Inyección intramiocárdica percutánea guiada por ecocardiografía representa una modalidad eficiente, fiable, y objeto de orientación para la entrega de agentes de transferencia de genes o células en el corazón murino. Siguiendo los pasos descritos en este protocolo, el operador puede convertirse rápidamente competente en esta técnica versátil, mínimamente invasivo.
Los modelos murinos de enfermedad cardiovascular son importantes para la investigación de los mecanismos fisiopatológicos y la exploración de potenciales terapias regenerativas. Los experimentos que implican la inyección miocárdica se llevan a cabo actualmente por el acceso quirúrgico directo a través de una toracotomía. Aunque esto es conveniente cuando se realiza en el momento de otra manipulación experimental como la ligadura de la arteria coronaria, la necesidad de un procedimiento invasivo para la entrega intramyocardial limita posibles diseños experimentales. Con cada vez mejor resolución ultrasonido y técnicas de imagen no invasivas avanzadas, ahora es factible realizar rutinariamente guiada por ecografía, la inyección intramiocárdica percutánea. Esta modalidad ofrece eficiente y fiable agentes a una región específica del miocardio. Las ventajas de esta técnica son evitar la morbilidad quirúrgica, la facilidad para las regiones objetivo de miocardio selectivamente bajo control ecográfico, y la oportunidad de ofrecer a inyectar a la myocardium en múltiples intervalos de tiempo, predeterminadas. Con técnica practicada, complicaciones de la inyección intramiocárdica son raros, y los ratones regresar rápidamente a la actividad normal en la recuperación de la anestesia. Siguiendo los pasos descritos en este protocolo, el operador con experiencia básica ecocardiografía puede convertirse rápidamente competente en esta técnica versátil, mínimamente invasivo.
La enfermedad cardíaca es la principal causa de muerte tanto para hombres y mujeres en los Estados Unidos, lo que representa 600.000 muertes al año 1. Los modelos murinos de enfermedad cardiovascular son de importancia crítica para la investigación de los mecanismos fisiopatológicos y para explorar posibles terapias. Infarto de entrega de vectores de terapia génica, las células, los ARN modificados, y otros agentes terapéuticos permisos de investigación de su potencial terapéutico para la enfermedad cardíaca 2-7 tallo. En la actualidad, hay opciones limitadas para la entrega infarto de agentes terapéuticos en modelos de ratón 6. Inyección intramiocárdica bajo visualización directa se usa comúnmente, pero requiere una esternotomía o toracotomía y se limita a la región expuesta del corazón. Aunque esto es conveniente cuando se realiza en el momento de otra manipulación experimental, como la ligadura de LAD, la necesidad de un procedimiento invasivo para la entrega intramyocardial limita posibles diseños experimentales e introduce unefectos adicionales A partir del procedimiento (por ejemplo, la fibrosis debido a toracotomía). Entrega pericárdico percutáneo de vectores virales se ha informado, pero el sitio y la distribución de agente terapéutico no es homogénea y es difícil de controlar 8. Resultados de inyección percutáneo de distribución más homogénea de material inyectado, pero la entrega coronaria eficiente y reproducible es un reto en modelos murinos.
A continuación, describimos una técnica de inyección cerrado pecho intramyocardial que permite al operador controlar la orientación mínimamente invasiva, de agentes terapéuticos bajo guía ecográfica. La técnica es fácil de aprender, evita la necesidad de toracotomía o esternotomía y sus complicaciones experimentales concomitantes, y proporciona una mayor flexibilidad en el calendario y los sitios de la inyección intramiocárdica. Por lo tanto, la inyección intramiocárdica ecocardiografía asistida representa un método técnicamente simple y altamente efectiva de manipular elmiocardio en modelos experimentales murinos.
Los biológicos se pueden entregar al miocardio por inyección intramiocárdica directa, inyección intrapericárdica, o administración indirecta a través del torrente sanguíneo. Ensayos de terapia basados en células recientes en modelos de infarto de miocardio han descrito un enfoque de toracotomía abierta a la entrega de la sustancia inyectada 12-14. Un factor importante en el éxito de una intervención terapéutica de miocardio depende de la elección de la ruta de entrega. La dosis más alta d…
The authors have nothing to disclose.
TWP was funded by the Irish Cardiac Society Brian McGovern Travelling Fellowship. WTP was funded by R01 HL095712 and an AHA Established Investigator Award.
Vevo 2100 ultrasound imaging system | Visualsonics | ||
Vevo Integrated Rail System III | Visualsonics | ||
Microscan MS400 transducer | Visualsonics | ||
Microscan MS550D transducer | Visualsonics | ||
PrecisionGlide needles | BD | 305128 | 30G x 1 inch |
1cc slip tip syringe | Exel International | 26048 | or equivalent |
Gastight 50ul glass syringes | Hamilton | 1705 | |
Trypan blue stain (0.4%) | Gibco | 15250 | or equivalent |
Isoflurane | Baxter | AHN3640 | or equivalent |
Aquasonic 100 | Parker Laboratories | (01-08) | or equivalent |
Polystyrene microspheres (red fluorescent) | Life Technologies | F-8842 | or equivalent |