Abstract
在体内的生物医学研究的关键是在体外成果转化为临床应用进展翻译。小型学术机构以有限的资源发现它几乎是不可能的建立和维护典型的啮齿动物的设施进行研究。斑马鱼的研究已经证明是用于体内研究的药理学，生理学，发展和遗传研究一个有价值的替代。本文演示了一个功能斑马鱼设施可以建在一个简单而实惠的方式。我们证明，这样的设施可以建在大约一个工作日以最小的工具和专业知识。本研究构建了27 1.8升鱼缸斑马鱼设施的成本约为1500美元。我们估计，维修的初始工作150鱼殖民地的3个月是1000美元。这涉及到项目的学生，谁被介绍给aquaculturing斑马鱼的研究提出。
Introduction
体内模型是进行全面的生物医学研究，因为它们允许在体外研究的系统和有机体水平翻译是必不可少的。例如，对于小的哺乳动物，即啮齿动物，研究已经证明有必要在药物的开发和在可用药物的提高。然而，复杂性（财政和后勤），可能使其几乎不可能建立和维护设施的啮齿动物做实验，提出在小型研究的学术机构。然而， 在体内研究可以使用需要更少精细物流其它动物物种中进行。斑马鱼（ 斑马鱼 ）已经被成功地用作在体内模型来研究遗传学，发展，病理生理学，药理学和1,2,10,11,12。相比于r容纳斑马鱼进行实验所需的设施都比较简单和显著便宜odent设施。 Kim 等人 3已经详细描述了最近的80罐的斑马鱼壳体系统，它可以为约1500，其包括两个部分和劳动力成本来构建。此形成鲜明对比的是近8500美元将需要从任意数量的商业供应商购买一个现成的，80箱系统。然而，由Kim 等人给出的描述。可能是复杂和难以遵循鱼研究的新手。我们认为，斑马鱼设施可以简化的方式为1500美元的投资来构建。
体内设备的小型学术机构的建立提供了自己的才能，用以生产更强大，更深入的研究一个额外的工具， 在体内的结果支持在体外的数据通常会产生更全面的生物医学研究比仅采用体外方法获得的数据。因此，该实现的体内研究设施将显著提高该机构的成功在其总体研究工作（学生接触到研究，出版，通讯，追求外部资金等 ）。
的斑马鱼设施像在这项研究中所描述的建设是收缩金融时报在理想的科研学术机构与设施有限（或机构没有在体内研究设施）。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
注意：这些协议遵循长老会学院的IACUC的指导方针。
1.获取的材料列于表1。
2.装配5架镀铬根据制造商的说明。这将用于安置该基金。
3.构建储水器和过滤系统（图1A和2）。
- 使用图1A作为指导，布局18加仑桶，泵，过滤器和紫外线灯，以确定最后的安装位置和大小。
- 一旦零件摆出来，测量和切¾“PVC管组装所需的长度。根据特定的空间的需要和限制变化所有管道的长度。
- 组装管材和管件的使用PVC底漆和水泥奠定了前面，见下文（3.3.2和3.3.3）。
- 砂用砂纸管子的切割边缘，直到它们光滑的触感的ð没有碎屑。
- 素管子的接头的与所购买的聚氯乙烯底漆与来自聚氯乙烯底漆包含的拭子的内侧到外侧的和。
- 通过使用附带的拭子施加聚氯乙烯水泥管的外水泥的管材和管件在一起。重复需要PVC固井的所有步骤。
- 放置18加仑桶到搁板结构的一侧。
- 在储槽的侧面安装一个舱壁连接器。
- 附加¾“PVC管的舱壁上。
- 附加¾“管子用3/4泵入口”的另一端部螺纹使嵌合。
- 过滤器连接到使用两个90度弯头和¾“PVC管的泵。
- 为了在水中过滤掉的碎片和减少氯和化学水平使用一个纸过滤后跟一个活性碳过滤器。
- 紫外灯连接到过滤器according到制造商的说明。
- 附泵和过滤系统使用线扎机架的第一搁板的顶侧。根据货架/齿条选定的尺寸和布局变化的组装和安装的顺序。
- 添加每加仑水1 bioball到水槽一旦泵和过滤器系统被组装并连接到所述搁板。
4.构建主供应管线（图1B和2）。
- 测量切一块¾“PVC管紫外灯连接到主电源
- 使用3/4“的PVC三通通过三通连接到¾启动主供应管线”PVC排气从UV滤波器的到来。 。
- 加入此开闭阀在PVC三通管的底部，作为该系统的维护冲洗漏极。
- “通过测量和切削¾聚氯乙烯三通”PVC开始从¾顶部的主供应管线管至所需的长度，以提供进料管为每个机架上的架子。
- 安装¾“聚氯乙烯三通为水平线，将进入所述机架的每个货架。
- 任选地（和建议的），开闭阀添加3/4“为每个货架供应管线，以允许针对每个货架的隔离和该系统的模块化设计。
- 使用3/4“PVC管作为减压在顶架线。如果该行上的货架的后面运行时，使用该搁板用于存储。结束减压线在主排气管线（ 图1B）与3/4“开-关阀。
- 一旦上述步骤已被完成时，首要和水泥的PVC管一起作为先前构建的贮存器和过滤系统时完成。
5.构建主排气管线（图1C和2）。
- 运行主排气管线的垂直长度在机架f的另一侧ROM中的主供应管线。使用2“PVC管这种垂直线以接收主供应管线在从每个货架鱼缸的顶部和漏极线。
- 切的2件“PVC管的垂直主排气管线，并使用2”PVC三通以接收来自每个货架鱼缸漏极线。结束在股票箱的主排气线驱逐循环水通过海绵过滤器。
- 切割一英寸的开口2“PVC管件的整个长度并连接到垂直主排气线与PVC开杆从鱼缸水平漏极线。
- 帽2“横向排水管线用2”PVC帽。
- Prime和水泥使用必要的配件（接头，乳头或手肘）的作品。
6.构建鱼缸（图3）。
- 与钻，切1 1/8“孔在鱼箱1的背面”的上边缘下方有一个孔锯。
- 安装并拧紧一个90度的3/4“螺纹PVC弯头男性适配器创建鱼缸排气管。拧紧螺母举行，以防止斑马鱼会通过排气系统前加一块细网。
- 放置在鱼缸其排气管结束进舱内后面的排出管路的开放空间
7.启动供水系统
- 在几个容器，例如用于储存所述一个，测量水三次包含在系统内的量。让这种水在室温下放置进行调理48小时。
- 加水至该系统，让它流通最少3天。
- 在系统大力整个循环的最初3天，以消除污染物塔系统换水吨驻留在管道内。
- 添加启动斑马鱼，并允许得到确立的氮循环。标准化pH值一致7.保持7斑马鱼每1.8 L，并作为建议林波4和6麦克纳布在周末，每天两次在平日喂它们，每日一次。
- 监视硝酸盐（<75 mg / L时），亚硝酸盐（<10毫克/升），和铵（0毫克/升）每日在第一周期间加入鱼后，和每周一次所需的两倍的水平一直保持定期的换水。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
泵和Flters体系建设
一旦机架组装和设置的第一步是建立泵和过滤系统。该过滤器被连接到该系统的泵和位于上方的第一搁架，其允许容易过滤器维护和更换的底部水平。类似地，UV灯与PVC管的过滤器连接和代替用塑料丝的关系保持，以允许容易地更换紫外灯的需要（ 图4A）。紧接纸过滤，活性碳过滤器，和UV灯通过PVC管安装在泵上。 Bioballs被添加到罐中细菌的生长，从而有毒废物氨转化为硝酸盐提供表面。每加仑的水系统中的一个bioball是足够的面积，以允许细菌生长。塑料容器的盖子可装配以便一旦溢出的bioballs将保持在贮存和孔塔米纳的机会灰被最小化。即使溢出事件是非常不可能的，一个排水系统（增加一个管排在储存器的顶部）是可以向系统中的容易的加成。
主供电线路建设
第二步骤是组装的主要供水管线，将饲料每隔室将包含斑马鱼箱（ 图4B）。这条线被连接到紫外灯用一块PVC管。这条线垂直和横向运行到通过PVC三通机架。三通管的底端被用来连接一块PVC管的，将作为一个排水阀用于整个系统。
该饲料水平地四个室运行罐的主线：顶部的第二搁架的，第三架的顶部，第三货架的顶部和底部的第五货架。由于第二，第三和第四架线的顶部提供水到鱼缸它们在midlin运行E中的货架。这些线具有单独的开 - 关阀，它允许单独隔室的控制。
一个9端口灌溉歧管附连到水平行的末尾，并且这些灌溉通过灵活¼“管（ 图4B）水供应到鱼缸。灌溉歧管的每一个端口有一个内置的开闭阀。另外，开闭阀被放置在连接到每个端口的管的端部，靠近鱼缸入口，为方便和水流量控制。管将由钻入盖子的孔被插入到罐中。这将有助于保持牢固地插入所述罐中的管路。
即在第五货架的顶部运行线被用作压力缓解并且它控制与单独开闭阀。建议有这样的线路在第五层背面运行使得该区域可以用于存储。由于迈n个线运行在机架侧面的中线，它被送到使用的PVC弯头和一块PVC管的背面，然后它运行纵向（水平），为使用另一种聚氯乙烯弯头和一块压力缓解线的PVC管。在运行垂直于所述支架的另一侧并结束入水贮存器（该排气线是由2“PVC管，见下文）的主排气管线中的压力缓解行结束。
主排气线建设
第三步是装配排气系统，其横向地运行在机架上，在那里的水贮存器被放置在一侧（ 图4C）。该系统使用内置2“PVC管，收集了来自压力缓解行水，并从鱼缸排水（请参阅下面的鱼缸建设）。主排气线垂直运行时，连接所述压力缓解线在机架的顶部和结束入水重servoir。此外，主排气管线从鱼缸通过连接到经由聚氯乙烯三通主排气线水平2“PVC管接收的漏极。这些水平排水管具有1'的纵向切口从鱼缸（见下文）获得的冷凝水。这些横向漏极线在后面和在货架上的底部部分运行，并有轻微倾斜，使排出的水来运行，以通过重力主排气管线。海绵过滤垫被添加到水平漏极线，以使鱼缸冷凝水落在海绵和过滤掉碎屑。整整组装系统描绘图5。
鱼缸建设
代表性鱼缸示于图6中 。鱼缸漏极线的端部被放置到水平漏极线（参见上述对排气线路部分）。一金属丝网插入漏极线在鱼缸，以防止从斑马鱼游了坦克。这些特殊的坦克有盖子，以防止鱼类逃逸，并减少污染的机会。如果发生溢流槽的盖子可以防止鱼掉在了地上。罐用盖的理想，但如果一个系统是建立它含有罐没有盖子然后一个小孔可以钻出靠近所述箱的顶部。这将允许水逃跑，同时防止鱼类逃逸。
运行
斑马鱼殖民地可以通过在其他地方3-6描述可用，建立协议来维护。简要地说，我们的设施允许系统泵，通过调节流量为每成人（或仔鱼罐）进行循环的系统体积每小时约75倍，在大约有85毫升/分钟（或45毫升/分钟幼虫鱼缸） 。水质是由活性生物过滤和小规模的水的变化保持（〜系统体积的5％），为需要的。日常监测pH值，电导率，溶解氧（DO）水平和温度是必要的，以保持一致的条件。试剂盒是商业上可用于测量pH和DO水平。电导率仪，也可购买。为了每天测试这些变量，从贮存除去250ml水并进行分析。 pH水平应保持在7.2，溶解氧应为500微秒和1300μS之间小于6毫克，和导电性。 （SOURCE HERE）温度必须保持在28.5℃。常规系统维护（3 - 4周）包括一个近似30％的水的变化和清洁和更换过滤器垫和木炭。
图1：一个斑马鱼设施三个主要组件。答泵和过滤器系统位于所述搁架的底部（第一货架），并与主要供应线连接水储罐。从紫外灯B.主要补给线和派生水供给包含鱼缸三上货架。注意，每架室独立地提供，并且可以单独控制（开或关）通过阀的装置。该主线路还具有在底端主排水阀，并在其上端继续作为结束到主排气管线的压力缓解线C的主排气管线从所述压力缓解线，并从不同的接收水鱼缸车厢和两端入水股票坦克。需要注意的是每个架子有一个鱼缸排线，是PVC管材，是纵向打开的接受水个人鱼缸。这些线被稍微倾斜，以允许水通过重力向主排气管线中运行。请点击此处查看该图的放大版本。
图2：一个斑马鱼设施装配三个主要部件和功能容易注意的是，水贮存罐已有bioballs。从主排气管线中的水将落在一个海绵过滤器放置在网格上方的水位（为清楚起见这未在图中示出）。请注意，为清楚起见，第二个架子只描绘，显示的冲洗只有4供给管一些鱼缸和鱼缸排气管是透明的。机架的每一个架子可以容纳9 1升鱼缸，并有9口冲洗。
图3：鱼缸单元的鱼缸是在一个常规的宠物商店获得，它有A的鱼缸排水系统是由在背面上钻一个1 1/8“孔构造一个2升的容量。罐中，然后3/4“PVC管件被放置在一个倒置的”L聚氯乙烯肘“用3/4形状”。这个排水系统将落入位于鱼缸的背面鱼缸排气线的开口侧。B.图像描绘网格的安装入鱼缸排水系统。网状可防止排出到排气线路斑马鱼。
图4：各个部分的建设。答 3过滤器和泵系统是在系统的底部机架。泵被连接到三个mechaniCal的过滤器，随后用UV过滤器，以消除来自系统的水污染物。在一个9端口灌溉歧管，这将提供新鲜水和氧气，以每罐B的水平供给线结束。供给线路到每个货架具有开闭阀，可用于阻止水到每个货架进行清洗和隔离的目的。C的鱼缸排气线路汇入主排气线重新进入循环。泄压线也汇入主排气管。
图5：已完成系统已完成系统包含泵和过滤器系统，主垂直供应管线，一个水平的供应线，每个架，一个罐的排气管线，卸压线和主排气管线用于一个包含循环系统。
图6：代表鱼缸中的鱼箱包含一个排出管路，将与系统中的水平排水线连接。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
本文的主要目的是要证明的功能斑马鱼设施建设不复杂，并且可以通过新手鱼的研究人员以最小的结构的知识来构建。此外，这篇文章显示，对于这一功能的斑马鱼设施的材料可从当地的宠物用品商店或硬件商店容易，经济地获得。一旦所有的材料和工具已经获得了系统的建设和鱼缸大约需要1个工作日。在72小时的第一次运行可以在系统中的任何故障，例如泄漏或低水压，待确定。这第一次运行还允许在系统内的污染物被从循环中删除。例如，PVC胶水可包含将在第一几个小时循环的去除有害的有机材料。该系统具有主排水阀，允许和便于体积和水替代mainten调整 ANCE。此外，该系统具有压力缓解行也有利于水的压力的调整。当只有一个或两个隔室（货架）将被使用，因为它允许水压力的调节这条线是很有用的。
该工厂采用模块化设计允许的1，2或3车厢的利用率（对1.8升36鱼缸），以满足个别研究人员的能力需求。该开闭阀设置在每个隔室便于系统的不同部分的隔离。此阀门系统也是有用的，以避免潜在的感染传播，并便于系统的由车厢内的清洁。此外，每鱼缸供水有两个阀，一个在9端口冲洗和一个在所述柔性管在鱼箱的入口。这双阀系统允许的水压进行微调，也便于清洗程序或鱼提取或操纵。
T“>的氨氮，亚硝酸盐和硝酸盐一个适当的文档是设施的正常功能是必不可少的。对于这一点，bioballs是很重要的，因为它们的硝化细菌的生长提供足够的表面，一旦鱼群体是稳定的，该设施可被容易地修改成使用较大或较小的鱼缸，另外，该设施可以修改按照文献5中可用的协议来繁殖斑马鱼，而且，该设施可以被修改以添加其它模块或机架扩大系统的功能。新鲜水流入罐提供足够的新鲜氧气，使得没有必要添加额外的人工肺。发生在水槽中的空气交换是氧的足够源。如果使用更大的水池然后一个额外的氧源可以被添加。还应当指出的是不流动的新鲜水进入水箱的鱼会窒息，所以至关重要的是，水流量BË密切监测以确保没有任何阻挡的水管。至关重要的是，水的温度保持在28.5℃。恒定温度通过保持在该系统中被容纳在28.5℃的室内温度来达到。可替代地，一个水族馆加热源可以保持恒定的温度可购买的。保持水的质量是至关重要的，以一致的实验结果。有许多可用来帮助确定根据实验条件下精确水质参数的来源。
鱼缸清洁每7 - 10天，随后喷上方可重新使用70％的酒精。它也建议，镀铬架进行清洗，在这一点上干燥，防止生锈和建立。如果污染的迹象观察，个体罐消毒用2％漂白剂溶液8。一般健康是特别注意感染迹象监测（肿胀，皮肤溃疡，exolpthalmia，颜色关闭等 ），气泡病（由于过饱和气体浓度，在水的温度的快速变化，在管道系统中的问题），鳃增生（在水中高含量的氨，铜，锌或活性的氯的） ，脊柱侧弯（由于维生素C缺乏症）或相关蛋炎症和纤维组织增生（由于女性的卵子保存的推出腹壁）。
这个设施的建造是灵活的，允许更小的或扩展的系统。通过采取基本结构的想法，这种设施可以被布置为适应各种尺寸的基本研究需求。因为结构可以通过机构有所不同，在该协议中最关键的步骤是在72小时的第一次运行，并在施工期间的第一周每天监测铵，硝酸盐，亚硝酸盐和水平。优良的水质将有助于保持鱼的健康。许多当前的协议提供负担得起的鱼SYSTE米需要一个露天水流量3。具有水从露天保护最小化的机会，水的污染和蒸发。当比该公共露天系统的维护上的封闭系统是最小的。
如果出现问题，在该设施的建造（泄漏，低水压等 ），可以通过简单地切去在该设施所关注的区域，并在更换零件以相同的逐步的方式替代的胶合管上面所列。这个系统可能容易受到大的水损失，由于小的泄漏，这可能成为危害鱼类如果离开被忽视。最少的投资浮关闭装置将检测时水位已降至低于安全阈值，并关闭系统。这可能是必要的，如果密切监测系统的不可用。有了正确的修改，有这个系统除了面临缺乏流动性很少限制。一旦这个系统构建编它是非常困难的，而不切割一些部件和recementing他们在新的位置移动。这个移动性限制意味着系统将理想地需要保持在一个工作空间。如果移动性期望有，可以进行增加灵活性小的修改。添加一个联合在每个电源侧，泄压线，泵的排出的开始，和排水阀的上方。排水管线可以干装，而不是巩固到位。添加一个柔性联接到泵部也将有助于在移动性。这是一个额外的
简单的结构本系统和维护装置，在文献中发现当前的协议可用于小的研究机构1,2,10-12。维护简单使这对本科生科研的理想系统。该系统是优秀的独立研究和教学实验室，也。
最后，这种类型的设施是经济实惠，易于构建和功能的体内实验。这家工厂是理想的利用有限的资源和有限的畜牧业的空间机构。斑马鱼的研究是用于对多种类型的研究，包括药理学，生理学，发展，或甚至遗传研究的区域。事实上，大量可用突变体或转基因斑马鱼的支持的研究在生物医学的几乎所有领域的创新行。此外，该系统可用于加强研究的机遇和理科专业的课堂经验，在小主要本科院校和激励下一代生物医学科学家。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
作者宣称对本文没有利益冲突。
Acknowledgments
笔者想感谢药长老会学院派研究办公室本项目通过小药店奖研究与协作（SPARC）奖的资金支持。作者感谢约翰·Smink先生，水产动物研究实验室经理，克莱姆森大学，克莱姆森，SC为他的技术援助的手稿版本。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Item | Brand | Quantity | |
| 74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit | Style Selections | 1 | |
| 18-Gallon General Bucket/Tote | Centrex Plastics: LLC Rugged Tote | 1 | |
| 6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord | Master Electrician | 1 | |
| 9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp | Smartpond | 1 | |
| Whole House Water Replacement Filter | Whirlpool | 6 | |
| Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing | Whirlpool | 2 | |
| Thread Seal Tape | William H Harvey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC PVC Cement | Oatey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC Primer | Oatey | 1 | |
| 1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing | Mister Landscaper | 1 | |
| 1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve | Mister Landscaper | 33 | |
| 9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter | Mister Landscaper | 6 | |
| Drop-In Filter with House | Whirlpool | 6 | |
| 2-in Dia 90-Degree PVC Elbow | LASCO | 3 | |
| 2-in Dia 90-Degree Tee | LASCO | 3 | |
| 3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow | LASCO | 15 | |
| 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 7 | |
| 3/4-in Dia PVC Tee | LASCO | 12 | |
| 2-in Dia PVC Cap | LASCO | 3 | |
| 1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 2 | |
| 3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve | American Valve | 5 | |
| 1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | Lasco | 8 | |
| 3/4-in Dia PVC Cap | Lasco | 1 | |
| 2-In x 5-Ft Pvc Pipe | Charlotte Pipe | 4 | |
| ¾-In x 10-Ft Pvc pipe | Charlotte Pipe | 3 | |
| 11/16x1-7/80 PVC ring | SXT | 10 | |
| ½” PVC male adapter | SXT | 1 | |
| ¾” PVC coupling | SXT | 1 | |
| ½” PVC female adapter | SXT | 1 | |
| link | |||
| 1.8 L Dual Beta Keeper | Top Fin | 27 | |
| ¾” PVC male adapter (w/ #18 O-ring) | SXT | 28 | |
| 90-degree ¾” threaded PVC elbow | SXT | 27 | |
| Fine Mesh | N/A | 1 yard | |
| Bulkhead Connector | N/A | 1 | |
| Hacksaw | N/A | 1 | |
| Drill | N/A | 1 | |
| Hole saw | N/A | 1 | |
| Adjustable Wrench | N/A | 1 | |
| Pliers | N/A | 1 | |
| Tape Measure | N/A | 1 | |
| Safety Glasses | N/A | 1 | |
| Work Gloves | N/A | 1 |
References
- Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , 3rd ed, Academic Press. New York, New York. (2010).
- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P.
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196 (2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
