الالتهاب.
A. تقييم infammation القولون والمستقيم مع أربعة المعلمات السريرية - تعريف معايير بالمنظار
1. نتائج حول الشرج: تقييم هذا الجانب قبل بدء الفحص لتفادي الخلط مع نزيف ما بعد التنظير. صحة المنطقة حول الشرج هو وكيل عن الوضع الصحي من القولون، والجلد، وموقف الحيوان بشكل عام، ويتم تضمين كجزء من الفحص بالمنظار لأن بعض الآفات لا يمكن وقhould معها لا يتم فحصها بشكل وثيق مع بالعين المجردة. ممارسة تدابير السلامة البيولوجية حسب الاقتضاء. نلاحظ أن عادات صحية من خلال الاستمالة الفئران قد تؤدي الى ازالة الدم / التصريف، ولكن لن يزيل الآفات الجلدية من المنطقة حول الشرج. سجل:
- العادي. لا دم، والإسهال، والتصدع، النواسير أو التفريغ ملاحظتها.
- كتل من البراز أو الإسهال ملاحظتها.
- جلطات / كتل من إفرازات دموية، البراز فضفاض (الاسهال)، والقيح، أو تقرحات بسيطة لوحظ.
- النسيج الحبيبي أو آفات احظ أن تنطوي معظم الجلد المحيطة بها وتشير إلى أن الحيوان اتسم تهيج أو التهاب في المنطقة حول الشرج؛ هبوط المستقيم.
2. يتم نقل بلطف يعرف بأنه القدرة على تصور الأوعية الدموية أو الأعضاء خارج الجدار من خلال جدار القولون مثل القولون المنظار: الشفافية في القولون. علما بأن المستقيم هو بطبيعة الحال أقل شفافية نظرا لطبقات العضلات ود لأنه في تجويف الحوض حيث يوجد أقل التباين. هذا هو واحد من المعلمات من الناحية الفسيولوجية الأكثر شمولا لأنه يعبر عن حالة التهاب الكلي أو صحة القولون الفئران. لاحظ أنه من الممكن أن يكون القولون غير ملتهبة مع تقرحات مخاطية / قرحة في المراحل المبكرة من العدوى أو آثار سامة على ظهارة. حذار أن حل متساوي التوتر الفسيولوجية ينبغي أن تستخدم لبيغ أثناء التنظير، وحلول ناقص التوتر، مثل المياه وتسبب تغيرات مع تبييض وانكماش الغشاء المخاطي في الفئران إذا كان استخدام لفترات طويلة (انظر العلامات النجمية في الشكل 6).
- العادي. الأوعية الدموية الكبيرة والصغيرة من القولون والأحشاء المحيطة بها هي واضحة للعيان. نقل المنظار قليلا (ذهابا وإيابا، على مدار الساعة / عكس عقارب الساعة). ويمكن أيضا ملاحظة الدهون المساريقي الأبيض أو محتوى المظلم من الأحشاء الأخرى.
- السفن الصغيرة غير مرئية جزئيا ولكن السفن الكبيرة مرئية.
- vesse الصغيرةليرة سورية هي غير مرئية والسفن الكبيرة ليست واضحة. الغشاء المخاطي لا تظهر سميكة.
- سماكة واضحة من جدار الأمعاء و / أو المخاطية ذمة / المعمم. الأوعية الدموية هي غير مرئية. قد تكون قليلة الأوعية منتفخة / الدوالي واضحة في بعض الحالات.
3. نزيف المخاطية: التفريق الاتصال النزيف من نزيف عفوية. إجراءات بالمنظار القياسية روتينية في الفئران صحية لا ينبغي حمل النزيف. إذا كان هناك التهاب، وزيادة الأوعية الدموية وهشاشة المخاطية الأنسجة يمكن أن يؤدي إلى تآكل الغشاء المخاطي والنزيف. ليست هناك حاجة لتتخلص عمدا القولون لتقييم هذه المعلمة.
- طبيعية، لا توجد النزيف.
- نزيف الاتصال المشتركة. ويعرف هذا النزيف الصدمة عن الاتصال النزيف، بل ينبغي أن يحكم إلا بعد سحب المنظار.
- لا ينطبق. لم يتم تعيين عمدا لإجبار الفاحص للبت في الناطور(ه) من النزيف.
- النزيف العفوي، الذي يعرف بأنه من نزيف غير مؤلمة وتحدث بصورة طبيعية ويتم الاحتفال به يدخل المنظار في القولون. في بعض الأحيان، نفخ الهواء يدفع النزيف العفوي خلال التهاب القولون الحاد.
4. الآفات البؤرية: لاستيعاب غير مكتمل، والطبيعة لا يمكن التنبؤ بها من أمراض القولون والمستقيم، ويسمح هذا النظام التهديف متكاملة الدرجات لوجود الآفات البؤرية (ومعظمهم من التقرحي في الطبيعة) من شدة الالتهاب. منذ القولون هو، جزء أنبوبي مستقيم قصيرة في الفئران، واعتبر أنه لا لزوم لها لوصف موقع الآفات. بدلا من ذلك، يتم تسجيل عدد من الآفات وتضاف إلى مجموع الدرجات باستخدام نظام المعرفات العشرية. ومع ذلك، إذا كان هناك حاجة التركيز على مكان وجود الآفات، لدينا خيار يسمى 'القاصي-الدانية بالمنظار التهاب القولون نظام التهديف "(D-PECS) الموضحة أدناه في الفرع واو التطبيقات يمكن أن تكون مبسطة وعلاوة على ذلكالمستمدة من نظامنا التهديف العشرية. لأن نادرا ما توجد الأورام دون إحداث شكل من أشكال التهاب في المنطقة القولون والمستقيم لدى الفئران، أدرجنا الأورام في قسم معرفات العشرية للسماح فريد دراسة الأورام في سياق صحة الأمعاء (انظر أدناه).
- طبيعية، لا توجد الآفات البؤرية.
- لاحظ مناطق محددة جيدا من الارتفاع شقة صغيرة بواسطة الغشاء المخاطي الطبيعي تغطيتها. هذا هو لمعالجة المناطق المحلية أو ذمي المجالات المحتملة للتسلل خلية / الانتشار، كما وجدت في التهاب القولون خفيفة.
- محمر أو لاحظ المناطق التآكل.
- تقرح أو قيود. ويتم تحديد القرحة بواسطة احمرار وتشوه (حواف غير منتظمة مع الأدلة من الأوعية الدموية غير طبيعية) بسبب ذمي أو متليفة إصلاح الجرح. مبادرة حوض النيل التنظير مفيد للتمييز الكشف أو المراقبة من تقرحات. يتم التعرف على القيود كمناطق ضيقة بشكل غير طبيعي، أو دائرية غير منتظمة وثابتة في الشكل، والتي لا ينكمش أو توسيع بحكمpected. غالبا ما تنطوي على قيود مجالات الخبايا المخاطية غير طبيعية، أو الزغب في الدقاق. في حالة المناظير المرنة (القطر الخارجي = 3.3 ملم) عدم الحرص على المضي قدما في نطاق أكثر المناطق القريبة من القولون ارتبط باستمرار مع القيود غير طبيعية التحقق بعد الوفاة.
B. المخططات ورم لتسجيل الموقع والحجم وعدد
1. خريطة القولون الظاهري: هذه الخريطة هي صورة المنظور الظاهري من القولون والمستقيم البعيدة التي يتم إجراؤها عن طريق قطع الجزء العلوي من التجويف (0 درجة) والمتداول بها. يتم تعيين العلوي والسفلي من الرسم البياني القريبة من القولون (الثنية)، وفتحة الشرج، على التوالي. خط الوسط (180 درجة) إلى الجزء السفلي من التجويف (الجانب البطنية من الحيوان)، وشطر اليمين واليسار من أنصاف تشير الحق والجدار الأيسر من التجويف. خريطة يمكن استخدامها لوصف موقع وحجم الأفقي للأورام، فضلاكما تقرحات.
2. أرقام الورم لكل درجة الورم الاحتلال: على الرغم من أن خريطة القولون يقدم معلومات ثنائية الأبعاد فقط، إلى أي مدى تنمو أورام في تجويف الأمعاء هو سمة هامة من الأورام، حيث يمكن أن يسبب نتوء في الأمعاء تضيق أو انسداد. لالتقاط هذه المعلومات، واضاف نحن على الرسم البياني للتسجيل في المئة نتوء في التجويف الذي يوثق عدد من الأورام في كل مجموعة نسبة، مما يسمح للمنظور ثلاثي الأبعاد لتقييم مدى أورام القولون.
معرفات C. عشري لجعل عشرات العددية ذات مغزى وسريعة الحالات ذات الصلة
يستخدم نظام تسجيل النقاط لدينا نظام المعرف العشري رواية لتسجيل وجود آفات أو مضاعفات ذات الصلة. هذه المعرفات هي لأغراض وصفية وتهدف إلى تسهيل تفسير العددية درجة والمسار السريع حالات الفائدة بالمنظار. ومع ذلك، فإنها تعمل أيضا على عدديا الوزن السائد أنواع من الآفات، والسماح للجيل مجموعات البيانات قابلة للاحصاءات حدودي. عند استخدام نموذج التهديف المتقدمة، بمناسبة الآفات حسب الاقتضاء، واختيار معرف عشرية واحدة لتضاف إلى النتيجة التهابات.
- أية نتائج خاصة.
- الناسور حول الشرج، أو التهاب حول الشرج المفرطة، هبوط المستقيم.
- آفات التآكل في المقام الأول بمشاركة الجدار طفيفة.
- الآفات التقرحي في الغالب، وبعض مغطاة الليفين، والنزيف، أو كبيرة ذات أشكال غير منتظمة بسبب تلاحم قرح صغيرة (عدد القرحة يمكن تسجيلها كما 0.301 للورم واحد، 0.302 لمدة الأورام، 0.311 لأحد عشر الأورام، وغيرها).
- تضيق الأمعاء (اختياري بسبب تضيق هو اختلاط التهابات حادة في القولون، إضافة 2 نقطة لمجموع نقاط التهابات).
- لوحة واضحة المعالم (سميك / الأنسجة غير الشفافة داخل جدار الأمعاء؛ مثل & #160؛ أدنى مستوياته في ارتفاع الورم شقة). يمكن تسجيل عدد لويحات كما هو موضح للآفات (أي 0.401، 0.402، 0.411 ...، الخ). قد تظهر كسطح للتوسيع غير المسطحة التي قد تبدو لنتأ تصل إلى حوالي 5-10٪ الذي يعدل مظهر كفافي من لمعة الأمعاء.
- جاحظ الشامل أو رمي الآفة. يمكن تسجيل عدد من الجماهير كما هو موضح للآفات (أي 0.601، 0.602، 0.611 ...، الخ). فهي انتفاخ واضح، ولكن قد تظهر مسطحة ولكن جاحظ> 15٪ من محيط منتفخة من لمعة الأمعاء.
- بفعل المسيل للدموع / انثقاب أثناء التنظير.
- موت الحيوان خلال التنظير.
- الأخرى: _____________ (التهاب القولون بالمنظار الداني على سبيل المثال شديدة، انظر القاصي-الدانية بالمنظار التهاب القولون نظام تسجيل النقاط أدناه).
D. الأمثلة والتطبيقات
نظام التنظير التهديف الفئران المقدمة في هذه الورقة هو قتصميم pecifically لدمج جمع وتحليل البيانات عن التهاب القولون وأورام القولون والمستقيم. مع الاحترام للأورام، فإن البيانات يمكن تحليلها باستخدام الأساليب الإحصائية متعددة، بما في ذلك منطقة تحت منحنى، الوسيط، واسطة، أو تحليل المكون الرئيسي. على المستوى الفردي، يمكن للنظام التهديف يساعد الباحثين في مراقبة صحة القولون ماوس واحدة مع مرور الوقت. بعد جمع النقاط الفرعية للالتهابات وإلحاق معرف العشرية المناسبة لنوع وعدد من الآفات عند الاقتضاء، والدرجة الكلية تسمح للباحثين لقياس عدديا مدى التهاب القولون، النوع الأكثر الغالبة من الآفة، وعدد من الآفات. على سبيل المثال، على درجة من 12.609 يشير إلى أن هذا الفأر لديه التهاب القولون الحاد وتسعة جاحظ الجماهير ورمي، وسوف ماوس صحية مع المنطقة حول الشرج طبيعية والغشاء المخاطي القولون والمستقيم الذي مثقبة أثناء التنظير يكون على درجة من مجموع 0.7. سيقوم النظام العشري المعرفتسمح للباحثين لفهرسة والبحث بسهولة مستودعات البيانات الكبيرة من الفئران وسجل. على سبيل المثال، يمكن للباحث تحديد معايير البحث لتحديد جميع الدرجات التي تنتهي ب "0.6"، واسترداد جميع الحالات التي لديها أورام جاحظ. ويوضح المزيد من الأمثلة في أرقام التكميلية S1-S3.
E. القاصي الداني-بالمنظار نظام التسجيل التهاب القولون (D-PECS)
هذا هو التعديل اختياري لدينا نظام عشري معرف هدفا لتمييز الحالات الشديدة مع / واسعة التهاب القولون الداني. لأن تظهر علامات التهاب القولون بالمنظار للأورام القولون والمستقيم وعلى الفئران لتطوير باستمرار في قطاعات البعيدة من القولون فإننا نوصي بما يلي:
- ليسجل القولون التالية معايير وصفها، مع إيلاء اهتمام خاص لالقاصي ثلثي القولون وتجاهل الجزء الداني إذا كان اصحاء. هذا تحاشي الارتباك ويزيد من قوة تمييزية من التنظير إلى مختلفاالحيوانات tiate مع درجات مختلفة من التهاب القولون واسعة النطاق.
- إذا لاحظت تغيرات التهابية أو ورم في الثلث الداني، ونحن نوصي لإضافة نقطة واحدة لتصبح النتيجة الإجمالية (1.0) وتعيين معرف عشري كما '0 .9 - أخرى "، والتي يمكن أن توصف بأنها التهاب القولون بالمنظار الداني شديدة. رسم النتائج في خريطة الشبكة وشريط المخطط.
- مراقبة الحيوانات التي لديها تشوهات بالمنظار في الثلث القريب من القولون. دفع خاصة بعد الوفاة الانتباه، والمرض قد تكون شديدة بشكل غير عادي أو يمكن أن تتجاوز الثنية الطحال نحو القولون الداني.
- إذا وأعقب هذه التوصية، وتسجيل هذا النهج في 'قسم الملاحظات "من استمارة التقييم، واتبع هذا الاتجاه عبر التجارب. يرجى ذكر في المنشور النهائي الذي أجري التقييم التالية لدينا "نظام بالمنظار القاصي الداني، التهاب القولون التهديف 'أو D-PECS، والتي تتراوح 0-13،9. لاحظ أن هذا التعديل ليس له ق تأثير tatistical على نظام التسجيل لدينا إذا ما استخدمت في الحيوانات دون اسعة / التهاب القولون الداني شديدة.
أرقام التكميلي.
الرقم S1. مثال على تقييم بالمنظار لأورام القولون والمستقيم مع الماوس. تم علاج الحيوانات مع AOM ومفاجآت صيف دبي التنظير مسبق. أ) صورة الممثل في الوضع العادي وحوض النيل، على التوالي. B) شكل التهديف مليئة النتائج بالمنظار. لاحظ أنه على الرغم من أن هناك اثنين من النتائج ذات الصلة، واختار الباحث لتعيين معرف العشرية 0.6 على أساس شدة السريرية وأهداف البحث. ويمكن إجراء مجموعة متنوعة من التحليل الإحصائي حدودي مع البيانات المسجلة في 'خريطة الأورام / القرح' و 'سجل نتوءات الورم الرسوم البيانية. iles/ftp_upload/50843/50843figs1highres.jpg "الهدف =" _blank "> اضغط هنا لمشاهدة صورة أكبر.
الرقم S2. مثال على الماوس مع تضيق القولون ومضاعفات بالمنظار. لاحظ تضيق تجويف الأمعاء، وأنه كان المستحث على nonperforating، المخاطية المسيل للدموع خلال التنظير فقط القاصي إلى موقع تضيق. تضييق والوهن من القولون ملتهبة قد يؤدي في البكاء المخاطية. كان الحيوان تحت التخدير العام. لاحظ أن نظام التسجيل وقد سمح لنا لمراقبة والحد من المضاعفات الإجرائية. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
43/FigureS3.jpg "العرض =" 500px "/>
الرقم S3. مثال على مدار الساعة من الالتهاب والتهديف بالمنظار في الماوس المعالجة مفاجآت صيف دبي. لاحظ أن الأرقام يمكن أن تكون واضحة بذاتها وتشير إلى أن التهاب القولون تقدم (1-5 و 8)، والتي وضعتها تقرحات يوم 8 (عشري 0.2 ) وقرحة بعد يوم 11 (عشري 0.3). اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
هناك عدة اعتبارات بشأن تعديل واستكشاف الأخطاء وإصلاحها للتقنية بالمنظار في الفئران. وتشمل الجوانب الهامة من الإجراء التي تحتاج إلى أن يتقن خلال استخدام المناظير المرنة تعديل حجم الهواء اللازمة لمنع انتفاخ البطن والجهاز التنفسي وسطا من الفأرة، والجوانب الفنية الطفيفة من السيطرة الرأي مع تنسيق التزوي وعزم دوران الضوابط . السيطرة عزم الدوران المهم للحد من خطر انثقاب الأمعاء. عند التعامل معها بشكل صحيح، يصبح التنظير مرنة الفئران لذلك، الإجراء السريع آمنة جدا التي تسمح التصور مباشرة وأخذ عينات الخزعة من المناطق المعوية التي تهم البحوث.
لحل الرأي عوائق بسبب البراز (الشكل 5)، من المهم أن نفهم أن الكريات البراز وعادة ما تكون لوحظ حتى بعد الصيام أو استخدام المسهلات. عندما تكون موجودة، البراز يمكن نقلها بسهولة قريب مع الإضافية الهواء لطيفufflation. في حوالي 11٪ من الحالات، فإنه من الضروري أيضا استخدام 1 مل من برنامج تلفزيوني حقنة شرجية. قبل إجراء حقنة شرجية، توخي الحذر عند دراسة الحيوانات التي يبدو أن لديها انتفاخ في البطن أو التي هي حامل. لحركات تحوي من المهم أن ننتظر بضع ثوان حتى تمر موجة تحوي منذ نفخ الهواء لا يتوقف التمعج.
حتى الآن، معظم أنظمة تقييم بالمنظار المستخدمة لتقييم مرض معوي الفئران هي إما محددة لالتهاب القولون أو سرطان. نظرا إلى أن هذين الشرطين غالبا ما تحدث بصورة متزامنة ويمكن أن تتفاعل مع بعضها البعض، ونظام التهديف موحدة تأخذ في الاعتبار أن كلا من الالتهاب وتشكيل الورم يسهل إلى حد كبير التواصل بين الانضباط، وبالتالي تعزيز قابليتها للاستخدام المعلومات المكتسبة خلال البحوث الجهاز الهضمي من قبل الباحثين السرطان، والعكس بالعكس. لأن نادرا ما توجد الأورام دون إحداث شكل من أشكال التغيير التهابات في منطقة القولون والمستقيم طن الفئران، أدرجنا الأورام في قسم معرفات العشرية من نظام التسجيل لدينا للسماح فريد دراسة الأورام في سياق صحة الأمعاء. لتعزيز صحة وموثوقية النظام التهديف وتسهيل استخدامه في تجارب طويلة الأجل أو التجارب السريرية، ونحن أيضا بتطوير نموذج تقرير موحد لاستخدام جنبا إلى جنب مع نظام التسجيل (الشكل 2)، الذي يخزن بشكل منهجي عناصر البيانات المطلوبة ل حساب عشرات الفئران التهاب الأمعاء، استنادا إلى تعاريف دقيقة لكل معايير التصنيف.
توافر السابقة من عدة أنظمة التنظير التهديف الفئران صلاحية محدودة يعيق تفسير النتائج عبر الدراسات. للحد من الارتباك التي يمر بها العاملين في المختبرات في البت التي نشرت طريقة الاستعمال، فإننا نوصي القيام بالمنظار باستخدام معايير التقييم التي يمكن استنتاجها من الصور ثنائية الأبعاد (مثل تجنب المعايير ثار تشير إلى نسيج أو الاتساق - من البراز؛ ملاحظة أن بعض الفئران الخالية من الجراثيم بما في ذلك قد يكون البراز اللين)، والتي ليست المشارك الخطية (أي أن يتم من الناحية الفسيولوجية وزمانيا يقودها نفس السياق التهابات) لأن علامات الكاردينال الالتهاب ومتتابعة بسبب ترتيب زمني الأحداث التهابات، نوصي المعايير التالية: 1) الشفافية المعوية، وصف لأول مرة من قبل بيكر وآخرون 4، كانعكاس لسمك الجدار، 2) النزيف، كمؤشر على الغشاء المخاطي وسلامة الأوعية الدموية. ؛ 3) نتائج حول الشرج، كمؤشر على سلامة القولون وتهيج في الجلد أو الاستعداد لالتهاب المفرطة، و4) الآفات البؤرية، لدرجة شدة الآفات الالتهابية (التي هي في المقام الأول في الفئران التقرحي). حتى الآن، لم نر الآفات ورمي في نماذج نموذجية من 3٪ التي يسببها DSS الفئران التهاب القولون. نظام التهديف بالمنظار الفئران وصفها في هذه الورقة تقدم لأول مرة، على حد علمناآلية الكمي لتقييم وجود وتحريض الآفات ورمي في سياق التهاب القولون.
للمرة الأولى، ونحن أيضا تسليط الضوء على أهمية أن تشمل القيود كمعلمة خلال التنظير الفئران، لأنها تظهر أن تكون موجودة عادة في النماذج الحيوانية معينة من الالتهابات المعوية، مثل SAMP / تطلب الشركة / التيسير. تمثل القيود (شبه) المناطق كفافي من تحت المخاطية التهاب مزمن، مع فقدان المرونة في الأمعاء بسبب زيادة التليف، والتي يصعب تقييم بالتنظير للمبتدئ. لاحظنا في الفئران التي تعاني من تضيق تعريف بالتنظير، أن هناك المزيد من التهاب في قطاعات التي هي الأقرب إلى تضيق بالمقارنة مع القطاعات البعيدة (والتي يمكن أن تدرس بالتنظير)، من المحتمل بسبب تباطؤ العبور المعوي. لأغراض البحث، فإنه من المستحسن لمتابعة الحيوانات تشريحيا في نهاية التجارب لتوصيف أفضل الالتهابردود matory أن الجناح المناطق تضيق مرشح.
بدون التدريب المناسب والتغذية الراجعة من الخبراء، قد يكون أي نظام التهديف تقلب في أي وقت من الأوقات. من المهم التأكيد على أن إجراءات التدريب بالمنظار اجريت على الفئران وينبغي رصد من قبل المدربين البيطرية من المهنية الطبية لضمان ما يلي: أ) التدريب المناسب من العلماء أو الفنيين الأخرى، والثاني) للتأكد من أن الحيوانات لا تشخص خطأ أو عن غير قصد بجروح خلال الإجراء. استشارة الطبيب البيطري المسؤول عن معالجته للبحوث الحيوان لمشورة الخبراء قبل الشروع في تنفيذ هذا الإجراء لضمان أفضل الممارسات الممكنة والرفق بالحيوان. فإنه من المستحسن لمراقبة روتينية أداء جراحي المناظير المدربين. استخدام الصور لدينا الواردة في هذه الوثيقة والمبادئ التوجيهية، بطريقة عشوائية الترتيب الذي يتم تقييم الحيوانات، وتقييم كل حيوان بطريقة أعمى. الرجوع إلى تعريفات المعلمة ومعايير بروتوكول دوريا وكEEP لهم في متناول اليد خلال التنظير وسجل القسم 6).
باختصار، كفريق واحد من أخصائي أمراض الباطنة الطبية والبيطرية، نقدم بروتوكول موحد ونظام التهديف نصف الكمية لتقييم بالمنظار من نماذج الفئران من التهاب القولون والأورام. وهذه الأدوات البحثية تمكين الباحثين من إجراء التنظير الفئران الروتينية، وسوف تسمح أفراد البحث على جميع المستويات من الخبرة لتوليد التدابير استنساخه وقابلة للمقارنة من التهاب الأمعاء وتشكيل الورم عبر مختبرات وبين التخصصات. قمنا بتطوير نظام لإنتاج عشرات العددية ذات مغزى مع صلاحية عالية، وتوفير قدرات لتتبع سريع لنتائج معينة، التي يمكن أن تكون قابلة للاستخدام الداخلي داخل المختبرات الفردية. نحن أيضا وصف بديل التهديف التمييزية التي تأخذ في الاعتبار الاختلافات في القابلية للمرض الإقليمية داخل القولون (انظر القسم E، ̵6؛ القاصي الداني-بالمنظار نظام التهاب القولون التهديف، اختصار D-PECS). نموذج تقرير البيانات وبعض الشخصيات يمكن أن تستخدم ملصقات الحائط لمساعدة العلماء عديم الخبرة (أرقام 1، 3، 5، 6). التنفيذ الناجح لالتنظير الفئران يتوقف على أن تصبح معتادا على التشريح العادي للالوصل الجلدي المخاطي في فتحة الشرج والمستقيم والقولون، والأحشاء المحيطة بها، كما تمثل الاختلافات التشريحية للخلافات خفية بالمنظار 17.
على الرغم من أن في الوقت الحاضر حتى أصغر، الأكثر مرونة، وأرقى التقنيات بالمنظار لا يمكن أن تصل إلى القولون الداني في الجسم الحي، تتحرك بسرعة التقدم التكنولوجي في مجال كبسولة التنظير والألياف واحد قد تصبح متاحة للفئران في المستقبل القريب. بروتوكول موحد ونظام التهديف بالمنظار المقدمة في هذه الورقة تمثل أدوات قيمة لتصور وتقييم حالة البيئة المعوية الفئران في الحيوانات الحية. هذه الأدوات سوف faciliومقارنة النتائج بين تيت الأوراق ومختلف التخصصات، ويكون تطبيق لتقنيات بالمنظار الفئران الجديدة والناشئة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
لا مالية أو تضارب في المصالح الكشف عنها.
Acknowledgments
بفضل خاصا سارة Kossak ميتشل Guanzon سونغ إيان يانغ ولى قوه جيا التعاون أثناء تقييم بالمنظار حيواناتهم التجريبية.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane, USP | Webster Veterinary | ||
| Surgical lubricant | Savage laboratories | surgilube, 0281-0205-45 | |
| Phosphate Buffered Saline | Thermo Scientific | SH30256 | |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Methylene Blue 1% Aqueous Solution | Fisher Science Education | S96393 | |
| Flexible digital ureteroscope | Olympus America | URF-V | |
| Video system center | Olympus America | VISERA Pro OTV-S7 Pro | |
| Xenon light source | Olympus America | VISERA Pro CLV-S40 Pro | |
| Video recorder | MediCapture, Inc. | MediCap USB200 | |
| Flexible biopsy cup forceps | Olympus America | FBC-3115 | |
| Anesthesia machine | Euthanex Corporation | EZ-7000 Classic System |
References
- Huang, E. H., et al.
- Wirtz, S., Becker, C., Blumberg, R., Galle, P. R., Neurath, M. F. Treatment of T cell-dependent experimental colitis in SCID mice by local administration of an adenovirus expressing IL-18 antisense mRNA. J. Immunol. 168, 411-420 (2002).
- Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging. Mol Imaging. 2, 350-357 (2003).
- Becker, C., et al. In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy. Gut. 54, 950-954 (2005).
- Ravnic, D. J., Konerding, M. A., Huss, H. T., Wolloscheck, T., Pratt, J. P., Mentzer, S. J. Murine microvideo endoscopy of the colonic microcirculation. J. Surg. Res. 142, 97-103 (2007).
- Hamilton, M. J., et al. Essential role for mast cell tryptase in acute experimental colitis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 290-295 (2011).
- Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. High resolution colonoscopy in live mice. Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).
- Hensley, H. H., Merkel, C. E., Chang, W. C., Devarajan, K., Cooper, H. S., Clapper, M. L. Endoscopic imaging and size estimation of colorectal adenomas in the multiple intestinal neoplasia mouse. Gastrointest. Endosc. 69, 742-749 (2009).
- Banerjee, S., et al. Infection control during GI endoscopy. Gastrointest. Endosc. 67, 781-790 (2008).
- Cleaning and disinfection of equipment for gastrointestinal endoscopy. Report of a Working. Party of the British Society of Gastroenterology Endoscopy Committee. Gut. 42, 585-593 (1998).
- Sano, Y., et al. New diagnostic method based on color imaging using narrow band imaging (NBI) system for gastrointestinal tract. Gastrointest. Endosc. 53, 125-12 (2001).
- Davies, J., Burke, D., Olliver, J. R., Hardie, L. J., Wild, C. P., Routledge, M. N. Methylene blue but not indigo carmine causes DNA damage to colonocytes in vitro and in vivo at concentrations used in clinical chromoendoscopy. Gut. 56, 155-156 (2007).
- Chiang, N., Schwab, J. M., Fredman, G., Kasuga, K., Gelman, S., Serhan, C. N.
- Zilberman, D. E., et al. The digital flexible ureteroscope: in vitro assessment of optical characteristics. J. Endourol. 25, 519-522 (2011).
- Machida, H., Sano, Y., Hamamoto, Y., Muto, M., Kozu, T., Tajiri, H., et al. Narrow-band imaging in the diagnosis of colorectal mucosal lesions: a pilot study. Endoscopy. 36, 1094-1098 (2004).
- Dohoo, I., Martin, W., Stryhn, H. Cohort studies. Veterinary Epidemiologic Research. McPike, S. M. , AVC, Inc. Charlottetown, Prince Edward Island, Canada. 151-162 (2003).
- Yiou, R., et al. The pathophysiology of pelvic floor disorders: evidence from a histomorphologic study of the perineum and a mouse model of rectal prolapse. J. Anat. 199, 599-607 (2001).
