Abstract
In vivo biomedisinsk forskning er avgjørende for å oversette in vitro funn i kliniske fremskritt. Små akademiske institusjoner med begrensede ressurser finner det praktisk talt umulig å bygge og vedlikeholde typiske gnager fasiliteter for forskning. Sebrafisk forskning har vist seg å være et verdifullt alternativ til in vivo-undersøkelser i farmakologi, fysiologi, utvikling og genetiske studier. Denne artikkelen viser at en funksjonell sebrafisk anlegget kan bygges på en enkel og rimelig måte. Vi viser at et slikt anlegg kan bygges i omtrent en arbeidsdag med minimal verktøy og kompetanse. Kostnaden for den 27 1.8 L fisk tank sebrafisk anlegget konstruert i denne studien var ca $ 1500. Vi anslår at opprettholdelsen av en innledende arbeids 150 fisk koloni i 3 måneder er $ 1,000. Dette prosjektet involverte studenter, som ble innført for å aquaculturing av sebrafisk for forskning foreslår.
Introduction
In vivo-modeller er avgjørende i å gjennomføre omfattende biomedisinsk forskning siden de tillater in vitro forskning som skal oversettes på systemet og organismenivå. For eksempel har forskning med små pattedyr, gnagere, nemlig vist seg nødvendig for utvikling av medikamenter og i forbedring av tilgjengelige medikamenter. Imidlertid kan kompleksiteten (økonomisk og logistisk) gjør det praktisk talt umulig å bygge og vedlikeholde gnager fasiliteter for eksperimentering foreslår at små forsknings akademiske institusjoner. Likevel kan in vivo forskning utføres ved hjelp av andre dyrearter som krever mindre forseggjorte logistikk. Sebrafisk (Danio rerio) har blitt brukt som en in vivo modell for å studere genetikk, utvikling, patofysiologi og farmakologi 1,2,10,11,12. De nødvendige for å huse sebrafisk for eksperimentering anlegg er relativt enkle og betydelig rimeligere i forhold til rodent fasiliteter. Kim et al. 3 har nylig beskrevet i detalj en 80 tank sebrafisk bolig system som kan bygges for ca $ 1500, som inkluderer både deler og lønnskostnader. Dette står i sterk kontrast til den nesten $ 8500 som ville bli pålagt å kjøpe en ferdig, 80 tank system fra en rekke kommersielle leverandører. Imidlertid beskrivelsen gitt av Kim et al. kan være komplisert og vanskelig å følge for nybegynnere av fisk forskning. Vi tror at en sebrafisk anlegget kan konstrueres på forenklet måte for en investering på $ 1500.
Etableringen av en in vivo-anlegget på små akademiske institusjoner gir sine fakulteter et ekstra verktøy til å produsere mer kraftfull og grundig forskning. In vitro data støttes av in vivo resultater generelt produserer mer omfattende biomedisinsk forskning enn data innhentet ved hjelp av bare in vitro tilnærminger. Derforimplementering av en in vivo forskning anlegget vil betydelig forbedre institusjonen suksess i de totale forsknings bestrebelser (student eksponering til forskning, publikasjoner, kommunikasjon, jakten på ekstern finansiering, osv.).
Byggingen av en Sebrafisk anlegg som det som er beskrevet i denne studien er ideell for forskning akademiske institusjoner med begrensede fasiliteter (eller institusjoner uten in vivo forskningsfasiliteter) under sammentrekkende økonomiske tider.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
MERK: Disse protokollene følge retningslinjene i IACUC av Presbyterian College.
1. Skaff Materialer Oppført i tabell 1.
2. Fest fem Hylle Chrome Ifølge produsentens instruksjoner. Dette vil bli brukt til å huse Facility.
3. Konstruer vannbeholderen og filtersystem (figur 1A og 2).
- Ved hjelp av Figur 1A som en guide, layout de 18 gallon bøtte, pumpe, filter og UV-lampe for å bestemme endelig installasjon plassering og størrelse.
- Når delene er lagt ut, måle og kutte ¾ "PVC-rør til den lengden som trengs for montering. Variere lengden på alle rør i henhold til bestemte plass behov og begrensninger.
- Montere rør og rørdeler som lagt ut tidligere ved bruk av PVC primer og sement, se nedenfor (3.3.2 og 3.3.3).
- Sand kuttet kantene av røret med sandpapir før de er glatt å ta end er det ingen rester.
- Prime utsiden av røret og innsiden av armaturen med det innkjøpte PVC primer med den medfølgende pinnen fra PVC-primer.
- Sementere rør og kopling sammen ved påføring av PVC-sement på utsiden av røret ved hjelp av den medfølgende vattpinne. Gjenta for alle tiltak som må PVC sementering.
- Plasser 18 liter bøtte på en side av sokkelen konstruksjon.
- Installere et skott kontakten på siden av tanken.
- Fest en ¾ "PVC-rør til skottet.
- Feste den andre enden av ¾ "rør til pumpeinnløpet ved hjelp av en ¾" gjenget foreta montering.
- Koble filtrene til pumpen ved hjelp av to 90 graders albuer og ¾ "PVC-rør.
- Bruk en papirfilter etterfulgt av en aktivert karbon filtre for å filtrere ut rusk og redusere klor og kjemiske nivåer i vannet.
- Koble UV lampe til filtre according til produsentens instruksjoner.
- Feste pumpen og filtersystem til oversiden av den første hylle i stativet ved hjelp av wire bånd. Variere rekkefølgen på montering og vedlegg i henhold til størrelsen og utformingen av sokkel / stativ valgt.
- Tilsett 1 bioball per gallon vann til vanntanken når pumpen og filtersystemet er montert og festet til sokkelen.
4. Konstruer hovedtilførselsledningen (figurene 1B og 2).
- Måle og klippe et stykke av ¾ "PVC-rør for å koble UV lampe til hovedtilførselen
- Bruk en ¾ "PVC tee å starte hovedforsyningslinjen ved å koble tee til ¾" PVC eksos kommer fra UV-filter. .
- Legg til en på-av ventil til bunnen av PVC tee for å tjene som en renne for vedlikehold spyling av systemet.
- Starte hovedforsyningslinje fra toppen av ¾ "PVC tee ved å måle og skjæring ¾" PVCrøret til ønsket lengde for å gi tilførselsrør for hver av hyllene i reolen.
- Installere ¾ "PVC tees for de horisontale linjene som vil inn hver hylle av stativet.
- Eventuelt (og foreslått), legge til en ¾ "on-off ventil for hver hylle tilførselsledningen for å tillate isolering av hver hylle og en modulær design av systemet.
- Bruk en ¾ "PVC-rør som en trykkreduksjons linje på øverste hylle. Hvis denne linjen går på baksiden av sokkelen, bruk denne hylle for lagring. Avslutte trykkreduserende linje i hovedavløpsledningen (figur 1B) med en ¾ "on-off-ventil.
- Når trinnene ovenfor er gjennomført, prime og sementere PVC-rør sammen som tidligere har gjort når du bygger reservoaret og filtreringssystem.
5. Konstruer hovedavløpsledningen (figurene 1C og 2).
- Kjøre den vertikale lengden av hovedavløpslinje til den andre siden av stativet fROM hovedtilførselsledningen. Bruk en 2 "PVC-rør for denne vertikale linjen for å motta hovedforsyningslinje på toppen og avløpsrør fra karene fra hver hylle.
- Skjær stykker av 2 "PVC-rør for den vertikale hoved eksos linje og bruker 2" PVC tees for å motta fisk tank avløpsrør fra hver hylle. Avslutte hoved eksos linje i aksje tank å utvise resirkulert vann over en svamp filter.
- Skjær en tomme åpne hele lengden av de to "PVC rør brikker og feste til vertikal hoved eksos linje med PVC tees for de horisontale avløpsrør fra karene.
- Cap de to "horisontale avløpsrør med en 2" PVC cap.
- Prime og sementere småbiter med de nødvendige beslag (kontakter, brystvorter eller albuer).
6. Konstruer fisken tank (figur 3).
- Med bore, kutte en 1 1/8 "hull på baksiden av fisken tank 1" under den øvre kant med en hullsag.
- Fest og stram en 90 graders 3/4 "gjenget PVC albue til den mannlige adapter for å skape fisken tank eksosrøret. Legg et stykke finmasket før du skrur holdemutteren for å hindre at sebrafisk går gjennom eksosanlegget.
- Legg fisken tank med sin eksosrør ending i den åpne plassen på drenering linje bak tankene
7. Starte vannsystemet
- I flere beholdere, slik som den som brukes til reservoaret, måler tre ganger mengden av vann som inneholdes i systemet. La dette vannet stå ved romtemperatur for kondisjonering i 48 timer.
- Tilsett vann til systemet, og lar det sirkulere i minimum 3 dager.
- Endre vann i systemet kraftig gjennom de innledende 3 dager av sirkulasjon for å befri systemet for forurensninger that ligge innenfor rørene.
- Legg starter sebrafisk og la nitrogenkretsløpet å få etablert. Normalisere pH til en konsekvent 7. Må syv sebrafisk per 1.8 L, og mate dem to ganger daglig i løpet av ukedager og en gang daglig i helgene som foreslått av Linbo 4 og McNabb 6.
- Overvåke nitrat (<75 mg / L), nitritt (<10 mg / L), og ammonium (0 mg / L) daglig i løpet av den første uken etter legger fisken, og to ganger ukentlig gang ønsket nivå har blitt vedlikeholdt med regelmessige vannbytter .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bygging av pumpen og Flters System
Når stativet er montert og satt opp det første trinnet er å bygge pumpen og filtersystem. Filtrene er koplet til systempumpen, og er plassert over den nederste nivået til den første hylle, som gir mulighet for enkel filter vedlikehold og utskifting. På lignende måte er den UV-lampe i forbindelse med PVC-rør til filteret og holdes på plass med plasttrådbånd for å tillate lett utskifting av UV-lampen som nødvendig (figur 4A). Umiddelbart etter pumpen et papirfilter, aktivt kullfilter, og en UV-lampe er installert via PVC-rør. Bioballs blir tilsatt til tanken for å gi overflaten for veksten av bakterier, som omdanner ammoniakk giftig avfall til nitrater. En bioball per gallon vann i systemet er tilstrekkelig areal til å tillate bakterievekst. Lokket på plastbeholderen kan monteres slik at i tilfelle av overløp de bioballs vil forbli i reservoaret og sjansene for Contaminasjon er minimert. Selv om en overløps arrangement er meget usannsynlig, er en tømmesystem (tilsetning av et rør renne på toppen av reservoaret) et enkelt tillegg som kan gjøres til systemet.
Bygging av hovedforsyningslinjen
Det andre trinnet er å montere hovedvanntilførselsledningen som vil mate hvert kammer som skal inneholde de sebrafisk tanker (figur 4b). Denne linje er forbundet med UV-lampe med et stykke av PVC-rør. Denne linjen går vertikalt og sideveis til stativet gjennom en PVC tee. Den nederste ende av T anvendes for å koble et stykke av PVC-rør som vil tjene som en dreneringsventil for hele systemet.
Hovedlinjene som fôrer tankene går horisontalt til fire avdelinger: toppen av andre hylle, toppen av den tredje hylle, toppen av den tredje hylle, og bunnen av den femte hylle. Siden toppen av andre, tredje og fjerde hylle linjer gir vann til fisken tank de kjører på midline av hyllene. Hver av disse linjene har individuelle på-av ventiler, som tillater kontroll av de enkelte kammere.
En 9-port irrigasjonsmanifolden er festet til enden av de horisontale linjer, og disse irrigators levere vann til fisketankene gjennom fleksible ¼ "produksjonsrør (figur 4B). Hver port av irrigasjonsmanifolden har en innebygd on-off ventil. I tillegg er en på-av ventil plassert ved enden av slangen er koblet til hver port, nær inngangen fisketanken, for lett tilgang, og vannstrømningskontroll. Slangen vil bli ført inn i tanken ved hjelp av et boret hull i lokket. Dette vil hjelpe til å holde slangen ordentlig satt inn i tanken.
Linjen som kjører på toppen av den femte sokkel er brukt som en trykkavlastning, og den er styrt med en individuell avstengningsventil. Det er anbefalt å ha denne linjen løpe på baksiden av den femte sokkel, slik at dette området kan benyttes for lagring. Siden main linjen går på midtlinjen av den siden av stativet, er det brakt til baksiden med en PVC albue og et stykke PVC-rør, og så det går på langs (horisontal) som trykkavlastning linje med en annen PVC albue og et stykke av PVC-rør. Trykkavlastning linje ender i hovedavløps linje som går loddrett på den andre side av stativene og ender i vannbeholderen (dette eksoslinje er laget av to "PVC-rør, se nedenfor).
Bygging av hovedEksos LIne
Det tredje trinnet er å montere eksossystemet, som går sideveis til stativet, på den siden hvor vannreservoaret er plassert (figur 4C). Dette systemet er bygget ved hjelp av 2 "PVC-rør og samler vannet som kommer fra trykkavlastning linje, og fra fisken tank drenering (se fisken tank bygging nedenfor). Den hovedavløpslinje går vertikalt, som forbinder trykkavlastning linje på toppen av stativet og som ender i vannet reservoir. Dessuten får hoved eksos linje avløpet fra karene gjennom horisontale 2 "PVC-rør som kobles til hoved eksos linje via PVC tees. Disse horisontale avløpsrør har en 1 'langsgående kutt for å motta dreneringsvann fra fisketanker (se nedenfor). Disse horisontale avløpsrør kjøre på baksiden og på de nederste delene av hyllene og har en mindre stigning som gjør at drenert vann til å kjøre til hoved eksos linje med tyngdekraften. Svamp filter pads legges til de horisontale avløpsrør slik at fisken tank renne vann faller på svamper og filtrerer ut rusk. En hel montert system er avbildet i figur 5.
Bygging av Fish Tanks
En representativ fisketanken er vist i figur 6. Enden av fisken Tank-dreneringsledning som er lagt inn i den horisontale dreneringslinjen (se ovenfor om eksoslinje). Et trådnett føres inn i dreneringsledningen i fisketanken for å hindresebrafisk fra svømming ut av tanken. Disse spesielle tanker har lokk som hindrer at fisk rømmer, og også redusere forurensning muligheter. Dersom overflyt inntreffer tanklokk vil hindre fisken i å falle ned på gulvet. Tanker med lokk er ideelle, men om et system er bygget som inneholder tanker uten lokk og et lite hull kan bores nær toppen av tanken. Dette vil tillate vann å flykte mens hindre at fisk rømmer.
Fungerende
En sebrafisk koloni kunne opprettholdes av tilgjengelige og etablerte protokoller som er beskrevet tidligere 3- 6. I korthet tillater anlegget vårt system pumpe for å sirkulere systemvolumet omtrent 75 ganger per time, ved å justere strømningshastigheten for hver voksen (eller larvefisk tank) ved omtrent 85 ml / min (eller 45 ml / min for larvefisk tank) . Vannkvalitet opprettholdes ved aktiv biologisk filtrering og småskala vannbytter (~ 5% av volumet system) etter behov. Daglig overvåkingav pH, ledningsevne, oppløst oksygen (DO) nivåer og temperatur er nødvendig for å holde betingelsene konsekvent. Pakkene er kommersielt tilgjengelig for å måle pH og DO nivåer. Ledningsevnemålere er også tilgjengelig for kjøp. For å teste disse variablene daglig, fjerne 250 ml vann fra reservoaret og å utføre analysen. PH-nivået bør opprettholdes på 7,2, bør DO være mindre enn 6 mg, og ledningsevne mellom 500 uS og 1300 uS. (KILDE HER) Temperatur må opprettholdes på 28,5 ° C. Regelmessig vedlikehold av systemet (3-4 uker) inkluderer en omtrentlig 30% vannskifte og rengjøring og utskifting av filterputer og kull.
Figur 1: Tre viktige komponenter i en sebrafisk anlegget. A. pumpe og filter-system er plassert på den nederste del av sokkelen (førsthylle) og koble vann lager tank med de store tilførselsledningen. B. Den store forsyningslinjen kommer fra UV-lampe og leverer vann til de tre øverste hyllene som inneholder karene. Legg merke til at hver hylle rommet leveres selvstendig og kan reguleres individuelt (på eller av) ved hjelp av en ventil. Denne hovedlinjen har også hoved drenering ventilen ved den nedre ende, og ved den øvre ende fortsetter som en trykkavlastning linje som ender i hovedutløpsledningen. C. hovedavløpslinje mottar vann fra trykkavlastning linjen og fra forskjellige Fish Tank avdelinger og ender i vannet lager tanks. Legg merke til at hver hylle har en fisk tank eksos linje som er PVC-rør, og er lengderetningen åpne for å motta vann for enkelte fisketanker. Disse linjene er svakt skrådd, slik at vannet drives av tyngdekraften til hovedutløpsledningen.Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2:. Tre viktige komponenter i en sebrafisk anlegget montert og lett funksjonell Merk at vannet lager Tanken har allerede bioballs. Vann fra hovedavløpslinje vil falle på en svamp filter plassert på mesh over vannivået (for klarhetens skyld er dette ikke vist på figuren). Merk at for klarhet den andre hyllen har bare noen fisk tanker avbildet, den irrigator vist har bare 4 tilførselsrørene, og fisken tank eksos linje er gjennomsiktig. Hver hylle av stativet kan holde ni en L akvarier og har en 9 port irrigator.
Figur 3:. Fish tank enhet Fisken tank er ervervet i en vanlig dyrebutikk, og den har en 2 l kapasitet A. Fisken tank drenering systemet er bygget opp ved å bore en 1 1/8 "hull i baksiden av. tanken, deretter 3/4 "PVC rørstykker er plassert i en invertert" L "-form ved hjelp av en 3/4" PVC albue. Denne drenerende system vil falle inn i den åpne side av fisken tank avgassledninger som ligger på baksiden av karene. B. bilde som viser installasjon av en maske i fisketanken drenerende system. Maskene hindrer sebrafisk fra å bli tappet til eksos linjer.
Figur 4: Individuelle deler konstruksjon. A. De tre filter og pumpe-system er på den nederste stativ i systemet. Pumpen er forbundet med tre mechanke filtre, etterfulgt av et UV-filter for å fjerne forurensninger fra systemet vann. B. Den horisontale tilførselsledning ender i en port 9 irrigasjons-manifolden, som vil tilføre friskt vann og oksygen til hver tank. Tilførselsledningen til hver hylle har en on-off ventil som kan brukes til å stoppe vann til hver hylle for rengjøring og karanteneformål. C. Fisken tank eksos linje renner ut i hovedavløps linje å oppgi sirkulasjon. Trykkavlastningslinje munner også inn i hovedutløpsledningen.
Fig. 5: Fullført system Det ferdige systemet inneholder en pumpe og filter-system, en vertikal hovedtilførselsledning, en horisontal tilførselsledning for hver hylle, en tank utløpsledning, en trykkavlastningslinje, og en hovedutløpsledning for et sirkulasjonssystem inne .
Figur 6:. Representant fisk tank inneholder Fisken tank en drenering linje som vil få kontakt med de horisontale drenering linjer i systemet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Hovedformålet med denne artikkelen er å vise at byggingen av en funksjonell sebrafisk anlegget er ikke komplisert, og kan bygges av uerfarne fiske forskere med minimal konstruksjon kunnskap. Videre viser denne artikkelen at materialet for dette funksjonell sebrafisk anlegget kan bli kjøpt opp lett og rimelig fra lokale pet supply butikker eller jernvareforretninger. Når alle materialer og verktøy har blitt kjøpt opp byggingen av systemet og fisken tank tar ca en arbeidsdag. Den 72 timer første løp lar enhver svikt i systemet, slik som lekkasjer eller lavt vanntrykk, som skal bestemmes. Dette første løp gjør det også mulig for forurensninger i systemet som skal fjernes fra sirkulasjon. For eksempel kan PVC-lim inneholder farlig organisk materiale som vil bli fjernet i løpet av de første timene av sirkulasjon. Systemet har en hovedventil som tillater tømming og muliggjør justering av volum og vann erstatning for vedlikehold; ledelse. I tillegg har systemet en trykkavlastning linje som også muliggjør regulering av vanntrykket. Denne linjen er nyttig når bare en eller to kamre (hyller) vil bli brukt siden den tillater regulering av vanntrykket.
Anlegget er modulbasert design som åpner for utnyttelse av en, to eller tre avdelinger (36 akvarier på 1,8 L) for å møte kapasitetsbehov enkeltforskere. Den på-av ventiler plassert i hvert kammer lette isoleringen av de forskjellige deler av systemet. Denne ventilen system er også nyttig for å unngå potensiell smitte spredning, og for å lette rengjøring av systemet ved avdelinger. I tillegg har hver fisk tank vannforsyning to ventiler, en på ni port irrigator og en på den fleksible slangen ved inngangen av fisken tank. Denne doble ventilsystem tillater finjustering av vanntrykk og også lette rengjøringsprosedyrer eller fisk utvinning eller manipulasjon.
t "> En skikkelig dokumentasjon av ammoniakk, nitritt og nitrat er avgjørende for riktig funksjon av anlegget. For dette, bioballs er viktig siden de gir tilstrekkelig underlag for nitrifiserende bakterier til vekst. Når fisken kolonien er stabil, anlegget kan lett modifiseres til å bruke større eller mindre akvarier. Også, kan anlegget bli endret for å avle sebrafisk følge protokoller tilgjengelig i litteraturen 5. Videre kan anlegget bli endret for å legge til andre moduler eller stativer for å utvide funksjonaliteten til systemet .Strømmen av rent vann inn i tanken gir nok frisk oksygen, slik at det ikke er nødvendig å legge til en ekstra oksygenator. Utskiftingen av luft som oppstår i vanntanken er et tilstrekkelig oksygenkilde. Hvis større tanker benyttes da en ekstra oksygenkilde kan tilsettes. Det skal også bemerkes at uten strømning av friskt vann inn i tanken vil fisken kveles, så er det viktig at vannstrømmen be overvåkes nøye for å sikre at ingenting blokkerer vannlinjer. Det er viktig at vanntemperaturen holdes ved 28,5 ° C. En konstant temperatur kan oppnås ved å opprettholde temperaturen i rommet som systemet er plassert ved 28,5 ° C. Alternativt kan et akvarium varmekilde kjøpes for å opprettholde en konstant temperatur. Opprettholde vannkvaliteten er avgjørende for konsistente eksperimentelle resultater. Det er mange kilder tilgjengelig for å fastslå eksakt vannkvalitetsparametre basert på eksperimentelle forhold.
Akvarier blir rengjort hver 7 - 10 dager og deretter sprayet med 70% alkohol før gjenbruk. Det er også foreslått at kromstativ vaskes og tørkes på dette punktet for å forhindre rust og bygge opp. Ved tegn på forurensning er observert, er individuelle tanker desinfiseres med en 2% blekemiddel 8. Generell helse overvåkes med spesiell oppmerksomhet til tegn på infeksjon (hevelse, sår hud, exolpthalmia, farge off, osv.), gassboble sykdom (på grunn av overmettede gasskonsentrasjoner, raske endringer i vanntemperaturer, problemer i rørsystemet), gjelle hyperplasi (høyt innhold av ammoniakk, kobber, sink eller aktivt klor i vann) , skoliose (på grunn av vitamin C-mangel) eller egg assosiert betennelse og fibroplasias (på grunn av kvinnelig egg oppbevaring som skyver ut bukveggen).
Byggingen av dette anlegget er fleksibel og gir rom for en mindre eller utvidet system. Ved å ta de grunnleggende ideer konstruksjon, kan dette anlegget være innrettet til å passe grunnleggende forsknings behov i forskjellige størrelser. Fordi byggingen kan variere fra institusjon, den mest kritiske trinn i protokollen er det 72 timer første løp, og daglig oppfølging av ammonium, nitrat og nitritt nivåer i løpet av den første uken av konstruksjon. Utmerket vannkvalitet skal hjelpe til med å opprettholde helsen til fisken. Mange av dagens protokoller tilgjengelig for en rimelig fisk system krever en utendørs vann-flow tre. Ha vann beskyttet mot open-air minimerer sjansen for vannforurensning og fordampning. Vedlikehold på et lukket system er minimal i forhold til de vanlige frilufts-systemer.
Hvis det oppstår problemer i byggingen av anlegget (lekkasjer, lavt vanntrykk, osv.) Kan man erstatte en sementert rør ved å klippe bort den delen av bekymring i anlegget og skifte deler i samme trinnvis måte som nevnt ovenfor . Dette systemet kan være sårbare for store vanntap på grunn av små lekkasjer, som kan bli farlig for fisken hvis venstre ubemerket. For en minimum investering en dupp stengeanordning vil oppdage når vannstanden har sunket under et trygt terskel og systemet slås av. Dette kan være nødvendig hvis tett oppfølging av systemet er ikke tilgjengelig. Med de riktige modifiseringer, er det få begrensninger dette systemet vender foruten mangel på mobilitet. Når dette systemet er konstruereed det er veldig vanskelig å bevege seg uten å kutte noen deler og recementing dem på det nye stedet. Dette mobilitet begrensning betyr at systemet vil ideelt må opprettholdes i ett arbeidsområde. Hvis mobilitet er ønsket er det små endringer som kan gjøres for å øke fleksibiliteten. Legg til en union ved begynnelsen av hver tilførsels lateral, trykkavlastningslinje, pumpeutløpet, og over avløpsventilen. Avløpsrør kan tørr monteres i stedet for sementert på plass. Legge til en fleksibel kobling til pumpedelen vil også hjelpe til mobilitet. Dette er en ekstra
Den enkle konstruksjonen og vedlikehold av dette systemet betyr at dagens protokoller finnes i litteraturen er tilgjengelig for små forskningsinstitusjoner 1,2,10-12. Vedlikehold er enkelt å gjøre dette til et ideelt system for undergraduate student forskning. Dette systemet er utmerket for uavhengige forsknings- og undervisningslaboratorier, også.
Som konklusjon, er denne typenanlegget er rimelig, enkel å bygge, og funksjonell for in vivo eksperimentering. Dette anlegget er ideell for institusjoner med begrensede ressurser og begrenset husdyrhold plass. Sebrafisk forskning er et område som brukes for flere typer av studier, inkludert farmakologi, fysiologi, utvikling, eller til og med genetiske studier. Faktisk, det store antallet tilgjengelige mutant eller transgen sebrafisk støtter innovative linjer av forskning i nesten alle felt av biomedisin. I tillegg kan dette systemet brukes til å forbedre forskningsmuligheter og klasserom opplevelser for vitenskap hovedfag ved små overveiende graduate institusjoner og inspirere neste generasjon av biomedisinske forskere.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter for dette papiret.
Acknowledgments
Forfatterne ønsker å takke Office of Forskning av Presbyterian College School of Pharmacy for økonomisk støtte av dette prosjektet gjennom Small Pharmacy Awards for Research & Collaboration (SPARC) Award. Forfatterne takker Mr. John smink, leder av Aquatic Animal Research Laboratory, Clemson University, Clemson, SC for hans teknisk assistanse manuskript revisjon.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Item | Brand | Quantity | |
| 74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit | Style Selections | 1 | |
| 18-Gallon General Bucket/Tote | Centrex Plastics: LLC Rugged Tote | 1 | |
| 6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord | Master Electrician | 1 | |
| 9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp | Smartpond | 1 | |
| Whole House Water Replacement Filter | Whirlpool | 6 | |
| Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing | Whirlpool | 2 | |
| Thread Seal Tape | William H Harvey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC PVC Cement | Oatey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC Primer | Oatey | 1 | |
| 1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing | Mister Landscaper | 1 | |
| 1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve | Mister Landscaper | 33 | |
| 9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter | Mister Landscaper | 6 | |
| Drop-In Filter with House | Whirlpool | 6 | |
| 2-in Dia 90-Degree PVC Elbow | LASCO | 3 | |
| 2-in Dia 90-Degree Tee | LASCO | 3 | |
| 3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow | LASCO | 15 | |
| 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 7 | |
| 3/4-in Dia PVC Tee | LASCO | 12 | |
| 2-in Dia PVC Cap | LASCO | 3 | |
| 1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 2 | |
| 3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve | American Valve | 5 | |
| 1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | Lasco | 8 | |
| 3/4-in Dia PVC Cap | Lasco | 1 | |
| 2-In x 5-Ft Pvc Pipe | Charlotte Pipe | 4 | |
| ¾-In x 10-Ft Pvc pipe | Charlotte Pipe | 3 | |
| 11/16x1-7/80 PVC ring | SXT | 10 | |
| ½” PVC male adapter | SXT | 1 | |
| ¾” PVC coupling | SXT | 1 | |
| ½” PVC female adapter | SXT | 1 | |
| link | |||
| 1.8 L Dual Beta Keeper | Top Fin | 27 | |
| ¾” PVC male adapter (w/ #18 O-ring) | SXT | 28 | |
| 90-degree ¾” threaded PVC elbow | SXT | 27 | |
| Fine Mesh | N/A | 1 yard | |
| Bulkhead Connector | N/A | 1 | |
| Hacksaw | N/A | 1 | |
| Drill | N/A | 1 | |
| Hole saw | N/A | 1 | |
| Adjustable Wrench | N/A | 1 | |
| Pliers | N/A | 1 | |
| Tape Measure | N/A | 1 | |
| Safety Glasses | N/A | 1 | |
| Work Gloves | N/A | 1 |
References
- Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , 3rd ed, Academic Press. New York, New York. (2010).
- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P.
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196 (2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
