Abstract
In vivo biomedicinsk forskning er afgørende for at oversætte in vitro-resultater til kliniske fremskridt. Små akademiske institutioner med begrænsede ressourcer at finde det næsten umuligt at opbygge og vedligeholde typiske gnavere faciliteter for forskning. Zebrafisk forskning har vist sig at være et værdifuldt alternativ til in vivo forskning i farmakologi, fysiologi, udvikling og genetiske undersøgelser. Denne artikel viser, at en funktionel zebrafisk facilitet kan bygges på en nem og billig måde. Vi viser, at et sådant anlæg kunne bygges i omkring en arbejdsdag med minimale værktøjer og ekspertise. Udgifterne til 27 1,8 L akvarium zebrafisk facilitet bygget i denne undersøgelse var ca. $ 1.500. Vi vurderer, at opretholdelsen af en indledende bearbejdning 150 fisk koloni i 3 måneder er $ 1.000. Dette projekt involverede studerende, der blev indført for at aquaculturing af zebrafisk til forskning foreslår.
Introduction
In vivo modeller er afgørende i at gennemføre omfattende biomedicinsk forskning, da de tillader in vitro-forskning, der skal oversættes til systemet og organismal niveau. For eksempel, er blevet bevist nødvendige forskning med små pattedyr, nemlig gnavere, i udviklingen af lægemidler og i forbedringen af tilgængelige lægemidler. Kompleksiteten (finansielt og logistisk), kan dog gøre det næsten umuligt at opbygge og vedligeholde gnavere faciliteter eksperimenter foreslår ved små forskningsinstitutioner akademiske institutioner. Ikke desto mindre kan in vivo forskning udføres under anvendelse af andre dyrearter, der kræver mindre omfattende logistik. Zebrafisk (Danio rerio) med succes er blevet brugt som en in vivo-model til at studere genetik, udvikling, patofysiologi og farmakologi 1,2,10,11,12. De faciliteter, der kræves til at huse zebrafisk til eksperimenter er relativt enkle og betydeligt billigere i forhold til rodent faciliteter. Kim et al. 3 har for nylig beskrevet i detaljer en 80 beholder zebrafisk staldsystem, der kan bygges for ca $ 1500, som omfatter både dele og lønomkostninger. Det står i skarp kontrast til de næsten 8500 dollar, der ville være forpligtet til at købe en færdiglavet, 80 tank system fra et vilkårligt antal kommercielle leverandører. Men beskrivelsen af Kim et al. kan være kompliceret og vanskelig at følge for nybegyndere fisk forskning. Vi mener, at en zebrafisk facilitet kan konstrueres på forenklet måde for en investering på $ 1.500.
Etableringen af en in vivo facilitet ved små akademiske institutioner giver deres fakulteter et supplerende redskab til at producere mere kraftfulde og grundig forskning. In vitro-data, der understøttes af in vivo resultater generelt producerer mere omfattende biomedicinsk forskning end oplysninger kun bruger in vitro metoder. Derforimplementering af en in vivo forskning facilitet vil i høj grad styrke institutionen succes i de samlede forsknings- bestræbelser (student udsættelse for forskning, publikationer, kommunikation, udøvelse af ekstern finansiering, osv.).
Opførelsen af en zebrafisk facilitet som den, der er beskrevet i denne undersøgelse er ideel til forskningsinstitutioner akademiske institutioner med begrænsede faciliteter (eller institutioner uden in vivo forskningsfaciliteter) under snærende økonomiske tider.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
BEMÆRK: Disse protokoller følg retningslinjerne i IACUC af Presbyterian College.
1. Erhvervelse af materiel er anført i tabel 1.
2. Saml 5 Hylde Chrome Ifølge producentens anvisninger. Dette vil blive brugt til at huse faciliteten.
3. Construct vandtanken og filtrering system (figurerne 1A og 2).
- Brug af 1A som en guide, layout de 18 gallon spand, pumpe, filtre og UV-lampe til at bestemme den endelige placering installation og størrelse.
- Når dele er lagt ud, måle og skære ¾ "PVC rør til længden er nødvendig for montering. Varier længde af alle rør efter specifikke plads behov og begrænsninger.
- Saml rør og fittings som fastlagt tidligere brug af PVC primer og cement, se nedenfor (3.3.2 og 3.3.3).
- Sand, hvis kanter røret med sandpapir, indtil de er glatte at røre ved end er der ingen rester.
- Prime ydersiden af røret og indersiden af beslaget med den købte PVC primer med den medfølgende vatpinden fra PVC primer.
- Cement rør og fitting sammen ved anvendelse af PVC cement til ydersiden af røret ved hjælp af den medfølgende vatpind. Gentag for alle skridt, der skal PVC cementering.
- Placer 18 gallon bucket til den ene side af hylden konstruktion.
- Installer et skot stik i siden af reservoiret.
- Vedhæft en ¾ "PVC-rør til skottet.
- Fastgør den anden ende af ¾ "rør til pumpens indløb ved hjælp af en ¾" med gevind gøre montering.
- Slut filtrene til pumpen ved hjælp af to 90 graders bøjninger og ¾ "PVC-rør.
- Brug en papirfilter efterfulgt af en aktiveret carbon-filtre for at bortfiltrere snavs og reducerer klor og kemiske niveauer i vandet.
- Slut UV-lampen til filtre according til producentens anvisninger.
- Fastgøre pumpen og filtersystem til oversiden af det første hylde i stativet ved hjælp af wire bånd. Varier rækkefølgen af samling og fastgørelse efter størrelsen og layoutet af hylden / rack valgt.
- Tilsæt 1 bioball per gallon vand til vandtanken, når pumpen og filteret er samlet og fastgjort til hylden.
4. Construct hovedforsyningen linje (figur 1B og 2).
- Mål og skære et stykke af ¾ "PVC-rør til at forbinde den UV-lampe til hovedforsyningen
- Brug en ¾ "PVC tee for at starte den vigtigste forsyningsledning ved at tilslutte tee til ¾" PVC udstødning kommer fra UV-filter. .
- Tilføj en on-off ventil til bunden af PVC tee at tjene som afløb for vedligeholdelse skylning af systemet.
- Start hovedforsyningen linje fra toppen af ¾ "PVC tee ved at måle og skæring ¾" PVCrør til den ønskede længde for at tilvejebringe føderør for hver af hylderne på stativet.
- Installer ¾ "PVC tees for de vandrette linjer, der vil komme ind hver hylde af racket.
- Eventuelt (og foreslået), tilføje en ¾ "on-off ventil for hver hylde tilførselsledning for at muliggøre isolering af hver hylde og en modulær udformning af systemet.
- Brug en ¾ "PVC-rør som en trykreducerende linje på den øverste hylde. Hvis denne linje løber på bagsiden af hylden, bruge denne hylde til opbevaring. Afslut trykreducerende linje i hovedsagen udstødningssystemet (figur 1B) med en ¾ "on-off ventil.
- Når ovenstående trin er afsluttet, prime og cementere PVC rør sammen som tidligere gjort ved beregningen reservoiret og filtrering system.
5. Konstruer den vigtigste udstødningssystemet (figur 1C og 2).
- Kør den lodrette længde af de vigtigste udstødningssystemet til den anden side af racket from den vigtigste forsyningsledningen. Brug en 2 "PVC-rør til denne lodret linje for at modtage den vigtigste forsyningsledning på de øverste og afløbsrør fra fisketankene fra hver hylde.
- Skær stykker af 2 "PVC-rør til den lodrette vigtigste udstødningssystemet og bruge 2" PVC tees til at modtage fisk tank afløbsrør fra hver hylde. Afslut vigtigste udstødningssystemet i bestanden tanken at udvise det genvundne vand over en svamp filter.
- Skær en en tomme åbning hele længden af de 2 "PVC-rør stykker og tillægger lodret vigtigste udstødningssystemet med PVC tees for de vandrette afløbsrør fra akvarier.
- Cap de 2 "horisontale afløbsrør med en 2" PVC cap.
- Prime og cementere brikkerne ved hjælp af de nødvendige fittings (stik, brystvorter eller albuer).
6. Konstruer fisketankene (Figur 3).
- Med boret, skære et "hul på bagsiden af fisk tank 1" 1 1/8 under den øverste kant med et hul sav.
- Vedhæft og spænd en 90 graders 3/4 "threaded PVC albue til den mandlige adapter til at skabe den akvarium udstødningsrøret. Tilføj et stykke finmasket før skrue bedriften møtrik for at forhindre zebrafisk går gennem udstødningssystemet.
- Placer akvarium med sin udstødningsrør slutter i det åbne rum i dræning linje bag tankene
7. Start af vandsystemet
- I flere beholdere, såsom den, der anvendes for reservoiret måle tre gange mængden af vand, der er indeholdt i systemet. Lad vandet stå ved stuetemperatur til konditionering i 48 timer.
- Tilsæt vand til systemet og lad det cirkulere i mindst 3 dage.
- Skift vandet i systemet kraftigt gennem de første 3 dage cirkulation for at befri systemet for forureninger THAt opholde sig rørene.
- Tilføj starter zebrafisk og tillade kvælstofkredsløbet at få etableret. Normalisere pH til en konsekvent 7. Må syv zebrafisk per 1,8 L, og fodre dem to gange dagligt under uge dage og én gang dagligt i weekenden som foreslået af Linbo 4 og McNabb 6.
- Overvåg nitrat (<75 mg / L), nitrit (<10 mg / L), og ammonium (0 mg / L) dagligt i den første uge efter tilsætning fisk, og to gange om ugen, når det ønskede niveau er blevet opretholdt med vand forandringer .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Opførelse af pumpen og Flters System
Når stativet er samlet og sat op det første skridt er at opbygge pumpe og filter system. Filtrene er forbundet til systemet pumpe og er placeret over det nederste niveau af det første hylde, der giver mulighed for nem filter vedligeholdelse og udskiftning. Tilsvarende er UV-lampen er forbundet med PVC-rør til filteret og holdes på plads med plast wire bånd for at muliggøre nem udskiftning af UV-lampe efter behov (figur 4A). Umiddelbart efter pumpen et papirfilter, aktivt kul filter, og en UV-lampe er installeret via PVC-rør. Bioballs tilsættes til tanken for at tilvejebringe overflade til vækst af bakterier, som omdanner giftigt ammoniak affald til nitrater. Én bioball per gallon af vand i systemet er tilstrækkeligt areal til at tillade bakterievækst. Låget af plastic reservoir kan monteres, så i tilfælde af overløb de bioballs forbliver i reservoiret og chancerne for kontamination minimeres. Selvom et overløb begivenhed er meget usandsynligt, et drænsystem (tilsætning af et rør afløb på toppen af reservoiret) er en let tilføjelse, der kan gøres til systemet.
Opførelse af Main forsyningsledningen
Det andet skridt er at samle den vigtigste vandforsyning linje, der vil fodre hver rum, der skal indeholde de zebrafisk tanke (figur 4B). Denne linie er forbundet til UV-lampe med et stykke PVC-rør. Denne linje kører lodret og sidelæns til racket gennem en PVC tee. Den nederste ende af tee bruges til at forbinde et stykke PVC-rør, der vil tjene som en drænventil for hele systemet.
De hovedlinjer, der sætter tankene løber vandret til fire kamre: toppen af den anden hylde, toppen af den tredje hylde, toppen af den tredje hylde, og bunden af den femte hylde. Siden toppen af det andet, tredje og fjerde hylde linjer giver vand til akvarier de kører på midline af hylderne. Hver af disse linier har individuelle on-off ventiler, som tillader kontrol af individuelle segmenter.
En 9 port kunstvanding manifold er fastgjort til enden af de vandrette linjer, og disse vandingsanlæg levere vand til fisketankene gennem en fleksibel ¼ "slange (figur 4B). Hver havn i kunstvanding manifold har en indbygget on-off ventil. Desuden er en on-off ventil placeret ved enden af slangen er fastgjort til hver port, nær akvarium indgangen, for nem adgang og vandmængde. Slangen vil blive indsat i tanken ved et hul boret i låget. Dette vil hjælpe med at holde slangen fast indsat i tanken.
Den linje, der kører på toppen af den femte hylden anvendes som et tryk reliever og det styres med en individuel on-off ventil. Det anbefales at have denne linje køre på bagsiden af det femte hylde, så at dette område kan anvendes til opbevaring. Da main linje kører på midterlinjen af den side af stativet, er det bragt til bagsiden ved anvendelse af et PVC albue og et stykke PVC-rør, og derefter løber i længderetningen (vandret) som trykket reliever linje ved hjælp af en anden PVC albue og et stykke PVC-rør. Trykket reliever linje ender i udstødnings- linje, der løber lodret på den anden side af stativerne og ender i vandbeholderen (dette udstødningssystemet er fremstillet af 2 "PVC-rør, se nedenfor).
Opførelse af Main udstødningssystemet
Det tredje trin er at samle udstødningssystemet, som løber lateralt til rack, ved den side, hvor vandreservoiret er placeret (figur 4C). Dette system er bygget ved hjælp 2 "PVC-rør og indsamler det vand, der kommer fra det pres reliever linje, og fra fisk tank afdrypning (se akvarium konstruktion nedenfor). Den vigtigste udstødning linje løber vertikalt, der forbinder trykket reliever linje på toppen af stativet og slutter i vandet reservoir. Også den vigtigste udstødningssystemet modtager afløbet fra fisketankene gennem vandrette 2 "PVC-rør, der forbinder til de vigtigste udstødningssystemet via PVC tees. Disse horisontale drænrør har en 1 'langsgående snit at modtage afløbsvandet fra fisketankene (se nedenfor). Disse horisontale afløbsrør løber på bagsiden og på de nederste dele af hylderne og har en mindre hældning, der tillader den drænede vandet løbe til de vigtigste udstødningssystemet ved hjælp af tyngdekraften. Sponge filterpuder føjes til de vandrette afløbsrør så akvarium drænvand falder på svampe og filtrerer snavs. En hel samlet system, er afbilledet i figur 5.
Konstruktion af akvarier
En repræsentativ akvarium er vist i figur 6. Enden af akvarium drænledningen anbringes i den vandrette drænledningen (se ovenstående afsnit om udstødningssystemet). Et trådnet indsættes i drænledningen i akvarium for at forhindrezebrafisk fra svømning ud af tanken. Disse særlige tanke har låg, der forhindrer fiskene i at slippe ud og også minimere mulighederne forurening. Hvis overløb opstår tanken låg vil forhindre fisk i at falde til gulvet. Tanke med låg er ideelle, men hvis et system er bygget som indeholder tanke uden låg derefter et lille hul kan boret nær toppen af tanken. Dette vil give vand til at flygte, mens forhindre fisk i at undslippe.
Fungerende
En zebrafisk koloni kunne opretholdes ved tilgængelige og etablerede protokoller, der er beskrevet andetsteds 3- 6. Kort fortalt vores anlæg giver systemet pumpe til at cirkulere systemet volumen ca. 75 gange pr time, ved at justere strømningshastigheden for hver voksen (eller fiskelarver tank) på ca. 85 ml / min (eller 45 ml / min for fiskelarver tank) . Vandkvaliteten vedligeholdes af aktiv biologisk filtrering og mindre vand forandringer (~ 5% af systemets volumen) efter behov. Daglig overvågningaf pH, ledningsevne, opløst ilt (DO) niveauer, og temperatur er nødvendig for at holde forhold konsekvent. Kits er kommercielt tilgængelige til at måle pH og DO niveauer. Ledningsevne målere er også tilgængelige for køb. For at teste disse variabler dagligt, fjerne 250 ml vand fra reservoiret og udfører analysen. PH-niveau bør opretholdes på 7,2, bør DO være mindre end 6 mg, og ledningsevne mellem 500 mikrosekunder og 1.300 uS. (SOURCE HER) Temperaturen skal holdes på 28,5 ° C. Regelmæssig systemvedligeholdelse (3 - 4 uger) indeholder en omtrentlig 30% vand forandringer og rengøring og udskiftning af filter puder og trækul.
Figur 1: Tre store komponenter i en zebrafisk facilitet. A. Pumpen og filtre systemet er placeret i den nederste del af hylden (førstehylde) og tilslut vandet bestanden tanken med den store forsyningsledning. B. Den største forsyningsledning stammer fra UV-lampen og leverer vand til de tre øverste hylder, der indeholder fisk kampvogne. Bemærk, at hver hylde rum leveres selvstændigt og kan styres individuelt (tændt eller slukket) ved hjælp af en ventil. Denne hovedledning har også den største drænventilen ved den nederste ende, og ved den øvre ende fortsætter som et tryk reliever linje, der slutter i de vigtigste udstødningssystemet. C. Den vigtigste udstødningssystemet modtager vand fra tryk reliever linje og fra de forskellige Fish Tank rum og ender i vandet lager tanke. Bemærk, at hver hylde har et akvarium udstødningssystemet, som er PVC-rør og er på langs åbne for at modtage vand for individuelle akvarier. Disse linjer er lidt tilbøjelige til at tillade vand at løbe af tyngdekraften til de vigtigste udstødningssystemet.Klik her for at se en større udgave af dette tal.
Figur 2:. Tre vigtigste komponenter i en zebrafisk facilitet samlet og let funktionel Bemærk, at vand lager tanken allerede har bioballs. Vandet fra de vigtigste udstødningssystemet vil falde på en svamp filter placeret på mesh over vandniveauet (for klarhed ikke er vist i figuren). Bemærk, at for klarhed andet hylde har kun nogle akvarier afbildet, den irrigator vist har kun 4 forsynings- rør, og akvarium udstødningssystemet er gennemsigtig. Hver hylde af stativet kan rumme ni 1 L akvarier og har en 9-port irrigator.
Figur 3:. Fish tank enhed akvarium er erhvervet i en almindelig dyrehandel og det har en 2 L kapacitet A. akvarium dræne systemet er konstrueret ved at bore et "hul 1 1/8 i bagsiden af. tanken, derefter 3/4 "PVC rørstykker er placeret i en inverteret" L "form ved hjælp af en 3/4" PVC albue. Dette afløbssystem vil falde ind i den åbne side af akvariet udstødning linjer placeret på bagsiden af fisketankene. B., som viser installation af en maske i akvarium dræning system. Nettet forhindrer zebrafisk bliver drænet til udstødningen linjer.
Figur 4: Individuelle dele konstruktion. A. De tre filter og pumpesystem er på bunden rack af systemet. Pumpen er forbundet til tre mechaniCal filtre efterfulgt af et UV-filter til at fjerne urenheder fra systemet vand. B. Den vandrette forsyningsledning ender i en 9-port kunstvanding manifold, der vil levere frisk vand og ilt til hver tank. Forsyningen linje til hver hylde har en on-off ventil, der kan bruges til at stoppe vand til hver hylde til rengøring og karantæne formål. C. akvarium udstødningssystemet munder ud i vigtigste udstødningssystemet at indtaste cirkulation. Overtryksventilen linje også munder ud i vigtigste udstødningssystemet.
Figur 5:. Afsluttet system afsluttet Systemet indeholder en pumpe og filtre systemet, en lodret forsyningsledning, en vandret forsyningsledning for hver hylde, en tank udstødningssystemet, en overtryksventil linje, og en vigtigste udstødningssystemet for et indesluttet system omløb .
Figur 6:. Repræsentant akvarium akvarium indeholder en dræning linje, der vil forbinde med de horisontale drænende ledninger i systemet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hovedformålet med denne artikel er at vise, at opførelsen af en funktionel zebrafisk facilitet er ikke kompliceret og kan bygges af uerfarne fisk forskere med minimal konstruktion viden. Denne artikel viser desuden, at materialet til dette funktionelle zebrafisk facilitet kan erhverves let og billigt fra lokale kæledyr levering butikker eller isenkræmmere. Når alle materialer og værktøj er erhvervet konstruktionen af systemet og fisketankene tager omkring en arbejdsdag. Den 72 timer første kørsel tillader enhver fejl i systemet, såsom lækager eller lavt vandtryk, der skal fastlægges. Denne første løb giver også for forurenende stoffer i systemet at blive fjernet fra cirkulation. For eksempel kan PVC lim indeholder farligt organisk materiale, som vil blive fjernet i løbet af de første timer af cirkulation. Systemet har en primær dræning ventil, der tillader og letter tilpasning af volumen og vand erstatning for vedlige melse. Derudover har systemet et tryk reliever linje, som også letter tilpasningen af vandtryk. Denne linje er nyttig, når kun en eller to rum (hylder) vil blive brugt, da det giver mulighed for regulering af vandtryk.
Anlægget er modulopbygget giver mulighed for udnyttelse af 1, 2 eller 3 rum (36 akvarier på 1,8 L) for at opfylde kapacitetsbehov behovene i de enkelte forskere. On-off ventiler anbragt i hvert rum lette isoleringen af de forskellige dele af systemet. Dette ventilsystem er også nyttigt for at undgå potentiel smitte spredning, og for at lette rengøringen af systemet ved rum. Derudover hver beholder vandforsyning fisk har to ventiler, en ved 9 port irrigator og én på den fleksible slange ved indgangen akvarium. Dette dobbelte ventilsystem tillader finjustering af vandtryk og også lette rengøring procedurer eller fisk udvinding eller manipulation.
t "> En ordentlig dokumentation af ammoniak, nitrit og nitrat er afgørende for en korrekt funktion af anlægget. Til dette er de bioballs er vigtige, fordi de giver tilstrækkelig overflade til nitrifikationsbakterier for vækst. Når fisken koloni er stabil, kan anlægget let modificeret til at anvende større eller mindre akvarier. Desuden kan anlægget blive modificeret til at avle zebrafisk efter protokollerne i litteraturen 5. Endvidere kan anlægget blive ændret for at tilføje andre moduler eller stativer til at udvide funktionaliteten af systemet .Strømmen af frisk vand i tanken giver nok frisk ilt, således at der ikke er behov for at tilføje en ekstra oxygenator. Den luftskifte, der forekommer i vandbeholderen er en tilstrækkelig kilde til oxygen. Hvis der anvendes større tanke derefter en yderligere oxygenkilde kan tilsættes. Det skal også bemærkes, at uden strøm af frisk vand i tanken fiskene vil kvæle, så det er vigtigt, at vandstrømmen Be overvåges nøje for at sikre intet blokerer vandledningerne. Det er vigtigt, at vandtemperaturen holdes på 28,5 ° C. En konstant temperatur kan opnås ved at opretholde rumtemperaturen, hvor systemet er anbragt ved 28,5 ° C. Alternativt kan et akvarium varmekilde købes for at opretholde en konstant temperatur. Opretholdelse vandkvaliteten er afgørende for konsistente eksperimentelle resultater. Der er mange kilder til rådighed for at hjælpe med at bestemme præcise vand kvalitetsparametre baseret på eksperimentelle betingelser.
Akvarier rengøres hver 7-10 dage, og derefter sprøjtet med 70% alkohol før genbrug. Det foreslås også, at krom rack renses og tørres på dette tidspunkt for at undgå rust og bygge op. Ved tegn på forurening overholdes, er individuelle bassiner desinficeret med et 2% blegemiddelopløsning 8. Generel sundhed overvåges med særlig vægt på tegn på infektion (hævelse, hudsår, exolpthalmia, farve off osv.), gas boble sygdom (på grund af overmættede gaskoncentrationer, hurtige ændringer i vandtemperaturer, problemer i VVS-systemet), gælle hyperplasi (høje niveauer af ammoniak, kobber, zink eller aktiv chlor i vandet) , skoliose (på grund af C-vitamin mangel) eller æg associeret inflammation og fibroplasias (på grund kvindelig æg tilbageholdelse, der skubber ud bugvæggen).
Opførelsen af denne facilitet er fleksibel og giver mulighed for en mindre eller udvidet system. Ved at tage grundkonstruktionen ideer, kan denne facilitet være indrettet til at passe grundforskning behov i forskellige størrelser. Fordi byggeriet kan variere afhængigt af institution, det mest kritiske trin i protokollen er det 72 timer første kørsel, og den daglige overvågning af ammonium, nitrat og nitrit niveauer i den første uge af byggeriet. Fremragende vandkvalitet vil hjælpe med at opretholde sundheden af fisk. Mange af de nuværende protokoller til en overkommelig fisk system kræver en open-air vand-flow 3. Under vand beskyttet mod den udendørs minimerer chancen for kontamination og fordampning vand. Vedligeholdelse på et lukket system er minimal i forhold til de fælles udendørs systemer.
Hvis der opstår problemer i opførelsen af anlægget (utætheder, lavt vandtryk, osv.) Kan man erstatte en cementeret rør ved blot at skære væk problemområde i anlægget og udskiftning af dele i samme trinvis måde som anført ovenfor . Dette system kan være sårbare over for store vandtab på grund af små lækager, som kan blive farligt for fisk, hvis venstre ubemærket. For mindst investering en float-sluk-enheden registrerer, når vandstanden er faldet til under en sikker grænse og lukke systemet ned. Dette kan være nødvendigt, hvis nøje overvågning af systemet ikke er tilgængeligt. Med de korrekte ændringer, der er meget få begrænsninger dette system står foruden manglende mobilitet. Når dette system er konstruereed det er meget vanskeligt at komme uden at skære nogle dele og recementing dem i den nye placering. Denne mobilitet begrænsning betyder, at ideelt set vil skulle opretholdes i ét arbejdsområde systemet. Hvis der ønskes mobilitet er der små ændringer, der kan gøres for at øge fleksibiliteten. Tilføj en union i begyndelsen af hver levering lateral, overtryksventilen linje, udledning pumpe, og over aftapningsventilen. De afløbsrør kan tørre monteres i stedet for cementeret på plads. Tilføjelse af en fleksibel kobling til pumpen afsnit vil også støtte i mobilitet. Dette er en ekstra
Den enkle konstruktion og vedligeholdelse af dette system betyder, at de nuværende protokoller findes i litteraturen er tilgængelige for små forskningsinstitutioner 1,2,10-12. Vedligeholdelse er enkel at gøre dette til en ideel system for bachelorstuderende forskning. Dette system er fremragende til uafhængige forskning og undervisning laboratorier, også.
Afslutningsvis denne typefacilitet er overkommelige, let at bygge, og funktionel til in vivo forsøg. Denne facilitet er ideel til institutioner med begrænsede ressourcer og begrænset dyrehold plads. Zebrafisk forskning er et område, der bruges til flere forskellige typer undersøgelser, herunder farmakologi, fysiologi, udvikling eller endda genetiske undersøgelser. Faktisk er mange tilgængelige mutant eller transgene zebrafisk understøtter innovative linjer af forskning på næsten alle områder af biomedicin. Desuden kan dette system bruges til at styrke forsknings- muligheder og klasseværelset oplevelser for videnskab majors ved små overvejende bachelor institutioner og inspirere den næste generation af biomedicinske forskere.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer nogen interessekonflikter for dette papir.
Acknowledgments
Forfatterne vil gerne takke kontoret for forskning af Presbyterian College School of Pharmacy om finansiel støtte til dette projekt gennem den lille Apotek Awards for Forskning & Collaboration (SPARC) Award. Forfatterne takker John Smink, manager Aquatic Animal Research Laboratory, Clemson University, Clemson, SC for hans teknisk bistand manuskript revision.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Item | Brand | Quantity | |
| 74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit | Style Selections | 1 | |
| 18-Gallon General Bucket/Tote | Centrex Plastics: LLC Rugged Tote | 1 | |
| 6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord | Master Electrician | 1 | |
| 9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp | Smartpond | 1 | |
| Whole House Water Replacement Filter | Whirlpool | 6 | |
| Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing | Whirlpool | 2 | |
| Thread Seal Tape | William H Harvey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC PVC Cement | Oatey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC Primer | Oatey | 1 | |
| 1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing | Mister Landscaper | 1 | |
| 1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve | Mister Landscaper | 33 | |
| 9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter | Mister Landscaper | 6 | |
| Drop-In Filter with House | Whirlpool | 6 | |
| 2-in Dia 90-Degree PVC Elbow | LASCO | 3 | |
| 2-in Dia 90-Degree Tee | LASCO | 3 | |
| 3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow | LASCO | 15 | |
| 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 7 | |
| 3/4-in Dia PVC Tee | LASCO | 12 | |
| 2-in Dia PVC Cap | LASCO | 3 | |
| 1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 2 | |
| 3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve | American Valve | 5 | |
| 1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | Lasco | 8 | |
| 3/4-in Dia PVC Cap | Lasco | 1 | |
| 2-In x 5-Ft Pvc Pipe | Charlotte Pipe | 4 | |
| ¾-In x 10-Ft Pvc pipe | Charlotte Pipe | 3 | |
| 11/16x1-7/80 PVC ring | SXT | 10 | |
| ½” PVC male adapter | SXT | 1 | |
| ¾” PVC coupling | SXT | 1 | |
| ½” PVC female adapter | SXT | 1 | |
| link | |||
| 1.8 L Dual Beta Keeper | Top Fin | 27 | |
| ¾” PVC male adapter (w/ #18 O-ring) | SXT | 28 | |
| 90-degree ¾” threaded PVC elbow | SXT | 27 | |
| Fine Mesh | N/A | 1 yard | |
| Bulkhead Connector | N/A | 1 | |
| Hacksaw | N/A | 1 | |
| Drill | N/A | 1 | |
| Hole saw | N/A | 1 | |
| Adjustable Wrench | N/A | 1 | |
| Pliers | N/A | 1 | |
| Tape Measure | N/A | 1 | |
| Safety Glasses | N/A | 1 | |
| Work Gloves | N/A | 1 |
References
- Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , 3rd ed, Academic Press. New York, New York. (2010).
- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P.
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196 (2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
