Summary
지난 몇 년 동안, 새로운 세대의 내시경은 쥐 대장염과 대장 종양을 평가하기위한 중요한 진단 연구 보조로 등장했습니다. 우리는 생쥐의 염증과 대장 종양의 내시경 적 평가뿐만 아니라 대장염과 대장 종양의 내시경 심각도를 문서화하는 진수 식별자를 사용하는 새로운 채점 시스템에 여기에 대한 자세한 프로토콜을 제시한다.
Abstract
연구 목적 현대 내시경의 사용은 크게 위장 병리에 대한 우리의 이해를 촉진했다. 특히, 실험 내시경은 만성 염증성 장 질환의 메커니즘과 대장 암의 진행을 평가하는 것과 같은 하나의 실험 동물에서 반복 평가를 필요로 연구에 매우 유용합니다. 그러나, 연구를 통해 사용 방법은 매우 다양하다. 적어도 세 내시경 채점 시스템은 쥐 대장염에 대해 게시 및 대장 종양의 평가를위한 프로토콜이 수반 대장 염증의 존재를 해결하기 위해 실패 출판되었습니다. 이 연구는 개발과 동시에 염증과 종양 모두의 평가를 통합하는 재생 가능한 내시경 채점 시스템의 유효성을 검사합니다. 항문 주위 결과에 따라 대장 염증의 정도와 심각도 1) 평가 (월마트의 투명성이 새로운 채점 시스템은 세 가지 주요 구성 요소가 있습니다L, 점막 출혈 및 국소 병변), 2) 종양 병변 (격자지도와 막대 그래프), 관찰 병변의 할당 된 범주와 소수점 단위를 기준으로 자신의 병리학 및 연구 관련하여 임상 사례 3) 숫자 정렬의 양적 기록 내시경 합병증 (진수 식별자). 여기에 제공된 영상과 원고는 수사관이 인접 내시경 대장염 (D-근육에서 원심을 차별화 할 수있는 시스템 옵션을 사용하여, 잘 확인하고 재현성 내시경 방법을 사용하여 자신의 실험 쥐를 득점 할 수 있도록, IACUC 승인 된 프로토콜에 따라 제조 하였다 ).
Introduction
쥐 내시경을 통해 1-3 년을위한 유용한 연구 도구로 수행되었습니다. 일부는 S 상 결장경을 사용하고 있지만 지금까지 쥐 내시경을 사용하는 대부분의 연구는, 딱딱한 내시경을 사용했습니다. 뮤린 내시경 즉각적인 결과를 제공하고 장내 정상, 염증의 중증도, 이러한 체중 감소, 설사 및 조직학 간접 측정, (병변 누덕 때 차선이다)에 비해 종양의 진행의 정도를 객관적 추정하면서 결장의 전반적인 건강에 대한 통찰력을 제공. 안락사하고 콜론 분석 1을위한 수확하는 동물을 필요로 기존의 조직 학적 검사에 반대 특히, 내시경 검사는 시간이 지남에 따라 실험 동물 모델의 반복 평가를 할 수 있습니다. 이러한 장점에도 불구하고, 뮤린 내시경 기술의 광범위한 사용은 불가능했습니다 implementati 및 표준화 된 프로토콜의 부족에 의해 제한된다에 대한 병리학 적 연구 결과의 점수. 제대로 구현, 쥐 내시경 검사는 더 이상 우리의 이해와 염증성 장 질환, 대장염, 대장 종양을 포함한 여러 만성 위장 질환 상태의 동물 모델의 특성을 용이하게하기 위해 큰 약속을 보유하고 있습니다.
쥐 내시경 기술의 유틸리티는 표준화 된 시험 절차의 존재와 장 병리에 대한 일관성, 비 중복 및 신뢰성 평가 시스템이 필요 재현성 및 객관성에 달려있다. 적어도 세 가지 설명 득점 대장염 4-6의 내시경 평가를위한 시스템뿐만 아니라 대장 종양 생쥐의 4,7,8에 출판되었다. 그러나 이러한보고 방법 및 채점 시스템은 연구를 통해 쉽게 비교할 수 없습니다. 많은 경우에, 병변의 분류에 사용되는 기준에 대한 명확한 정의가없고, 기준이 관련 될 때, 이들은 매우 다양. 또한,대장염 종양, 하나의 측정 도구에 동시에 발생 및 결과에 대한 상호 작용 효과를 가질 수있는 가장 일반적인 대장 병변의 두 가지 모두의 평가를 통합보고 된 채점 시스템이 없습니다. 마지막으로, 대장염에 존재 내시경 채점 시스템은 종종 제한 차별 염증 카테고리가 (즉. 종종 1-4 short 정수 저울에 좁은 득점 옵션) 제대로 질병의 진행 시나리오를 대표하는 매개 변수 통계 분석의 사용을 가능하게합니다.
본 논문에서는 뮤린 대장염 및 결장 종양의 중증도를 평가하고, 항문 주위 영역, 직장 및 원위부 대장의 해부학 적 평가에이 기술을 채용하기위한 표준화 된 프로토콜을 설명하는가요 성 내시경을 사용하는 방법을 설명한다. 우리는 외상 및 이미지 유물을 최소화하기 위해 내시경 검사를하는 동안 효과적인 문제 해결을 설명하고, 우리는 재현 할 수있는 평가 시스템을 설명검증 게시 된 임상 매개 변수를 기반으로. 채점 시스템 (특정 진단 값으로 결과를 강조하기 위해 12 염증, 종양의 매핑이 가능 등급과 플로팅 옵션, 새로운 소수점 유닛 시스템 (즉, 진수 식별자)와 차별의 높은 수준을 사용하여 장의 염증과 종양 모두의 평가를 통합 즉, 종양 개발, 내시경 검사 등 중 합병증). 소수점 식별자의 사용은 더욱 하류 분석에 대한 중요한 데이터 세트를 신속하게 추적을 허용한다. 마지막으로, 우리는 대장염 및 대장염 관련 암 (덱스 트란 황산 나트륨 (DSS) 유도 성 대장염, 클로스 트리 디움 남과 어울리지 않는 감염 및 azoxymethane / DSS 유발 대장 암)의 여러 쥐 모델에서 신뢰성 및 채점 시스템의 유효성 테스트를 수행합니다.
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Protocol
1. 내시경 시스템 설정
- 제조업체의 지시에 따라 쥐를 마취하기 전에 내시경 검사 시스템을 설정합니다. 이 프로토콜에 대한 인간을 위해 디자인 된 비디오 ureteroscope (그림 1)를 사용합니다. 삽입 튜브의 외경은 9.9 프랑스 (3.3 mm)이며, 그 선단부가 8.5 프랑스 (2.8 mm)이며, 계측 채널의 내부 직경은 6 프랑스 (1.2 mm)이다.
- 내시경의 사용이 질병 전송에 연결되지 않은 있지만, [9], 포자 형성 미생물로 작업 할 때 70 % 에탄올 (10) 또는 적절한 기술과 내시경 및 렌즈를 소독. 세균 살균 윤활유 및 비 긁힘은 내시경 끝을 포화시키는 조직을 닦아 준비한다.
- 계측 채널의 상단에 공기의 전체 3 ML의 주사기 (또는 적절한 CO 2 가스 혼합물)를 연결합니다.
- 전원을 켜고, 정상 흰색 빛의 화이트 밸런스를 설정,적용뿐만 아니라 협 대역 영상 (NBI) 모드. 이 특성 비정상적인 혈관 (11)이 궤양 성 및 종 양성 병변 등의 점막에 미세 혈관 구조를 강조하는 등 2001 년 이후, NBI는 진단 영상의 혜택을 제공하고 있습니다. NBI 필터 모드는 헤모글로빈과 구조를 강조 390-445 nm의 530-550 nm의에 캡처 빛의 파장을 제한합니다.
- 당신의 결과를 기록하기 위해 평가 점수 양식 (그림 2)를 인쇄합니다. (6.1 절 참조) 시험 전에 예상되는 정상 및 NBI 이미지 (그림 3A)와 정의와 각 기준의 성적에 익숙해 지.
- 원하는 경우, chromoendoscopy 위해 인산 완충 식염수 (PBS)에 착색제 기반 솔루션을 준비. chromoendoscopy에서, 시험은 점막 변화를 강조하기 위해 조영제 등의 염료를 사용하여 수행됩니다. 메틸렌 블루 (0.1-1 %)과 인디고 카민 (0.1 %) 솔루션 (그림 3B)를 사용합니다. 주의즉, 메틸렌 블루는 시료 분석을 방해 할 수있는 산화 라디칼, 아미노산 잔기의 간접적 가교 및 DNA 분해 (12)를 생산할 수있는 산화 환원제이다.
2. 마우스의 전신 마취
- 마취제 및 관리 경로를 선택합니다. 면역 체계 및 연구 목표와 약물의 잠재적 인 간섭에 대한 동물 자원 시설이나 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에서 수의사를 참조하십시오. 일부 약물은 설치류 (13)를 포함하여, 동물의 사이토 카인의 프로필 발현에 영향을 미칠 수있다. 적절한 관리와 함께, 생존 내시경 검사를위한 터미널 절차 또는 이소 플루 란에 주사 tribromoethanol를 사용합니다.
- 유도의 경우, 0.2 ~ 0.5 L / 분의 속도로 100 % 산소에 이소 플루 란 4 ~ 5 %가 관리, 유지 보수를 위해 0.5 %를 사용합니다. 이 프로토콜은 모든 동물에 적합하지 않습니다. 귀하의 시설 수의사에게 문의적절한 지침과 교육. 동물 복지에 대한 높은 기준을 달성하기 위해 관련 IACUC 권장 사항을 준수. 마우스가 완전히 마취 경우 있는지 확인합니다.
- '띠'실험실 접착 테이프를 사용하여 지느러미 또는 복부 위치에서지지면 테이블 마취 된 쥐. 당신의 내시경 화면의 해부학 적 방향에주의하십시오. 그 하부 사지와 꼬리를 고정합니다. 테이프의 밴드는 떨어져 호흡의 움직임을 방지하지만, 흉부 환기의 움직임을 제한하지 않도록 가슴에 배치 할 수 있습니다.
3. 자세한 내시경 검사
- 다음 항문을 통해 범위를 사전에, 직장에 내시경을 삽입하기 전에 항문 주위 병변을 찾습니다.
- 코트 불임 수술 윤활제 내시경. 하지 CCD (전하 결합 소자) 센서의 코트 표면을해야합니다.
- 내시경을 삽입하고 녹음을 시작합니다. 녹화 된 동영상은 M 유용합니다검사 후 필요한 경우 내시경 검사의 eticulous 평가. 점막 / 장에 자극을 최소화하기 위해 시간의 최소한의 길이 내시경 검사를 수행하려고합니다.
- 천천히 창자 벽을 구별하기 위해 주사기를 사용하여 공기를 적용합니다. 마우스의 크기에 따라, 공기의 1-2 밀리리터를 사용한다. 과도한 공기 취입을 방지, 그것은 마취 된 쥐의 호흡 곤란 및 사망의 원인이 될 수 있습니다.
- 당신은 공기 또는 범위의 부드러운 회전과 방법을 취소로 앞으로 내시경을 사전. 당신은 창자 루멘을 보지 않는 경우에 내시경을 진행하지 마십시오. 천공이나 대장 / 직장 눈물이 특히 젊은 마우스 (<8-10주) 이전에,이 단계에서 발생할 수 있습니다. 필요에 따라 사진을 촬영합니다.
- 범위는 진행으로 (정의 등 자연적으로 발생하는 점막 출혈은 외상 내시경과 관련이없는) 출혈 자연이있는 경우, 평가합니다. 내시경은 직장과 결장으로 들어가는 자연 출혈이 관찰 될 수있다.
- 으로결장 벽의 투명성 SESS. 투명성은 결장에 교내 혈관을 시각화하고 주변의 다른 내장의 (그림 4) 할 수있는 능력으로 정의된다. 범위의 부드러운 움직임 (백 포워드, 시계 방향, 반 시계 방향) 혈관 다른 내장의 개념으로 이해 될 수 있는지 결정하는 것을 도울 것이다. 장간막 지방 조직 또한 볼 수 있습니다. 골반강 내 직장은 복강의 결장 벽보다 투명하게 나타나는 경우 주.
- 초점 병변 (부종 지역, 미란, 궤양, 종 양성 대중)의 종류와 수를 결정하는 검사. 이것은 결장 염증 스코어 및 개발되었다 소수점 식별자를 사용하여 스코어링 형태로 기록 될 것이다.
- 콜론 결장에 꼬리 쪽 구부러 지역에 도달하면 천천히 내시경을 철회 한 후 파쇄 점막으로 인해 발생하는 출혈 접촉 (의 존재를 찾아내시경) 고급 또는 제거된다. 그것은 의도적으로 대장 표면을 긁어 할 필요가 없습니다. 건강한 대장 점막 적절한 내시경 검사 후 출혈하지 않습니다.
4. 생체 검사
- 조직 검사가 필요한 경우, 계측 전용 내시경 채널을 통해 생검 겸자를 삽입합니다. 장천공을 방지하기 위해 화면에 내시경 겸자의 발전을 모니터한다.
- 60 ~ 80 ° 컵에 컵 각도에 대해에 집게의 생검 컵을 열고 관심의 영역으로 연출합니다. 지나치게 열 집게 또는 압력 건강 투명 장 벽의 조직 검사에 의한 천공 결과 장 조직의 여분의 레이어를 파악할 수있다. 천공이 발생하면, IACUC 권장 다음 마취 동안 동물을 안락사. 구멍은 내 독소 혈증과 복막염이 발생할.
- 생검 컵을 닫고 집게는 폐쇄 유지하면서 그들을 잡아 당깁니다.
- 레모조직과 집게에 부드러운 솔루션으로 조직을 세척하여 집게의 표본을했습니다. RNA는 나중에하고 PBS 일반적인 작업 솔루션입니다, 필요한 경우, 샘플을 제거하기 위해 바늘을 사용합니다. forcep 컵 침식 또는 가장자리를 절단하지 마십시오.
5. 마취에서 회복
- 이 복구 될 때까지 검사를 완료하면, 마우스에 따뜻한 환경을 제공한다. 전기 빛, 또는 37 ℃로 설정 따뜻한 패드 중 하나를 사용 과열을 방지, 말초 혈관 확장 동물의 회복을 저해. 전체 복구 될 때까지 밀접하게 마우스를 모니터링합니다.
6. 진수 식별자와 대장 건강의 통합 내시경 채점 시스템
- 를 위해 : (매개 변수 정의 및 프로토콜 진수 가중 점수 시스템을 사용 쥐과 대장 염증과 종양의 내시경 평가) 점수 형태 (그림 2) 아래의 매개 변수 정의를 사용하여예와 nonbiased 평가 및 상세한 기록 보관에 대한 지침과 선택 '말초-근위 내시경 대장염 점수 시스템'(D-근육).
- 채점 시스템의 형태 (그림 2)에 설명 대장 염증의 네 개의 매개 변수를 점수. 꼼꼼하게 항문 주위 영역, 장 투명성, 출혈 장 유형 (있는 경우), 그리고 존재와 국소 병변의 양 (미란, 궤양, 및 / 또는 종 양성)을 평가한다.
- 연구 목적으로 종양을 평가할 때, 수량, 위치 및 크기를 검사하고 대장지도 및 채점 양식에 막대 그래프를 사용하여 설명합니다. 얻은 점수와 병변의 수 (해당되는 경우)의 수치 합이 배경 대장 염증, 병변의 가장 주된 유형 및 병변의 수를 결정합니다.
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Representative Results
본 연구에서 제시하는 프로토콜과 이미지는 올림푸스 URF-V 유연한 내시경 (14)과 NBI 11, 15으로 제조 하였다. 영상은 MPEG-2 포맷과 JPG, TIF, PNG, 또는 표준 USB 플래시 휴대용 메모리에 양도 최대 1,280 X 1,024 픽셀,와 DICOM 형식으로 사진에 저장되었다. NBI는 헤모글로빈을 함유 조직의 시각적 대비를 향상시킵니다. 일반 빛과 NBI 영상은 대장 점막의 정상적인 해부학과 궤양과 종양 개발 (도 3a 및도 6A) 동안 정상 및 비정상 혈관 사이의 차이점을 설명하는 주요 기능입니다. chromoendoscopy 동안 조영제 등의 메틸렌 블루 이미지는 결장 지하실의 공중 일반적인 벌집 모양 (그림 3b에 가까이 참조)를 공개, 근접 촬영 이미지의 장점을 보여줍니다.
지금까지, 우리는 500 개 이상의 쥐 내시경 검사의 FOLLO를 수행 한날개 반복 시험을 대표하는 약 10 %가이 프로토콜. 일반적으로, 절차가 완료 10-15 분 정도가 소요, 마취, 내시경 검사, 마취에서 회복의 관리 사이에 균등하게 분할합니다. 검사는 항문에서 원위 결장의 비만 곡에 대해 설명합니다. 우리는 또한 성공적으로 직전 조직학 (그림 6B)에 대한 수확 조직에 대한 조직의 사후 해부 다음, 경우에 결장, 맹장과 회장의 사후 내시경 검사를 실시했다. 한 경우에, 우리는 또한 관찰 인해 장 유착에 심각한 십이지장 협착 끼워에 영향을 마우스에 의심 위의 팽창을 확인했다. 비정상적인 이미지는 약간 염증 원위부 대장의 가장 두개골 측면에서 transmurally 관찰, 사후 검사는 팽창 위가 결장에 나란히되었다 보여 주었다.
우리는 유효하고 신뢰할 수있는 소수의 가중을 개발했습니다발표 된 연구 연구에서 쥐의 내시경 검사의 표준화 된 응용 프로그램을 개선하기 위해 시스템을 코어 링. 세 채점 시스템은 이전에 사용하고 소수점 가중 시스템 4-6의 개발을위한 기초로 제공하고 있습니다. 이 시스템은 다양한 기준과 병변의 심각도 수준의 분류를 허용하지만, 그들은 내시경 이미지에서 평가하기 어려운 일부는 적절한 기준의 정의를, 부족합니다. 채점 시스템이 마우스에서 내시경 검사로 의심 관련성이있는 경우에 모호한 매개 변수가 포함되어 있습니다. 이레 출판 파라미터 4-6 그들의 내시경 이점, 제한 및 생리적 관련성의 요약은 표 1에 나타낸다.
제안 뮤린 결장 내시경 채점 시스템은 연구 목적으로 사용되므로, 통계적 추론을 행하는 그 유용성이 필수적이었다. 채점 시스템이 있다고 확신하는높은 구성 타당도, 우리는 먼저, 해당 매개 변수를 식별 할 수있는 개념적 프레임 워크를 개발 한 적은 기준 (N = 3), 이러한 매개 변수를 그룹화하고 염증과 치유의 실제 존재 (그림 7) 자신의 공선 성의 상관 관계를 평가 하였다. 다음에, 우리는 심각도 서수 레벨을 나타내는 개별 정수를 사용 항문 소견을 첨가하고, 소수점 식별자를 사용하여 종양 유도 및 개발의 개념을 통합. 또한, 우리는 쥐의 장 내시경 검사에서보고 이전에 고려하지 다른 매개 변수 /로 '혹평'을 추가했다. 결과 출력 점수 높은 유효성을 생성 및 파라 통계 분석에 적합하다. 마지막으로, 우리는 매핑 및 자세한 질병 모니터링을위한 수치 플로팅 기능을 추가했다.
우리 평가 시스템의 수렴 타당성을 평가하기 위해, 36 마우스 결장경 검사를위한 세 출판 파라미터로부터 얻어진 점수 점수와 비교 하였다는 obtai맹목적 세 이전 채점 시스템 4-6을 사용하여 동일한 사람에 의해 네드. 모든 비교는 우리의 통합 평가 시스템 (; 그림 8 피어슨 P <0.0001) 높은 수렴 타당성을 나타내는 좋은 양의 상관 관계를 보였다. 이 점수는 0과 1, P 사이 중증 대장염 및 향상된 데이터 분산액 (P = 0.0351 가지 경우에 일반적으로 존재로 분석 대장 상태를 평가하기 위해 임상 조건의 일부로 항문 결과의 포함을 지원 = 스코어 2 사이 0.0086 3, 그림 (b)). (항문 결과를 추가 한 후) 통합 평가 시스템이 이용 가능한 다른 시스템과 비교했을 때, 그것은 3 다른 시스템이 인해 네 가지 정수 카테고리 중 하나, 주요 케이스까지의 클러스터링 주요 추론 제한이 분명했다 방법의 오 분류 바이어스의 표시 (그림 8C) 16. 진수 식별자로, 우리의 새로운 채점 시스템은 CLUS의 가장 낮은 확률을 가지고정수 카테고리에 데이터 점을 들어 오셔서.
그림 1. 악기. 유연한 내시경, 비디오 제어 시스템, 광원, 비디오 레코더,이 연구에서 사용 된 흡입 마취 기계. 더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오 .
그림 2. 마우스에있는 성 대장염과 대장 종양의 평가에 대한 진수 채점 시스템의 형태. 이 시스템은 네 가지가 아닌 공동 선형 매개 변수의 핵심 염증 성분, T에 대한 그래픽이umor 정보, 주목할만한 병변 또는 합병증 소수점 단위. (진 가중 채점 시스템을 사용 쥐과 대장 염증과 종양의 내시경 평가) 아래 부분에 세부 기준과 예제를 참조하십시오. 더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오 .
그림 3. 일반 내시경 라이트 모드, NBI 모드, 혈관의 chromoendoscopy. Arborization와 정상 점막의 쌍 이미지는 직장에서 일반적으로 덜 일반적입니다. 더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오 .
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그림 4. 생쥐의 장벽. 내시경 벽화 장 선박 및 장간막 지방의 시각화 및 장간막 혈관과 인접한 건강한 내장에서 지방의 내시경 투명성의 원칙을 설명하는 장 루프의 단면 표현은의 벽을 통해 가능하다 건강한 대장. 원위 결장의 복막 섹션의 장 벽의 염증과 두껍게 다른 장 세그먼트가 건강한 경우에도, 다른 내장에서 교내 및 전층 구조의 시각화를 방지 할 수 있습니다. 더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오 .
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그림 5. 문제 해결. 장 내용, 모호한 이미지와 연동 운동으로 인한 낮은 가시성을 해결. 더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오 .
그림 6. 페어링 된 이미지 병 대장 점막 및 기타 근위 장 세그먼트 (보통 빛 대 협 대역 영상, NBI). NBI 궤양 및 종 양성 병변을 식별하는 데 도움이됩니다. 일부 궤양 NBI와 갈색을 표시, 섬유소 물질로 덮여 다른 사람은 두꺼운 흰색 나타납니다. 그렇지 않은 경우 AOM / DSS 종양은 특히 초기 단계에서, NBI와 더 나은 특징내강으로 돌출. 별표 (*)가 콜론 공기에 불어 모든 다른 이미지 관찰되지 PBS, 가득 결장 내시경 이슈 (점막 주름)을 강조 표시합니다. 더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오 .
그림 7. 장 염증의 정도와 대장의 염증 시각적으로 분별 학년 다양한 공표 기준하는 기능 (표 1 참조) 사이의 이론적 상관 관계와 공동 선형성. 더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오 .
그림 8. 우리의 평가 시스템과 이전에 게시 된 채점 시스템 간의 성능을 비교. 데이터 36 마우스 비디오 내시경 검사의 쌍 블라인드 분석에서 항문 주위 병변을 제외하고 염증 매개 변수 (3 개의 매개 변수)에 대한 시스템의.) 비교 (5 매개 변수). B) 채점 시스템에서 항문 주위의 연구 결과를 포함의 중요성;. 지속적으로 생쥐의 중간 / 심한 대장염의 경우 추가로 통계적으로 유의 한 정보를 제공 항문 검사 이전에보고 시스템 (36 마우스 비디오에 비해 항문 주위의 연구 결과를 포함하여 후 채점 시스템의 C) 성능 내시경 검사)는 각각의 방법으로 득점했다. 시스템 B와 C로 인해 misclassificat에 이르는 자신의 네 가지 범주 중 하나에있는 경우 클러스터링에 큰 제한이 있습니다이온 바이어스 (시스템 B와 동등하지 범주 C 클러스터의 경우). 지금은 의미있는 수치 점수의 추적을 허용하면서 진수 식별자를 추가함으로써, 우리는 또한, 정수 카테고리의 클러스터링의 기회를 낮췄다. 더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오 .
생쥐의 장내 염증을 평가하기 위해 내시경을 기준으로 출판 표 1. 임상 매개 변수는. 더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오 .
내시경 Assessme쥐과 대장 염증과 종양의 NT가 진 가중 채점 시스템을 사용하여 다음 매개 변수 정의 및 프로토콜
, 위치, 크기 및 종 양성 병변의 수 2) 기록, 3 개의 매개 변수와 12 수의 수치 성적 대장 염증의 정도와 심각도 1) 평가 : 대장 건강을위한 우리의 통합 내시경 채점 시스템은 세 가지 주요 구성 요소가 있습니다 연구원에 대한 특별한 의미의 연구 결과를 강조하는 기본 또는 주된 병변을 내시경 합병증의 할당 유형) 소수점 유닛, 여기에 "진수 식별자"이라한다. 종양의 위치 및 크기는 가상 결장의지도 상에 기록되고, 내강에 돌기 (폐색)의 각 비율에 종양의 개수는 그래프 상에 기록된다. 이 차트는 이러한 세 차원으로 통합 될 수있는 종양의 정보를 제공한다. 병변의 종류에 대한 소수점 단위는 0.0-0.9 범위. 만약 숫자특정 카테고리의 병변의 BER은 중요한 두 번째 및 세 번째 소수 자리가 병변의 개수를 나타 내기 위해 사용될 수있다. 세 병변이 관찰되는 경우, 예를 들어, 0.003 추가 연구원 세 병소가 있다고 알고있게 것; 12 병변이있는 경우, 다음 0.012가 사용될 것이다. 반복 내시경 검사가 예상되는 경우이 추적 시스템은 특별한 혜택입니다. 염증 기준 및 심각도 등급의 상세한 정의는 다음과 같습니다.
내시경 기준의 정의 - A. 네 개의 임상 매개 변수를 사용하여 대장 infammation을 평가
1. 항문 주위 결과 : 후 내시경 출혈과의 혼동을 피하기 위해 범위 지정을 시작하기 전에 이러한 측면을 평가합니다. 항문 지역의 건강은 대장, 피부, 일반적으로 동물의 태도의 건강 상태에 대한 프록시이며, 내시경 검사의 한 부분으로 포함되어 있습니다 몇 가지 병변이 없으며 때문에 s해야할 것 육안으로 음미 할 수 없습니다. 적절한 바이오 안전성 조치를 운동. 마우스로 건강한 정리 습관이 혈액 / 방전을 제거 할 수 있지만, 항문 주위 영역에서 피부 병변을 제거되지 않습니다. 채점 :
- 일반. 피, 설사, 균열, 누공 또는 방전이 관찰되지.
- 대변 또는 설사의 덩어리가 관찰.
- 피 묻은 방전, 느슨한 대변 (설사), 고름, 또는 관찰 작은 궤양의 혈전 / 덩어리.
- 육아 조직이나 주위 피부의 대부분을 포함하고 동물이 항문 지역의 자극이나 염증을 표시했음을 나타냅니다 관찰 된 병변, 직장 탈출증.
2. 결장의 투명성 : 콜론으로 내시경과 대장 벽을 통해 혈관 또는 구외의 장기를 시각화 할 수있는 능력으로 정의 부드럽게 이동합니다. 직장이 자연적으로 인해 근육 층에 덜 투명합니다덜 대비가 존재 골반강에 D 있기 때문이다. 이것은 뮤린 결장의 전체적인 염증 상태 또는 건강을 반영으로서 생리 가장 포괄적 파라미터 중 하나이다. 이 감염 또는 상피 세포에 독성 효과의 초기 단계에있는 점막 미란 / 궤양이 아닌 염증이 대장이하는 것이 가능하다. 생리 등장 솔루션은 장기간 사용 (그림 6 별표 참조)하면 물과 같은 저장성 솔루션으로, 마우스에있는 점막의 미백과 수축과 변화를 일으킬, 내시경 검사시 세척에 사용하는 것을 조심하십시오.
- 일반. 대장의 크고 작은 혈관과 주변 내장 명확하게 볼 수 있습니다. 약간 (앞뒤로, 시계 / 반 시계 방향으로) 내시경 이동합니다. 화이트 장간막 지방이나 다른 내장의 어두운 내용도 관찰 할 수있다.
- 소형 선박은 부분적으로 눈에 보이지 않는하지만 대형 선박은 볼 수 있습니다.
- 작은 vesseLS는 보이지 않는 큰 선박은 명확하지 않다. 점막이 나타납니다 두껍게하지 않습니다.
- 장 벽 및 / 또는 점막 부종 / 일반화의 피상 두껍게. 혈관은 볼 수 없습니다. 몇 팽창 / 정맥류 혈관 경우에 표시 될 수 있습니다.
3. 점막 출혈 : 차별화 자연 출혈 출혈 접촉. 건강한 생쥐의 일상적인 표준 내시경 절차는 출혈을 유발하지 않아야합니다. 염증이있는 경우, 증가 된 점막 및 혈관 조직 취약성은 점막 침식과 출혈을 초래할 수있다. 의도적이 매개 변수를 평가하는 결장을 긁어 할 필요는 없다.
- 일반, 아니 출혈.
- 일반적인 접촉 출혈. 이 외상성 출혈은 접촉 출혈로 정의되고, 그것은 단지 내시경을 회수 한 후 판단해야한다.
- 적용 할 수 없습니다. 의도적으로 타고난를 결정하는 심사를 강제로 할당되지출혈의 전자.
- 내시경은 대장을 입력으로 관찰되는 비 외상성 자연적으로 발생하는 출혈로 정의 자발적인 출혈. 때때로, 공기 주입에 심각한 대장염 동안 자연 출혈을 유도한다.
4. 초점 병변 : 대장 질환의 누덕 누덕 기운, 예측할 수없는 특성을 수용하기 위해,이 통합 평가 시스템은 수있는 염증의 정도에 의해 국소 병변의 존재 (주로 궤양 자연)에 대한 등급. 결장은 마우스에서 짧은 직선 튜브형 세그먼트이기 때문에,이 병변의 위치를 설명 할 필요가있는 것으로 간주 하였다. 대신에, 병변의 개수가 기록 진수 식별자 시스템을 사용하여 총 점수에 추가된다. 병변의 위치에 대한 강조가 필요한 경우, 우리는 F. 또한 간소화 된 응용 프로그램이 될 수 섹션에서 아래에 설명 된 '말초-근위 내시경 대장염 채점 시스템'(D-근육)라는 옵션이우리의 진수 채점 시스템에서 파생. 종양이 거의 생쥐의 대장 지역에서 염증의 형태를 유도하지 않고 존재하지 않기 때문에, 우리는 유일하게 (아래 참조) 장 건강의 맥락에서 종양의 연구를 할 수 있도록 진수 식별자 부분에서 종양을 포함했다.
- 보통, 더 초점 병변.
- 정상 점막으로 덮여 작은 평지 고도의 잘 정의 된 영역을 관찰했다. 이것은 가벼운 대장염에서 발견되는 것과 같이, 지방 부종 지역이나 세포 침투 / 확산의 잠재적 인 분야를 해결하는 것입니다.
- 붉게 또는 부식 영역은 관찰했다.
- 궤양이나 협착. 궤양으로 인해 부종이나 섬유 성 상처 수리에 빨갛게 기형 (비정상적인 혈관의 증거와 불규칙한 가장자리)에 의해 식별됩니다. NBI 내시경은 검출 또는 궤양의 관찰을 구별하는 데 유용합니다. 협착은 계약 또는 전으로 확장하지 않는 이상, 좁은 원형 또는 불규칙한 모양의 정적 영역으로 인식하고 있습니다예상했던 것과 비슷하게 일치하게되었다. 종종 협착이 회장의 비정상적인 점막 지하실, 또는 융모의 영역을 포함한다. 유연한 내시경 (외부 직경 = 3.3 mm)의 경우 대장의 더 인접 영역으로 범위를 사전에주의 무능력 지속적으로 사후 검증 이상 협착과 관련이있다.
촬영 위치, 크기와 수에 대한 B. 종양 차트
1. 가상 대장지도 :이지도는 루멘의 정상 (0 °)를 절단하고 그것을 압연하여 만든 원위 결장과 직장의 가상 관점 이미지입니다. 차트의 상단과 하단은 각각 콜론 (굴곡)의 근위 및 항문이 할당됩니다. 중심선 (180)은 루멘의 저부 (동물의 복부 측면)을 나타내고, 반원의 좌우의 반쪽은 오른쪽 및 왼쪽의 내강 벽을 나타낸다. 맵 위치와 종양의 수평 크기를 설명뿐만하는데 사용될 수있다궤양 등.
2. 종양 직업의 각도에 대한 종양 번호 : 결장지도는 두 개의 차원 정보를 제공하지만 돌출 장 협착 또는 폐색을 일으킬 수 있기 때문에, 종양은 창자 루멘으로 성장하는 정도는 종양의 중요한 기능입니다. 이 정보를 포착하기 위해, 우리는 결장 종양의 정도를 평가하기위한 입체 사시도 있도록 각 비율 범위에서 종양의 개수를 문서화 루멘으로 퍼센트 돌기위한 기록 그래프를 첨가.
숫자 점수가 의미있게하는 C. 진수 식별자와 빠른 추적과 관련된 경우
우리 채점 시스템 관련 병변 또는 합병증의 존재를 기록하는 신규 진수 식별자 시스템을 사용한다. 이 식별자는 설명 목적으로 내시경 관심 수치 점수와 빠른 트랙의 경우의 해석을 용이하게하기위한 것입니다. 그러나, 이들은 또한 병변의 중량 주된 유형을 수치 및 파라 통계에 순종 데이터 세트의 생성을 허용하는 역할을한다. 개발 채점 형태를 사용하는 경우, 적절하게 병변을 표시하고, 소수점 식별자 염증 점수에 추가 할 것을 선택한다.
- 특별한 결과가 없습니다.
- 항문 누공, 과도한 항문 주위 염증, 직장 탈출증.
- 작은 벽 개입 주로 미란 성 병변.
- 대부분의 궤양 성 병변, 일부는 (궤양의 수 등 두 가지 종양, 하나의 종양에 대한 0.301로 열한 종양에 대한 0.311을 0.302을 기록 할 수 있습니다.) 출혈, 섬유소로 덮여, 또는 인해 작은 궤양의 유착에 불규칙한 모양의 대형.
- 장 협착 (선택 협착 성 대장염에 심각한 염증 합병증 때문에, 전체 염증 점수에 2 점 추가).
- 잘 정의 된 플라크 (장벽 안에 두꺼운 / 투명하지 않은 조직, 예를 들어, & #(160), 평면 높이가 낮은 종양). 병변에서 기술 한 바와 같이 패의 개수 (즉, 0.401, 0.402, 0.411 ..., 등.) 기록 할 수있다. 그들은 장 루멘의 원주 모양을 수정에 대해 5 ~ 10 %까지 돌출되어 보일 수 있습니다 평평하고 확장 표면으로 나타날 수 있습니다.
- 질량 종 양성 병변을 튀어. 병변에서 기술 한 바와 같이 대중의 개수 (즉, 0.601, 0.602, 0.611 ..., 등.) 기록 할 수있다. 그들은 명확하게 돌출되어 있지만, 평면 나타날 수 있지만, 장 내강의 팽창 주위의> 15 %를 돌출.
- 내시경 검사를하는 동안 눈물 / 천공을 유발.
- 내시경 검사를하는 동안 동물의 죽음.
- 기타 : _____________ (예 : 심한 근위 내시경 대장염, 아래 말초-근위 내시경 대장염 채점 시스템을 참조하십시오).
D. 예제 및 응용 프로그램
이 논문에서 제시 한 쥐의 내시경 검사의 채점 시스템은 s입니다pecifically 대장의 염증과 대장 종양에 대한 데이터의 수집과 분석을 통합하도록 설계되었습니다. 종양과 관련하여, 데이터가 곡선 아래 영역, 중간, 모드, 주성분 분석 등 다양한 통계적 방법을 사용하여 분석 할 수있다. 개인 수준에서, 채점 시스템은 연구자가 시간이 지남에 따라 하나의 마우스에 결장의 건강을 모니터링하는 데 도움이 될 수 있습니다. 염증성 영역 점수를 합산하고 분류 및 병변 적절한 위치의 개수에 대한 적절한 소수점 식별자를 추가 한 후, 전체 점수는 연구자 수치 결장 염증 병변의 가장 지배적 유형 및 병변의 개수의 정도를 정량화하는 것을 허용 할 것이다. 예를 들어, 12.609의 점수는이 마우스가 종 양성 대중 돌출 심한 대장 염증과 구가 있음을 나타내고, 내시경 검사시 천공 된 정상적인 항문 주위 지역과 대장 점막 건강한 마우스는 0.7의 총 점수를해야합니다. 진수 식별자 시스템은 것연구자들은 카탈로그 쉽게 득점 마우스의 대규모 데이터 저장소를 검색 할 수 있습니다. 예를 들어, 연구원은 "0.6"로 끝나는 모든 점수를 확인하기 위해 검색 기준을 설정하고 돌출 된 종양이있는 모든 경우를 검색 할 수 있습니다. 더 많은 예제는 보충 그림 S1-S3에 도시되어있다.
E. 말초-근위 내시경 대장염 평가 시스템 (D-근육)
이것은 심각한 / 광범위한 근위 성 대장염의 경우를 구별하는 우리의 진수 식별자 채점 시스템의 선택적인 변형이다. 마우스에있는 성 대장염과 대장 종양의 내시경 적 징후가 대장의 말단 부문에서 지속적으로 개발하기 위해 표시하기 때문에 우리가 추천 :
- 대장의 말단 3 분의 2에 특별한주의를 지불, 기술 기준 다음 콜론을 득점하고 분명히 건강한 경우 근위 세그먼트를 무시하십시오. 이것은 혼란을 방지하고를 differen에 내시경 검사의 차별적 인 전력을 증가광범위한 대장염의 다양한 학위와 현재 이용할 동물.
- 기타, '심한 근위 내시경 대장염으로 분류 될 수있다 - 염증이나 종양 변경 근위 제에서 관찰하는 경우, 우리는 총 점수 (1.0) 한 점을 추가 '0 .9으로 진수 식별자를 할당하는 것이 좋습니다. 지도 그리드와 막대 그래프의 결과를 그린다.
- 결장의 근위부 3 번째 내시경 이상이 동물을 모니터링합니다. 질병이 비정상적으로 심각 할 수 있습니다 또는 결장으로 비만 곡 이상으로 확장 될 수 있으므로 특별한주의 사후을 지불합니다.
- 이 권장 사항을 따를 경우, 평가 양식의 '관찰 섹션'에이 방법을 기록하고, 실험을 통해 이러한 추세를 따르십시오. 평가는 0-13.9 범위 우리의 '말단-근위 내시경 대장염 채점 시스템'또는 D-근육, 다음 실시했다 당신의 마지막 책에서 인용 해주십시오. 이 수정은 더의가 있음을 유의 광범위한 / 중증 근위 대장염없이 동물에 사용되는 경우에 우리의 평가 시스템에 tatistical 효과.
보충 그림.
그림 (S1). 대장 종양 마우스의 내시경 평가의 예. 동물은 AOM과 DSS 전에 내시경을 시행 하였다. 내시경 소견으로 가득) 각각 정상과 NBI 모드 대표 이미지. B) 점수 양식. 두 개의 관련 연구 결과가 있지만, 연구자가 임상 중증도 및 연구 목표에 따라 소수점 식별자 0.6을 할당 선택합니다. 파라 통계적 분석의 다양한 '종양 / 궤양의지도'차트 '종양 돌출부 기록'에 기록 된 데이터와 함께 수행 될 수있다. iles/ftp_upload/50843/50843figs1highres.jpg "대상 ="_blank "> 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 S2. 대장 협착 및 내시경 합병증. 장 내강의 협착 및 nonperforating, 점막 눈물이 협착 사이트에 단지 말초 내시경 검사시 유발 된 것을 참고로 마우스의 예. 염증이 대장의 축소 및 쇠약 점막 눈물의 원인이 될 수 있습니다. 동물은 전신 마취하에 있었다. 채점 시스템은 우리가 절차 적 합병증을 모니터링하고 절감 할 수있다합니다. 더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오 .
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그림 S3. DSS 처리 된 마우스의 염증과 내시경 점수의 시간 코스의 예. 숫자가 자체 설명이 될 수 있습니다 결장 염증 (1-5, 8)가 진행하고 있음을 나타냅니다 8 일 (소수 0.2에 의해 개발 된 미란 하루에 11로)과 궤양 (소수점 0.3). 더 큰 이미지를 보려면 여기를 클릭하십시오 .
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Discussion
생쥐의 내시경 기술의 수정 및 문제 해결에 대한 몇 가지 고려 사항이있다. 가요 성 내시경의 사용 중에 마스터해야 절차의 중요한 측면은 만곡 및 토크 제어의 코디 복부 팽만 및 마우스 호흡기 손상을 방지하는 데 필요한 공기량의 조절, 및보기 컨트롤의 사소한 기술적 측면을 포함 . 토크 제어는 장천공의 위험을 최소화하기 위해 중요하다. 제대로 처리하면, 쥐 유연한 내시경 검사는 직접 시각화 및 연구 분야의 장 지역의 생검 표본 추출을 할 수있는 매우 안전하고, 신속하게 절차가됩니다.
(그림 5) 찌꺼기로 인해보기 장애물을 해결하기 위해, 분변 알약은 일반적으로도 공복 또는 완하제의 사용 후 관찰되는 점을 이해하는 것이 중요하다. 존재하는 경우, 대변은 쉽게 부드러운 공기 기능과 근접하게 이동할 수 있습니다ufflation. 사례의 약 11 %에서, 또한 PBS 관장 1 ㎖를 사용하는 것이 필요하다. 복부 팽만하거나 임신을 갖고있는 것 같다 동물을 검사 할 때 전에 관장을 실시에주의를 기울여야합니다. 연동 운동을 위해 공기 통기가 연동 운동을 중단하지 않기 때문에 연동 파가 통과 할 때까지 몇 초를 기다려야하는 것이 중요합니다.
지금까지 쥐의 장 질환을 평가하는 데 사용되는 대부분의 내시경 평가 시스템은 대장염이나 암 중 하나에 대한 특정 있습니다. 이 두 가지 조건이 종종 병용 발생하고 서로함으로써 암 연구자에 의해 위장관 연구 중에 얻은 정보의 유용성을 강화, 염증과 종양 형성이 모두 크게 분야 간 통신을 용이하게 고려 표준화 된 채점 시스템과 상호 작용할 수있는 점을 감안, 그 반대의 경우도 마찬가지입니다. 종양은 거의 대장 부위에 염증 변화의 형태를 유도하지 않고 존재하지 않는 때문에N 마우스, 우리 고유 장 건강의 맥락에서 종양 연구를 허용하는 우리 채점 시스템의 진수 식별자 섹션에서 종양을 포함했다. 채점 시스템의 유효성과 안정성을 높이고 장기 실험 또는 임상 시험에서의 사용을 촉진하기 위하여, 우리는 또한 체계적에 필요한 데이터 요소를 저장하는 채점 시스템 (도 2)와 함께 사용하기 위해 표준화 된 보고서 양식을 개발 각각의 분류 기준에 대한 정확한 정의를 기반으로 쥐의 장내 염증 점수를 계산합니다.
제한된 유효 기간의 복수 쥐 내시경 검사 채점 시스템의 이전 여부는 연구를 통해 결과의 해석을 방해한다. 사용하는 방법을 결정하는 발행 기관 담당자가 겪는 혼란을 최소화하기 위해, 우리는 두 개의 차원 화상으로부터 유추 할 수있는 기준을 이용하여 내시경 평가를 수행하는 추천 (예를 들어 기준 그쪽 피해t는 질감 또는 일관성을 참조 - 대변의;.) 무균 등 일부 마우스는 부드러운 의자가있을 수 있습니다, 공동 선형 (즉되지 않은 생리 학적으로 시간적 같은 염증 상황에 의해 구동되는) 추기경 표지판 때문에 . 2) 출혈, 점막 및 혈관 완전성의 지표로 제 1 벽 두께의 반사로서, 베커 등 4에서 설명한 1) 장내 투명성 : 염증, 우리는 다음과 같은 기준을 염증성 이벤트를 연대순으로 인해 순차 권장된다 3) 항문 주위의 연구 결과, 과도한 염증 결장 무결성 및 피부 자극이나 체질의 표시, 학년 4) 초점 병변, 주로 궤양 마우스에 염증성 병변 ()의 심각성. 지금까지, 우리는 3 % DSS 유발 쥐 대장염의 전형적인 모델에서 종 양성 병변을 보지 못했다. 이 문서에 설명 된 쥐 내시경 채점 시스템은 우리의 지식, 처음으로 제공결장 염증의 맥락에서 존재 및 종 양성 병변의 유도를 평가하는 정량적기구.
그들은 장내 염증, 예를 들면 SAMP / YIT / 구단의 특정 동물 모델에서 일반적으로 존재하는 것으로 나타납니다 이후 처음으로, 우리는 또한 쥐의 내시경 검사시 매개 변수로 협착을 포함의 중요성을 강조. 협착으로 인해 초보자 내시경으로 평가하기 어려운 증가 섬유증에 장 탄력의 손실과 점막의 만성 염증의 (반) 원주 영역을 나타냅니다. 우리는 빠르게 둔화 장 교통에 대한 가능성 (내시경으로 검사 할 수 있습니다) 원심 세그먼트에 비해 협착에 인접 있습니다 세그먼트에 더 많은 염증이 있는지, 내시경 정의 협착의 영향을받는 생쥐에서 발견했습니다. 연구 목적을 위해, 더 염증을 특성화 실험의 끝에서 조직 학적으로 동물을 후속하는 것이 좋다후보 협착 영역을 측면에 염증성 반응.
적절한 훈련과 전문가의 의견없이 어떤 점수 시스템은 주어진 시간에 변동이있을 수 있습니다. 그것은 보장하기 위해 의료 전문가의 훈련 된 동물에 의해 모니터링해야 마우스에 실시하는 내시경 교육 과정을 강조하는 것이 중요하다 : 다른 과학자 또는 기술자의 I) 적절한 교육 및 II) 동물 중에 오인이나 실수로 손상되지 않도록 절차. 최상의 사례 및 동물 복지를 보장하기 위해이 절차를 구현하기 전에 전문가의 조언을위한 당신의 동물 연구 시설 담당 수의사에게 문의하십시오. 일상적 훈련 내시경의 성능을 모니터링하는 것이 바람직하다. 우리가 가이드 라인으로, 동물이 평가되는 순서를 무작위, 그리고 멀게 방식으로 모든 동물을 평가 여기에 제시 한 이미지를 사용합니다. 주기적으로 매개 변수 정의 및 프로토콜 기준을 상담하고 K) 내시경 검사 및 채점 제 6 동안 손을 EEP.
요약하면, 의료 및 수의학 소화기의 팀으로, 우리는 대장염 종양의 쥐 모델의 내시경 평가를위한 표준화 된 프로토콜 및 반 정량적 평가 시스템을 제시한다. 이러한 연구 도구는 일상적인 쥐 내시경 검사를 수행하는 연구자를 활성화하고, 연구 인력은 실험실에서와 분야 사이의 장내 염증과 종양 형성의 재현과 비교 측정을 생성하는 경험의 모든 수준에서 허용 할 것이다. 우리는 높은 유효성과 함께 의미있는 수치 점수를 생산할 수있는 시스템을 개발, 개인 실험실 내에서 내부 사용을위한 사용자 정의 할 수 있습니다, 특히 연구 결과의 빠른 추적 기능을 제공하고 있습니다. 우리는 또한 ̵, 섹션 E를 참조하십시오 (대장 내 질병에 지역의 감수성을 고려 차이를 고려 차별적 득점 대안을 설명6, 말초-근위 내시경 대장염 채점 시스템, 약어 D-근육). 데이터 보고서 양식 및 일부 수치는 경험이 과학자 지원하기 위해 벽면 포스터로 사용할 수 있습니다 (그림 1, 3, 5, 6). 해부학 적 차이가 미묘한 내시경의 차이 (17)에 대한 계정으로 쥐 내시경 검사의 성공적인 구현은, 항문, 직장, 대장, 그리고 관련된 모든 내장의 점막 피부 접합부의 정상적인 해부학에 익숙해에 달려있다.
현재도, 작은 가장 유연하고 정밀한 내시경 기술은 빠른 속도로 가까운 장래에 마우스에 해당 될 수 있습니다 캡슐 및 단일 섬유 내시경 분야의 기술 진보를 이동, 생체 내에서 근위부 대장에 도달 할 수 있지만. 표준화 된 프로토콜과 본 논문에서 제시 한 내시경 채점 시스템은 살아있는 동물에서 쥐의 장내 환경의 상태를 시각화하고 평가하기위한 유용한 도구를 나타냅니다. 이러한 도구는 facili 것테이트 논문 사이의 분야에 걸쳐 결과의 비교, 그리고 새롭게 등장하는 쥐 내시경 기술에 적용이됩니다.
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Disclosures
금융 또는 공개의 이익의 충돌이 없습니다.
Acknowledgments
사라 코삭, 미첼 Guanzon, 성 Yeun 양 그들의 실험 동물의 내시경 검사하는 동안 그들의 협력을위한 리 구오 지아, 특별 감사.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflurane, USP | Webster Veterinary | ||
| Surgical lubricant | Savage laboratories | surgilube, 0281-0205-45 | |
| Phosphate Buffered Saline | Thermo Scientific | SH30256 | |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Methylene Blue 1% Aqueous Solution | Fisher Science Education | S96393 | |
| Flexible digital ureteroscope | Olympus America | URF-V | |
| Video system center | Olympus America | VISERA Pro OTV-S7 Pro | |
| Xenon light source | Olympus America | VISERA Pro CLV-S40 Pro | |
| Video recorder | MediCapture, Inc. | MediCap USB200 | |
| Flexible biopsy cup forceps | Olympus America | FBC-3115 | |
| Anesthesia machine | Euthanex Corporation | EZ-7000 Classic System |
References
- Huang, E. H., et al.
- Wirtz, S., Becker, C., Blumberg, R., Galle, P. R., Neurath, M. F. Treatment of T cell-dependent experimental colitis in SCID mice by local administration of an adenovirus expressing IL-18 antisense mRNA. J. Immunol. 168, 411-420 (2002).
- Funovics, M. A., Alencar, H., Su, H. S., Khazaie, K., Weissleder, R., Mahmood, U. Miniaturized multichannel near infrared endoscope for mouse imaging. Mol Imaging. 2, 350-357 (2003).
- Becker, C., et al. In vivo imaging of colitis and colon cancer development in mice using high resolution chromoendoscopy. Gut. 54, 950-954 (2005).
- Ravnic, D. J., Konerding, M. A., Huss, H. T., Wolloscheck, T., Pratt, J. P., Mentzer, S. J. Murine microvideo endoscopy of the colonic microcirculation. J. Surg. Res. 142, 97-103 (2007).
- Hamilton, M. J., et al. Essential role for mast cell tryptase in acute experimental colitis. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 290-295 (2011).
- Becker, C., Fantini, M. C., Neurath, M. F. High resolution colonoscopy in live mice. Nat. Protoc. 1, 2900-2904 (2006).
- Hensley, H. H., Merkel, C. E., Chang, W. C., Devarajan, K., Cooper, H. S., Clapper, M. L. Endoscopic imaging and size estimation of colorectal adenomas in the multiple intestinal neoplasia mouse. Gastrointest. Endosc. 69, 742-749 (2009).
- Banerjee, S., et al. Infection control during GI endoscopy. Gastrointest. Endosc. 67, 781-790 (2008).
- Cleaning and disinfection of equipment for gastrointestinal endoscopy. Report of a Working. Party of the British Society of Gastroenterology Endoscopy Committee. Gut. 42, 585-593 (1998).
- Sano, Y., et al. New diagnostic method based on color imaging using narrow band imaging (NBI) system for gastrointestinal tract. Gastrointest. Endosc. 53, 125-12 (2001).
- Davies, J., Burke, D., Olliver, J. R., Hardie, L. J., Wild, C. P., Routledge, M. N. Methylene blue but not indigo carmine causes DNA damage to colonocytes in vitro and in vivo at concentrations used in clinical chromoendoscopy. Gut. 56, 155-156 (2007).
- Chiang, N., Schwab, J. M., Fredman, G., Kasuga, K., Gelman, S., Serhan, C. N.
- Zilberman, D. E., et al. The digital flexible ureteroscope: in vitro assessment of optical characteristics. J. Endourol. 25, 519-522 (2011).
- Machida, H., Sano, Y., Hamamoto, Y., Muto, M., Kozu, T., Tajiri, H., et al. Narrow-band imaging in the diagnosis of colorectal mucosal lesions: a pilot study. Endoscopy. 36, 1094-1098 (2004).
- Dohoo, I., Martin, W., Stryhn, H. Cohort studies. Veterinary Epidemiologic Research. McPike, S. M. , AVC, Inc. Charlottetown, Prince Edward Island, Canada. 151-162 (2003).
- Yiou, R., et al. The pathophysiology of pelvic floor disorders: evidence from a histomorphologic study of the perineum and a mouse model of rectal prolapse. J. Anat. 199, 599-607 (2001).
