Abstract
In vivo מחקר הביו-רפואי הוא ציר מרכזי לתרגם בממצאים חוץ גופית להתקדמות קלינית. מוסדות אקדמיים קטנים עם משאבים מוגבלים מוצאים את זה כמעט בלתי אפשרי לבנות ולתחזק מתקני מכרסמים אופייניים למחקר. מחקר דג הזברה כבר הוכיח להיות חלופה רבת ערך למחקר in vivo בפרמקולוגיה, פיזיולוגיה, פיתוח ומחקרים גנטיים. מאמר זה מדגים כי מתקן דג הזברה פונקציונלי יכול להיות בנוי בצורה קלה ובמחיר סביר. אנו מראים כי מתקן כזה יכול להיות בנוי כביום עבודה עם כלים ומומחיות מינימאליים. עלות מתקן דג הזברה 27 1.8 L האקווריום נבנה במחקר זה הייתה כ 1500 $. אנו מעריכים כי התחזוקה של מושבה דגים ראשונית עבודה 150 במשך 3 חודשים היא 1,000 דולר. תלמידים זה פרויקט מעורב, שהוכנסו לaquaculturing של דג הזברה למחקר מציע.
Introduction
In vivo מודלים חיוניים במחקר ביו-רפואי מקיף שכן הם מאפשרים במחקר מבחנה להיות מתורגמים ברמת המערכת והאורגניזם. לדוגמא, מחקר עם יונקים קטנים, כלומר מכרסמים, הוכח צורך בפיתוח תרופות ובשיפור של תרופות זמינות. עם זאת, את המורכבות (כספי ולוגיסטי) עלולות להפוך אותו לכמעט בלתי אפשרי לבנות ולתחזק מתקני מכרסם לניסויים במוסדות אקדמיים מציע מחקר קטנים. עם זאת, במחקר vivo יכול להתבצע באמצעות בעלי חיים אחרים הדורשים לוגיסטיקה פחות משוכללת. דג הזברה (Danio rerio) שימש בהצלחה כמודל in vivo ללמוד גנטיקה, התפתחות, הפתופיזיולוגיה, ו1,2,10,11,12 פרמקולוגיה. המתקנים הנדרשים לבית דג הזברה לניסויים הם יחסית פשוטים ומשמעותי פחות יקר בהשוואה לrמתקני אודנט. קים et al. 3 תארו לאחרונה בפירוט מערכת דיור דג הזברה 80 טנק שיכול להיות בנויה לכ -1,500 דולרים, שכולל שני חלקים ועלויות עבודה. זה עומד בניגוד מוחלט לכמעט 8500 $ שיידרשו לרכוש מערכת מוכנה, 80 טנקים ממספר כלשהו של ספקים מסחריים. עם זאת, התיאור שניתן על ידי אל קים et. יכול להיות מסובך וקשה לעקוב אחרי יותר עבור משתמשים חדשים של מחקר דגים. אנו מאמינים כי מתקן דג הזברה יכול להיות בנוי באופן פשוט להשקעה של 1,500 דולר.
הקמת מתקן in vivo במוסדות אקדמיים קטנים מספקת הפקולטות שלהם כלי נוסף שבה לייצר מחקר יותר חזק ויסודי. במבחנה נתונים נתמכים על ידי in vivo תוצאות בדרך כלל לייצר מחקר ביו-רפואי מקיף יותר מאשר נתונים המתקבלים באמצעות רק בגישות חוץ גופית. לכן,יישום מתקן מחקר in vivo ישפר במידה ניכרת את הצלחת המוסד במאמצי המחקר הכולל שלה (חשיפת סטודנט למחקר, פרסומים, תקשורת, מרדף אחר מימון חיצוני, וכו '.).
הקמת מתקן דג הזברה כמו זה שתואר במחקר זה היא אידיאלית עבור מוסדות אקדמיים מחקריים עם מתקנים מוגבלים (או במוסדות ללא in vivo מתקני מחקר) בהצרת פעמים פיננסיות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
הערה: פרוטוקולים אלה עוקבים אחר ההנחיות בIACUC של Presbyterian מכללה.
1. חומרים רוכשים מפורטים בטבלה 1.
2. להרכיב 5 המדף Chrome על פי הוראות היצרן. זה ישמש לבית המתקן.
3. לבנות מערכת סינון (איורים 1 א ו -2) המאגר והמים.
- שימוש באיור 1 א כמדריך, פריסת דלי 18 ליטר, משאבה, המסננים ומנורת UV כדי לקבוע את מיקום התקנה סופית וגודל.
- ברגע שהחלקים מונחים, למדוד ולחתוך "צינור PVC ¾ לאורך הדרוש להרכבה. להשתנות האורכים של כל הצינורות בהתאם לצרכים ספציפיים ומגבלות שטח.
- להרכיב צינורות ואביזרים כפי שהותווה בעבר תוך שימוש בפריימר PVC והמלט, ראה להלן (3.3.2 ו3.3.3).
- חול קצות החתך של הצינור עם נייר זכוכית עד שהם חלק למגעד אין פסולת.
- ראש מחוץ לצינור ואת החלק הפנימי של הולם עם פריימר PVC שנרכש עם הספוגית הכלולה מפריימר PVC.
- מלט הצינור והולם יחד על ידי יישום מלט PVC לחלק החיצוני של הצינור באמצעות הספוגית הכלולה. חזור לכל הצעדים שצריכים מלט PVC.
- מניחים את דלי 18 ליטר לצד אחד של בניית המדף.
- התקן מחבר מחיצה בצד של טנק המאגר.
- צרף "צינור PVC ¾ למחיצה.
- חבר את הקצה השני של "צינור לכניסת המשאבה באמצעות ¾" ¾ הליכי להפוך הולם.
- חבר את המסננים למשאבה באמצעות שני מרפקים 90 מעלות ו¾ "צינור PVC.
- השתמש במסנן נייר אחד ואחריו מסנני פחם פעילים אחד כדי לסנן פסולת ולהפחית את רמות הכלור וכימיות במים.
- חבר את מנורת UV לaccordi המסנניםng להוראות היצרן.
- צרף את מערכת סינון המשאבה והצד העליון של המדף הראשון של המתלה באמצעות קשרי חוט. להשתנות סדר ההרכבה והמצורף בהתאם לגודל והפריסה של המדף / המדף שנבחר.
- להוסיף bioball 1 לגלון מים למאגר המים ברגע שמערכת מסנן המשאבה והם התאספו ומחוברים למדף.
4. לבנות הקו הראשי האספקה (1B דמויות ו -2).
- למדוד ולחתוך חתיכה של ¾ "צינור PVC כדי לחבר את מנורת UV לאספקה העיקרית
- השתמש "טי PVC להתחיל נתיב האספקה העיקרית על ידי חיבור טי ל¾" ¾ פליטת PVC מגיעה ממסנן UV. .
- להוסיף שסתום על-off לתחתית טי PVC לשמש ניקוז לשטיפת תחזוקה של המערכת.
- התחל נתיב האספקה העיקרית של מהחלק העליון של ¾ "טי PVC על ידי מדידה וחיתוך ¾" PVCצינור לאורך רצוי לספק צינורות הזנה לכל אחד מהמדפים על המדף.
- התקן ¾ "טיז PVC לקווים אופקיים שייכנסו כל מדף של המדף.
- לחלופין (והציע), להוסיף ¾ "על-off שסתום עבור כל קו אספקת מדף כדי לאפשר בידוד של כל מדף ועיצוב המודולרי של המערכת.
- השתמש "צינור PVC ¾ כלחץ צמצום קו על המדף העליון. אם הקו הזה פועל על חלקו האחורי של המדף, להשתמש מדף זה לאחסון. בסופו של לחץ צמצום קו בקו הפליטה העיקרי (איור 1) עם ¾ "שסתום על-off.
- ברגע שהצעדים לעיל הושלמו, ראש ולחזק את צינור PVC יחד כפי שנעשו בעבר בעת בניית מערכת המאגר וסינון.
5. לבנות הקו הראשי הפליטה (1C דמויות ו -2).
- הפעל את האורך האנכי של קו הפליטה העיקרי לצד השני של f המדף האחררום נתיב האספקה העיקרית. השתמש בצינור PVC 2 "עבור קו אנכי זה כדי לקבל את נתיב האספקה העיקרית בשורות העליונה וניקוז מהטנקים דגים מכל מדף.
- חותך את החתיכות של 2 "צינור PVC לקו הפליטה העיקרי האנכי ולהשתמש 2" טיז PVC לקבל קווי ניקוז האקווריום מכל מדף. בסופו של קו הפליטה העיקרי במניות הטנק לגרש את המים הממוחזרים על פילטר ספוג.
- חותך אינץ 'אחד פתיחה לכל אורך חלקי צינור 2 "PVC ולצרף לקו פליטה העיקרי אנכי עם PVC T לקווי ניקוז אופקיים מהטנקים הדגים.
- כובע 2 "קווי ניקוז אופקיים עם 2" כובע PVC.
- ראש ולחזק את החלקים באמצעות אביזרים הדרושים (מחברים, פטמות או מרפקים).
6. לבנות טנקי דגים (איור 3).
- עם המקדחה, לחתוך "חור בחלק האחורי של האקווריום 1" 1 1/8 מתחת לקצה העליון במסור חור.
- צרף ולהדק 90 מעלות 3/4 "הליכי מרפק PVC למתאם הזכר ליצירת צינור פליטת האקווריום. להוסיף חתיכת רשת בסדר לפני הברגת אגוז ההחזקה כדי למנוע דג הזברה עוברת מערכת הפליטה.
- מניחים את האקווריום עם סיום צינור הפליטה שלו למרחב הפתוח של קו הניקוז מאחורי הטנקים
7. החל מערכת המים
- בכמה מכולות, כמו זו המשמשת למאגר, למדוד שלוש פעמים את כמות מים הכלול בתוך המערכת. בואו מים זה לעמוד בטמפרטורת חדר למשך אוויר במשך 48 שעות.
- מוסיף מים למערכת ולתת לו לזרום למינימום של 3 ימים.
- להחליף את המים במערכת במרץ לאורך 3 הימים הראשונים של מחזור דם כדי להיפטר המערכת של tha מזהמיםt מתגורר בתוך הצינורות.
- להוסיף דג הזברה המתנע ולאפשר מחזור החנקן להתבסס. לנרמל pH ל7. עקביים שמור שבע דג הזברה ל1.8 L, ולהאכיל אותם פעמיים ביום במהלך ימי שבוע ופעם ביום במהלך סופי השבוע כפי שהוצע על ידי 4 Linbo וMcNabb 6.
- צג חנקתי (<75 מ"ג / ליטר), ניטריט (<10 מ"ג / ליטר), ואמוניום (0 מ"ג / ליטר) ביום בשבוע הראשון לאחר הוספת דגים, ורמות פעמיים בשבוע רצויים פעם אחת נשמר עם שינויי מים סדירים .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
בנייה של מערכת השאיבה וFlters
ברגע שהמדף מורכב ולהגדיר את הצעד הראשון הוא לבנות את מערכת המשאבה ומסנן. המסננים מחוברים למשאבת המערכת ונמצאים מעל לרמה התחתונה של המדף הראשון, המאפשר לתחזוקת מסנן קלה והחלפה. באופן דומה, מנורת UV מחוברת עם צינור PVC למסנן ונערכה במקום עם קשרי חוט פלסטיק כדי לאפשר להחלפה קלה של מנורת UV לפי צורך (איור 4 א). מייד לאחר משאבת מסנן נייר, מסנן פחם פעיל, ומנורת UV מותקנים באמצעות צינור PVC. Bioballs מתווספים לטנק כדי לספק משטח לצמיחה של חיידקים, אשר ממירה פסולת אמוניה רעילה לחנקות. bioball אחד לכל גלון של מים במערכת הוא אזור מספיק כדי לאפשר התפתחות חיידקים. המכסה של מאגר הפלסטיק יכולה להיות מצוידת כך שבמקרה של הצפת bioballs יישאר במאגר וסיכויי contamination הוא מזערי. למרות שאירוע הצפה הוא מאוד לא סביר, מערכת ניקוז (הוספת ניקוז צינור בחלק העליון של המאגר) היא תוספת קלה שניתן לעשות במערכת.
בנייה של ראשי אספקת הקו
הצעד השני הוא להרכיב את קו אספקת מים הראשי שיאכיל כל תא שיכיל את טנקי דג הזברה (איור 4). קו זה מחובר למנורת UV עם חתיכת צינור PVC. קו זה עובר אנכי ורוחבי למדף באמצעות טי PVC. הקצה התחתון של טי משמש לחיבור חתיכת צינור PVC שתשמש כסתום ניקוז למערכת כולה.
הקווים העיקריים המזינים את הטנקים לרוץ אופקי לארבעה מדורים: גבי המדף השני, החלק עליון של המדף השלישי, עליון של המדף השלישי, וחלק תחתון של המדף החמישי. מאז החלק העליון של קווי המדף השני, שלישיים והרביעי לספק מים למכלי הדגים הם רצים בmidlinדואר של המדפים. בכל אחד מהקווים האלה שסתומים בודדים על-off, המאפשר השליטה של תאים בודדים.
סעפת השקיה 9 יציאה מחוברת לקצה של הקווים אופקיים, וirrigators אלה לספק מים למכלי דגים דרך "צינור גמיש ¼ (איור 4). כל יציאה של סעפת ההשקיה יש שסתום שנבנה ב- off. בנוסף, שסתום על-off ממוקם בסוף צינורות מחוברים לכל יציאה, בסמוך לכניסת האקווריום, לגישה קלה וזרימת מים שליטה. צינורות יוכנסו לתוך הטנק על ידי חור שנקדח לתוך המכסה. זה יסייע בשמירה על הצינור מחובר היטב למכל.
הקו שפועל על גבי המדף החמישי משמש כמשכך לחץ והיא נשלטת עם שסתום על-off בודד. מומלץ לי הקו הזה לרוץ בחלק האחורי של המדף החמישי, כך שאזור זה יכול לשמש לאחסון. מאז מאיקו n פועל על קו האמצע של הצד של המדף, הוא הביא לחלק האחורי באמצעות מרפק PVC וחתיכת צינור PVC, ולאחר מכן הוא פועל longitudinally (אופקי) כקו משככי לחץ באמצעות אחר מרפק PVC וחתיכה של צינור PVC. קו משככי לחץ מסתיים בקו הפליטה העיקרי שעובר אנכי בצד השני של המדפים האחרים ומסתיים במאגר המים (קו פליטה זו עשוי מצינור PVC 2 ", ראה בהמשך).
בנייה של קו הפליטה ראשי
השלב השלישי הוא להרכיב את מערכת הפליטה, אשר פועלת רוחבית למעמד, בצד שבו מאגר המים ממוקם (איור 4C). מערכת זו נבנתה באמצעות 2 צינור PVC "ואוספת את המים שמגיע מקו משככי הלחץ, ומהאקווריום ניקוז (ראה בניית האקווריום בהמשך). קו הפליטה העיקרי עובר אנכי, המחבר את הקו משכך את הלחץ על חלקו העליון של ארון התקשורת וכלה במים מחדשservoir. כמו כן, קו הפליטה העיקרי מקבל ניקוז מהטנקים הדגים דרך צינורות PVC 2 "אופקיים המתחברים לקו הפליטה העיקרי באמצעות טיז PVC. יש צינורות ניקוז אופקיים אלה חתך אורכי '1 לקבלת המים ניקוז מהטנקים הדגים (ראה להלן). קווי ניקוז אופקיים אלה לפעול בחלק האחורי ועל החלקים התחתון של המדפים ויש לי שיפוע קל המאפשר למים מנוקזים לרוץ לקו הפליטה העיקרי על ידי כוח הכבידה. רפידות מסנן ספוג מתווספות לקווי הניקוז האופקי כך שהמים ניקוז האקווריום נופלים על ספוגים ומסננים את פסולת. מערכת הורכבה כולו היא בתמונה באיור 5.
בנייה של טנקים דגים
האקווריום נציג מוצג באיור 6. סוף שורת ניקוז טנק הדגים ממוקם לתוך קו הניקוז האופקי (ראה לעיל סעיף על קו פליטה). רשת תיל מוכנסת לתוך קו הניקוז באקווריום כדי למנועדג הזברה מחייה מחוץ לטנק. יש טנקים בפרט אלה מכסים המונעים את הדגים לברוח וגם למזער הזדמנויות זיהום. אם מתרחשת הצפת מכסי מיכל ימנעו מדגים נופלים לרצפה. טנקים עם מכסים הם אידיאליים, אבל אם מערכת בנויה המכילה טנקים ללא מכסים ואז חור קטן עשוי להיות קדח בחלק העליון של המכל. זה יאפשר מים לברוח בזמן למנוע דגים לברוח.
מתפקד
מושבה דג הזברה יכולה להיות מתוחזק על ידי פרוטוקולים זמינים והקימו מתוארים במקומות אחרים 3 6. בקצרה, המתקן שלנו מאפשר לי משאבת המערכת כדי להפיץ את המערכת כ 75 פעמים בשעת הנפח, על ידי התאמת קצב זרימה לכל מבוגר (או דגי טנק זחל) בכ -85 מיליליטר / דקה (או 45 מיליליטר / דקה לדגי טנק זחל) . איכות מים נשמרת על ידי סינון ביולוגי פעיל ושינויי מים בקנה מידה קטנה (~ 5% מאמצעי האחסון של המערכת) לפי צורך. מעקב יומישל pH, מוליכות, רמות חמצן מומס (DO), וטמפרטורה הן הכרחיות כדי לשמור על תנאים עקביים. ערכות הם זמינים מסחריים כדי למדוד pH ולעשות רמות. מטר מוליכות זמין גם עבור רכישה. על מנת לבחון המשתנים הללו יומיים, להסיר 250 מיליליטר של מים מהמאגר ולבצע ניתוח. רמת החומציות יש לשמור על 7.2, DO צריך להיות מ"ג פחות מ -6, ומוליכות בין 500 מייקרו-שני ו1,300 מייקרו-שני. (מקור כאן) טמפרטורה חייבת להישמר על 28.5 מעלות צלזיוס. תחזוקת מערכת רגילה (3-4 שבועות) כוללת 30% שינוי משוער מים וניקוי והחלפה של רפידות מסנן ופחם.
איור 1: שלושה מרכיבים עיקריים של מתקן דג הזברה. א מערכת המשאבה ומסננים נמצאות בחלקו התחתון של המדף (הראשונהמדף) ולחבר את מניית מיכל מים עם קו האספקה הגדול. B. קו האספקה העיקרי נובע ממנורת UV ומספק מים לשלושה מדפים העליונים המכילים את טנקי דגים. שים לב שכל תא מדף מסופק באופן עצמאי וניתן לשלוט בנפרד (או לבטל) באמצעות שסתום. קו ראשי זה יש גם את שסתום הניקוז הראשי בקצה התחתון, ובקצה העליון ממשיך כקו משככי לחץ שמסתיים בקו הפליטה העיקרי. ג קו הפליטה העיקרי מקבל מים משורת משככי לחץ ומשונה תאי טנק דגים ומסתיימים בבורסת המים הטנקים. שים לב שלכל מדף קו פליטת האקווריום שהם צינורות PVC וlongitudinally פתוחים לקבל מים למכלי דגים בודדים. קווים אלה מעט נוטים לאפשר למים המנוהלים על ידי כוח משיכה אל קו הפליטה העיקרי.אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 2:. שלושה מרכיבים עיקריים של מתקן דג הזברה התאסף וקלות פונקציונלית שים לב שהמניה המים הטנק כבר יש bioballs. המים מקו הפליטה העיקרי ייפלו על פילטר ספוג מונח על רשת מעל למפלס המים (לבהירות זו אינה מתוארת באיור). שים לב כי לבהירות יש המדף השני רק כמה טנקי דגים מתוארים, יש משטף מוצג רק 4 צינורות אספקה, וקו פליטת טנק דגים הוא שקוף. כל מדף של המתלה יכול להחזיק תשע 1 טנקי דגי L ויש לי משטף 9 נמל.
איור 3:. טנק יחידת דגי האקווריום נרכש בחנות לחיות מחמד רגילה ויש לה קיבולת 2 ליטר מערכת האקווריום א ניקוז בנויה על ידי קידוח "חור 1 1/8 בצד האחורי של. הטנק, אז 3/4 "חלקי צינור PVC ממוקמים בהפוכה" "צורה באמצעות 3/4" L מרפק PVC. מערכת ניקוז זו תיפול בצד הפתוח של קווי פליטת האקווריום ממוקמים בחלק האחורי של טנקי הדגים. תמונה ב 'המתארת את ההתקנה של רשת למערכת ניקוז האקווריום. הרשת מונעת מדג הזברה מתרוקן לקווי הפליטה.
איור 4: בניית חלקים בודדים. א מערכת שלוש מסנן והמשאבה היא על המדף התחתון של המערכת. המשאבה מחוברת לשלושה mechan מסנני iCal ואחריו מסנן UV לחסל מזהמים ממי המערכת. B. קו האספקה האופקי מסתיים בסעפת השקיה 9 נמל, שתספק מים וחמצן טריים לכל טנק. קו האספקה לכל מדף יש שסתום על-off, שניתן להשתמש כדי לעצור את המים לכל מדף לצורך ניקוי והסגר. ג קו פליטת טנק הדגים מתרוקן לתוך קו הפליטה העיקרי להזין מחדש את מחזור הדם. קו הקלת לחץ גם מתרוקן לתוך קו הפליטה העיקרי.
איור 5:. מערכת שהושלמה המערכת הושלמה מכילה מערכת משאבה ומסננים, קו אספקה אנכי עיקרי, קו אספקה אופקי לכל מדף, קו פליטת טנק, קו הקלת לחץ, וקו פליטה עיקרי למערכת מחזור כלולה .
ithin-page = "תמיד"> 
איור 6:. האקווריום נציג האקווריום מכיל קו ניקוז שיחבר עם קווי ניקוז אופקיים במערכת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
מטרתו העיקרית של מאמר זה היא להוכיח כי הקמת מתקן דג הזברה פונקציונלי היא לא מסובכת ויכולה להיות שנבנתה על ידי חוקרי דגי טירון עם ידע מינימאלי בנייה. יתר על כן, מאמר זה מראה כי החומרים למתקן דג הזברה פונקציונלי זה ניתן לרכוש בקלות ובעלות סבירה מחנויות אספקת חיית מחמד מקומיות או חנויות לחומרי בניין. ברגע שכל החומרים והכלים שרכשו את בנייתה של המערכת והטנקים הדגים לוקח בערך יום עבודה. 72 שעות ההפעלה הראשונה מאפשרת כישלון כלשהו במערכת, כגון דליפות או לחץ מים נמוך, שייקבע. זה הפעלה הראשונה גם מאפשרת למזהמים במערכת שיש להסירו ממחזור. לדוגמא, דבק PVC עשוי להכיל חומר אורגני מסוכן שיוסר במהלך כמה השעות הראשונות של מחזור דם. המערכת כוללת שסתום ניקוז ראשי שמאפשר ומקל על ההתאמה של עוצמת קול ומים החלפה לאספקה אהה. בנוסף, המערכת כוללת קו משככי לחץ שגם מאפשר ההתאמה של לחץ מים. קו זה שימושי כאשר רק אחד או שני תאים (מדפים) ישמשו כן הוא מאפשר הוויסות של לחץ מים.
המתקן הוא מודולרי בעיצוב המאפשר הניצול של 1, 2 או 3 תאים (36 טנקי דגים של 1.8 L) כדי לענות על הצרכים הקיבולת של חוקרים פרטיים. השסתומים על-off להציב בכל תא להקל על הבידוד של החלקים השונים של המערכת. מערכת שסתום זה שימושי גם כדי למנוע הפצת זיהום פוטנציאלית, וכדי להקל על הניקוי של המערכת על ידי תאים. בנוסף, יש כל אספקת מים טנק דגי שני שסתומים, אחד במשטף 9 נמל ואחד בצינור גמיש בכניסה לאקווריום. מערכת שסתום כפולה זה מאפשר כוונון עדין של לחץ מים וגם להקל על הליכי ניקוי או מיצוי דגים או מניפולציה.
t "> תיעוד נכון של אמוניה, ניטריט וניטראט הוא חיוני לתפקוד התקין של המתקן. לשם כך, bioballs חשוב מכיוון שהם מספקים שטח מספיק לחיידקים ניטיריפיקציה לצמיחה. ברגע שמושבת הדגים היא יציבה, יכול המתקן ניתן לשנות בקלות להשתמש בטנקי דגים גדולים יותר או קטנים יותר. כמו כן, המתקן יכול להיות שונה כדי להתרבות דג הזברה הבאה הפרוטוקולים זמינים בספרות 5. יתר על כן, המתקן יכול להיות שונה כדי להוסיף מודולים או מדפים אחרים כדי להרחיב את היכולות של המערכת .הזרימה של מים מתוקים לתוך הטנק מספקת חמצן טרי מספיק כדי שאין צורך להוסיף oxygenator נוסף. חילופי האוויר המתרחשים במאגר המים הוא מקור מספק של חמצן. אם טנקים גדולים יותר נמצאים בשימוש אז מקור חמצן נוסף ניתן להוסיף. כמו כן יש לציין כי ללא זרימה של מים מתוקים לתוך טנק הדגים ייחנקו, כך הוא חיוני, כי זרימת מים בדואר פיקוח הדוק כדי להבטיח שום דבר לא חוסם את קווי מים. זה חיוני כי טמפרטורת מים להישמר על 28.5 מעלות צלזיוס. טמפרטורה קבועה עשויה להיות מושגת על ידי שמירה על טמפרטורת החדר שבו המערכת שוכנת על 28.5 מעלות צלזיוס. לחלופין, מקור חימום האקווריום ניתן לרכוש על מנת לשמור על טמפרטורה קבועה. שמירה על איכות מים היא חיונית לתוצאות ניסוי עולות בקנה אחד. ישנם מקורות רבים זמינים כדי לעזור לקבוע פרמטרים של איכות מים מדויקים המבוססים על תנאי ניסוי.
טנקי דגים מנוקים כל 7 - 10 ימים ולאחר מכן ריססו עם אלכוהול 70% לפני שימוש חוזר. הוא הציע גם שמעמד הכרום לנקות ומיובש בשלב זה כדי למנוע חלודה ולבנות. אם סימנים של זיהום הם נצפו, טנקים בודדים לחטא עם פתרון אקונומיקה 2% 8. בריאות כללית היא פיקוח עם תשומת לב מיוחדת לסימני זיהום (נפיחות, כיבים בעור, exolpthalmia, לצבוע את, וכו '.), מחלה בועת גז (עקב ריכוזי רווית גז, שינויים מהירים בטמפרטורות מים, בעיות במערכות אינסטלציה), היפרפלזיה זימים (רמות גבוהות של אמוניה, נחושת, אבץ או נערת מקהלה פעילה במים) , עקמת (עקב מחסור בויטמין C) או דלקת ביצה קשורה וfibroplasias (בשל החזקת ביצה נשית שדוחף את דופן הבטן).
הבנייה של מתקן זה היא גמישה ומאפשרת למערכת קטנה או מורחבת. על ידי לקיחת רעיונות הבנייה הבסיסיות, מתקן זה יכול להיות מסודר שיתאים לצרכימי מחקר בסיסיים בגדלים שונים. בגלל הבנייה עשויה להשתנות ממוסד, השלב הקריטי ביותר בפרוטוקול הוא לרוץ 72 שעות הראשונות, והמעקב היומי של אמוניום חנק, ורמות ניטריט במהלך השבוע של הבנייה הראשון. איכות מים מצוינת תסייע בשמירה על בריאות הדגים. רבים מהפרוטוקולים הנוכחיים זמינים עבור תוכנה לדגים סביריםמ 'דורש זרימת מים באוויר פתוח 3. יש מים מוגנים מהאוויר הפתוח ממזער סיכוי לזיהום מים ואידוי. תחזוקה במערכת סגורה היא מינימאלית בהשוואה למערכות באוויר הפתוח המשותפים.
אם מתעוררות בעיות בהקמת המתקן (הדליפות, לחץ מים נמוכים, וכו '.) אחד יכול להחליף צינור ביצרו פשוט על ידי גזירה ממקום לדאגה במתקן והחלפת החלקים באותו אופן הצעד חכם כמפורט לעיל . מערכת זו עלולה להיות פגיעה לאובדן מים גדול עקב דליפות קטנות, אשר עשוי להיות מסוכנות לדגים אם עזבו מעיניהם. להשקעה מינימאלית מכשיר כיבוי לצוף יזהה כאשר מפלס המים ירד מתחת לסף בטוח ולסגור את המערכת. זה עשוי להיות נחוץ אם מעקב צמוד של המערכת אינו זמין. עם השינויים הנכונים, יש מעט מאוד מגבלות מערכת זו עומדת בפני מלבד חוסר הניידות. ברגע שמערכת זו היא לבנותאד קשה מאוד לעבור בלי לחתוך חלקים מסוימים וrecementing במיקום החדש. מגבלת ניידות משמעות הדבר היא כי המערכת תהיה באופן אידיאלי צריכה להישמר בסביבת עבודה אחת. אם הניידות היא רצויה יש שינויים קטנים שיכול להיות עשוי להגדיל את הגמישות. הוסף איחוד בתחילתו של כל אספקה לרוחב, קו הקלת לחץ, פריקת המשאבה, ומעל לשסתום הניקוז. קווי הניקוז יכולים להיות מצוידים יבש במקום מקובע במקום. הוספת צימוד גמיש לסעיף המשאבה גם תסייע בניידות. זהו נוספים
הבנייה והתחזוקה הפשוטה של מערכת זה אומר שפרוטוקולים הנוכחיים מצאו בספרות זמינות למוסדות מחקר קטנים 1,2,10-12. התחזוקה היא פשוטה עושה את זה מערכת אידיאלית למחקר סטודנט לתואר ראשון. מערכת זו היא מצוינת למעבדות מחקר והוראה עצמאיות, גם.
לסיכום, זה סוג שלהמתקן הוא במחיר סביר, קל לבנות, ופונקציונלי לניסויי in vivo. מתקן זה הנו אידיאלי עבור מוסדות עם משאבים מוגבלים ומרחב גידול בעלי חיים מוגבלים. מחקר דג הזברה הוא אזור המשמש לסוגים שונים של מחקרים, כוללים פרמקולוגיה, פיזיולוגיה, התפתחות, או אפילו מחקרים גנטיים. למעשה, מספר רב של מוטציה זמינה או דג הזברה מהונדס תומך בקווים חדשניים של מחקר כמעט בכל תחומי ביו-הרפואה. בנוסף, מערכת זו יכולה לשמש כדי לשפר את הזדמנויות מחקר והתנסויות בכיתה למגמות מדעים במוסדות לתואר ראשון בעיקר קטנים ולעורר את הדור הבא של מדענים ביו-רפואיים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים מצהירים שום ניגוד עניינים למאמר זה.
Acknowledgments
המחברים מבקשים להודות למשרד המחקר של בית הספר לרוקחות במכללה Presbyterian לתמיכה כספית של פרויקט זה באמצעות בית מרקחת פרסים הקטן למחקר ולשיתוף פעולה בפרס (SPARC). המחברים מודים למר ג'ון Smink, מנהל המעבדה לחקר Aquatic בעלי החיים, אוניברסיטת קלמסון, קלמסון, SC לתיקון כתב יד סיוע הטכני שלו.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Item | Brand | Quantity | |
| 74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit | Style Selections | 1 | |
| 18-Gallon General Bucket/Tote | Centrex Plastics: LLC Rugged Tote | 1 | |
| 6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord | Master Electrician | 1 | |
| 9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp | Smartpond | 1 | |
| Whole House Water Replacement Filter | Whirlpool | 6 | |
| Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing | Whirlpool | 2 | |
| Thread Seal Tape | William H Harvey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC PVC Cement | Oatey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC Primer | Oatey | 1 | |
| 1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing | Mister Landscaper | 1 | |
| 1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve | Mister Landscaper | 33 | |
| 9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter | Mister Landscaper | 6 | |
| Drop-In Filter with House | Whirlpool | 6 | |
| 2-in Dia 90-Degree PVC Elbow | LASCO | 3 | |
| 2-in Dia 90-Degree Tee | LASCO | 3 | |
| 3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow | LASCO | 15 | |
| 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 7 | |
| 3/4-in Dia PVC Tee | LASCO | 12 | |
| 2-in Dia PVC Cap | LASCO | 3 | |
| 1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 2 | |
| 3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve | American Valve | 5 | |
| 1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | Lasco | 8 | |
| 3/4-in Dia PVC Cap | Lasco | 1 | |
| 2-In x 5-Ft Pvc Pipe | Charlotte Pipe | 4 | |
| ¾-In x 10-Ft Pvc pipe | Charlotte Pipe | 3 | |
| 11/16x1-7/80 PVC ring | SXT | 10 | |
| ½” PVC male adapter | SXT | 1 | |
| ¾” PVC coupling | SXT | 1 | |
| ½” PVC female adapter | SXT | 1 | |
| link | |||
| 1.8 L Dual Beta Keeper | Top Fin | 27 | |
| ¾” PVC male adapter (w/ #18 O-ring) | SXT | 28 | |
| 90-degree ¾” threaded PVC elbow | SXT | 27 | |
| Fine Mesh | N/A | 1 yard | |
| Bulkhead Connector | N/A | 1 | |
| Hacksaw | N/A | 1 | |
| Drill | N/A | 1 | |
| Hole saw | N/A | 1 | |
| Adjustable Wrench | N/A | 1 | |
| Pliers | N/A | 1 | |
| Tape Measure | N/A | 1 | |
| Safety Glasses | N/A | 1 | |
| Work Gloves | N/A | 1 |
References
- Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , 3rd ed, Academic Press. New York, New York. (2010).
- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P.
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196 (2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
