Abstract
In vivo a pesquisa biomédica é essencial para traduzir em resultados in vitro em avanços clínicos. Pequenas instituições acadêmicas com recursos limitados encontrá-lo virtualmente impossível construir e manter instalações típicas de roedores para a investigação. Zebrafish pesquisa tem demonstrado ser uma alternativa valiosa para a pesquisa in vivo em farmacologia, fisiologia, desenvolvimento e estudos genéticos. Este artigo demonstra que uma instalação de peixe-zebra funcional pode ser construído de uma forma fácil e acessível. Nós demonstramos que esse mecanismo poderia ser construído em cerca de um dia de trabalho com ferramentas e conhecimentos mínimos. O custo dos 27 1.8 L tanque de peixes facilidade zebrafish construído neste estudo foi de aproximadamente US $ 1.500. Estima-se que a manutenção de um trabalho inicial de 150 peixes colônia por 3 meses é de R $ 1.000. Este projecto envolveu alunos, que foram introduzidas para aquaculturing de peixe-zebra para pesquisa propõe.
Introduction
In vivo modelos são essenciais para a realização de pesquisa biomédica abrangente uma vez que permitem pesquisas in vitro a ser traduzido no nível do sistema e dos organismos. Por exemplo, a investigação com pequenos mamíferos, roedores, ou seja, tem sido necessário o desenvolvimento de fármacos e na melhoria das drogas disponíveis. No entanto, a complexidade (financeiramente e logisticamente) pode fazer com que seja praticamente impossível construir e manter instalações de roedores para a experimentação propõe a pequenas instituições acadêmicas de pesquisa. No entanto, a pesquisa in vivo pode ser realizada utilizando outras espécies de animais que necessitem de logística menos elaborados. Peixe-zebra (Danio rerio) têm sido utilizados com sucesso como um modelo in vivo para o estudo da genética, desenvolvimento, fisiopatologia e farmacologia 1,2,10,11,12. As instalações necessárias para abrigar peixes-zebra para a experimentação são relativamente simples e significativamente menos caro quando comparado a rinstalações Odent. Kim et al. 3 descreveram recentemente em detalhe um tanque de 80 peixes-zebra sistema de habitação que pode ser construído por cerca de US $ 1.500, que inclui ambas as partes e os custos trabalhistas. Isto está em contraste com a quase 8500 dólares que seriam necessários para comprar um sistema de ready-made, 80 tanque de qualquer número de fornecedores comerciais. No entanto, a descrição dada por Kim et al. pode ser complicado e difícil de seguir para os novatos da investigação peixe. Acreditamos que uma instalação de peixe-zebra podem ser construídos de forma simplificada para um investimento de US $ 1.500.
A criação de uma facilidade in vivo em pequenas instituições acadêmicas fornece suas faculdades mais uma ferramenta com a qual a produzir pesquisa mais poderoso e completo. Os estudos in vitro apoiados por resultados in vivo geralmente produzem investigação biomédica mais abrangente do que os dados obtidos utilizando apenas nas abordagens in vitro. Portanto, oimplementação de um centro de pesquisa in vivo irá melhorar significativamente o sucesso instituição em seus esforços globais de pesquisa (exposição do estudante com a investigação, publicações, comunicações, a busca de financiamento externo, etc.).
A construção de uma unidade de peixe-zebra como o descrito neste estudo é ideal para instituições de pesquisa acadêmicas com recursos limitados (ou instituições sem in vivo centros de pesquisa) durante constrição Financial Times.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
NOTA: Estes protocolos seguir as orientações do IACUC de Presbyterian College.
1. Materiais Adquirir listadas na Tabela 1.
2. Monte a 5 Shelf Chrome De acordo com as instruções do fabricante. Este será utilizado para abrigar o mecanismo.
3. Construa o reservatório de água e sistema de filtração (Figuras 1 e 2).
- Usando a Figura 1A como um guia, o layout do balde de 18 litros, bomba, filtros e lâmpada UV para determinar a localização da instalação final e tamanho.
- Uma vez que as peças são colocadas para fora, medir e cortar o tubo de PVC ¾ "para o comprimento necessário para a montagem. Variar os comprimentos de todas as tubulações de acordo com as necessidades e limitações de espaço específicos.
- Montar os tubos e acessórios, como previsto anteriormente usando o primer PVC e cimento, veja abaixo (3.3.2 e 3.3.3).
- Lixe as bordas do corte do tubo com uma lixa até que eles são suaves ao toque de umd não há restos.
- Primeiro o lado de fora do tubo e o interior do acessório com o iniciador de PVC comprado com o cotonete incluídos a partir do iniciador de PVC.
- Cimento e o tubo de montagem em conjunto aplicando o cimento de PVC para o exterior do tubo usando o cotonete incluídos. Repita o procedimento para todas as etapas que precisam cimentação PVC.
- Coloque o balde 18 litros de um dos lados da construção de prateleira.
- Instalar um conector de anteparo do lado do reservatório.
- Anexar um tubo de PVC de ¾ "da antepara.
- Conecte a outra extremidade do ¾ "tubo para a entrada da bomba usando um ¾" com rosca fazer um encaixe.
- Conecte-se os filtros para a bomba usando dois cotovelos de 90 graus e ¾ "tubo de PVC.
- Use um filtro de papel seguido por um filtro de carvão ativado para filtrar os detritos e reduzir os níveis de cloro e produtos químicos na água.
- Ligue a lâmpada UV ao accordi filtrosng a instruções do fabricante.
- Ligar a bomba e um sistema de filtro para o lado de cima da primeira prateleira do bastidor utilizando laços de arame. Varie a ordem da montagem e fixação de acordo com o tamanho e layout da prateleira / cremalheira escolhido.
- Adicionar 1 BioBall por galão de água para o reservatório de água quando a bomba e do sistema de filtro são montados e ligados à prateleira.
4. Construa a principal linha de alimentação (Figuras 1B e 2).
- Meça e corte um pedaço de ¾ "tubo de PVC para ligar a lâmpada UV para a alimentação principal
- Use um "tee PVC para iniciar a linha de alimentação principal, ligando o tee ao ¾" ¾ de escape PVC vindo do filtro UV. .
- Adicionar uma válvula on-off para o fundo do T do PVC para servir como um dreno para a lavagem de manutenção do sistema.
- Comece a principal linha de abastecimento a partir do topo do ¾ "tee PVC, medindo e corte ¾" PVCtubo com o comprimento desejado para proporcionar tubos de alimentação para cada uma das prateleiras na cremalheira.
- Instale ¾ "tees de PVC para as linhas horizontais que entrarão cada prateleira do rack.
- Opcionalmente (e sugeriu), adicionar uma ¾ "on-off válvula para cada linha de fornecimento de prateleira para permitir o isolamento de cada prateleira e um design modular do sistema.
- Use um tubo de PVC de ¾ "como uma redução da pressão de linha na prateleira de cima. Se esta linha passa sobre a parte de trás da prateleira, prateleira para usar este armazenamento. Terminar a redução de pressão de linha na linha de escape principal (Figura 1B) com um ¾ "válvula de ligar-desligar.
- Uma vez que os passos acima foram concluídos, prime e cimentar o tubo de PVC em conjunto, como feito anteriormente, quando a construção do sistema de reservatório e filtração.
5. Construa a principal linha de escape (Figuras 1C e 2).
- Executar o comprimento vertical da linha de escape principal para o outro lado da cremalheira from da linha de alimentação principal. Use um tubo de 2 "PVC para esta linha vertical para receber a linha de alimentação principal para as linhas de topo e de drenagem dos tanques de peixes de cada prateleira.
- Corte os pedaços de 2 "tubo de PVC para a linha de escape principal vertical e usar 2" tees PVC para receber as linhas de drenagem do tanque de peixes de cada prateleira. Termine a linha de escape principal no tanque de estoque para expelir a água reciclada por um filtro de esponja.
- Corte uma abertura de uma polegada de todo o comprimento dos dois "pedaços de tubos de PVC e anexar a linha de escape principal vertical com PVC t-shirt para as linhas horizontais de drenagem dos tanques de peixe.
- Tampe as duas "linhas de drenagem horizontais com um 2" cap PVC.
- Prime e cimentar as peças usando os acessórios necessários (conectores, mamilos ou cotovelos).
6. Construir os tanques de peixes (Figura 3).
- Com a perfuração, corte um "furo na parte de trás do tanque de peixes 1" 1 1/8 abaixo da borda superior com uma serra craniana.
- Encaixe e aperte a 90 graus 3/4 "rosca cotovelo PVC ao adaptador macho para criar o tubo de escape do tanque de peixes. Adicionar um pedaço de malha fina antes de aparafusar a porca de fixação para evitar peixe-zebra passar pelo sistema de escape.
- Coloque o tanque de peixes com seu final do tubo de escape para o espaço aberto da linha de drenagem atrás dos tanques
7. A partir do sistema de água
- Em vários recipientes, tais como a utilizada para o reservatório, medida três vezes a quantidade de água contida no interior do sistema. Deixe que esta água repousar à temperatura ambiente para o condicionamento durante 48 horas.
- Adicionar água para o sistema e deixá-lo circular durante um período mínimo de 3 dias.
- Mudar a água no sistema vigorosamente durante os primeiros 3 dias de circulação, a fim de libertar o sistema de contaminantes that residem dentro dos tubos.
- Adicionar zebrafish arranque e permitir que o ciclo de nitrogênio para se estabelecer. Normalizar o pH para um consistente 7. Mantenha sete peixe-zebra por 1,8 L, e alimentá-los duas vezes por dia durante a semana e uma vez por dia durante a semana, como sugerido por Linbo 4 e 6 McNabb.
- Monitorar o nitrato de (<75 mg / L), nitrito (<10 mg / L), e de amónio (0 mg / L) por dia durante a primeira semana após a adição de peixe, e duas vezes por semana, uma vez os níveis desejados foram mantidas com as mudanças de água regulares .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Construção do sistema de bomba e Flters
Uma vez que o rack é montado e criou o primeiro passo é construir o sistema de bomba e filtro. Os filtros são ligados ao sistema de bomba e está localizado acima do nível inferior da primeira prateleira, que permite uma fácil manutenção e de substituição do filtro. Do mesmo modo, a lâmpada UV é conectado com o tubo de PVC de filtro e mantida no lugar com os plásticos de laços de fio para permitir a fácil substituição de uma lâmpada de UV, conforme necessário (Figura 4A). Imediatamente após a bomba de um filtro de papel, filtro de carvão ativado, e uma lâmpada UV são instalados via tubo de PVC. BIOBALLS são adicionados ao tanque para fornecer a superfície para o crescimento de bactérias, que converte os resíduos de amoníaco tóxico para os nitratos. Uma BioBall por galão de água no sistema é de área suficiente para permitir o crescimento bacteriano. A tampa do reservatório de plástico pode ser montado de modo que, em caso de excesso dos BIOBALLS vai permanecer no reservatório e possibilidades de contaminação são minimizados. Embora um evento excesso é muito pouco provável, de um sistema de drenagem (adicionando um tubo de drenagem na parte superior do reservatório) é uma adição simples que pode ser feita para o sistema.
A construção da linha de alimentação principal
O segundo passo consiste em montar a principal linha de fornecimento de água que vai alimentar a cada compartimento que contém os tanques de peixes-zebra (Figura 4B). Esta linha é ligada à lâmpada de UV com um pedaço de tubo de PVC. Esta linha corre verticalmente e lateralmente ao rack através de um tee PVC. A extremidade inferior do T é utilizado para ligar uma peça de tubo de PVC, que servirá como uma válvula de drenagem para todo o sistema.
As principais linhas que alimentam os tanques correm horizontalmente para quatro compartimentos: topo da segunda prateleira, parte superior da terceira prateleira, parte superior da terceira prateleira, e inferior da quinta prateleira. Desde o início da segunda, terceira e quarta linhas de prateleira fornecer água para os tanques de peixes correm no Midline das prateleiras. Cada uma dessas linhas têm on-off válvulas individuais, o que permite o controle de compartimentos individuais.
Um colector de irrigação porta 9 está ligada à extremidade das linhas horizontais, e estes irrigantes fornecer água para os tanques de peixes flexível através de tubagem de ¼ "(Figura 4B). Cada porta do colector de irrigação tem uma válvula construído em on-off. Além disso, uma válvula de ligar-desligar é colocada na extremidade do tubo ligado a cada porta, perto da entrada do tanque de peixes, para facilitar o acesso e controle de fluxo de água. O tubo será inserido dentro do tanque por um buraco perfurado na tampa. Isso vai ajudar a manter o tubo firmemente inserido no tanque.
A linha que corre na parte superior da quinta prateleira é usada para aliviar a pressão e que é controlada por uma válvula on-off indivíduo. Recomenda-se esta linha de correr na parte de trás da quinta prateleira de maneira a que esta área pode ser usada para o armazenamento. Desde o maiA linha n funcionar na linha média do lado da cremalheira, é trazido para a parte de trás através de um cotovelo de PVC e um pedaço de tubo de PVC, e depois corre longitudinalmente (horizontal) como a linha de alívio de pressão utilizando um outro cotovelo de PVC e uma peça de tubo de PVC. A linha de alívio de pressão termina na linha de escape principal que corre verticalmente no outro lado das prateleiras e termina no reservatório de água (esta linha de escape é feito de 2 "tubo de PVC, ver abaixo).
A construção da linha principal de escape
O terceiro passo é o de montar o sistema de escape, o qual corre lateralmente para a prateleira, para o lado onde o reservatório de água é colocada (Figura 4C). Este sistema é construído usando 2 "tubo de PVC e recolhe a água que vem da linha de alívio de pressão, e do tanque de peixes de drenagem (ver a construção do tanque de peixes abaixo). A linha de escape principal corre verticalmente, ligando o tubo de alívio de pressão na parte superior da prateleira e que termina na água de reservoir. Além disso, a linha de escape principal recebe a drenagem dos tanques de peixes através de tubos de 2 "PVC horizontais que se conectam à linha de escape principal via tees PVC. Estes tubos de drenagem horizontais têm corte longitudinal de 1 'para receber a água de drenagem dos tanques de peixe (veja abaixo). Estas linhas de drenagem horizontais correr na parte de trás e nas partes inferiores das prateleiras e ter uma inclinação menor que permite que a água drenada de correr para a linha de escape principal pela gravidade. Almofadas de filtro de esponja são adicionados às linhas de drenagem horizontal de modo que o escoamento da água do tanque de peixes cai sobre as esponjas e filtra os detritos. Todo um sistema montado é retratado na Figura 5.
Construção de tanques de peixes
Um tanque de peixe representativo é mostrado na Figura 6. A extremidade da linha de drenagem do tanque de peixe é colocado na linha de drenagem horizontal (ver acima na secção de linha de escape). Uma malha de fio é inserido na linha de drenagem no tanque de peixes para evitar opeixe-zebra a partir de natação para fora do tanque. Estes tanques particulares têm tampas que impedem o peixe de escapar e também minimizar as oportunidades de contaminação. Se ocorrer estouro tampas do tanque vai impedir que o peixe de cair no chão. Os tanques com tampas são ideais, mas se um sistema que é construído contém tanques sem tampa, em seguida, um pequeno buraco pode ser perfurados perto do topo do tanque. Isso vai permitir que a água para escapar enquanto impedir que o peixe de escapar.
Funcionamento
Uma colônia de peixe-zebra poderia ser mantida por protocolos disponíveis e estabelecidos descritos em outros lugares 3- 6. Resumidamente, a unidade permite que o sistema de bomba para circular o volume do sistema de cerca de 75 vezes por hora, através do ajuste da taxa de fluxo para cada adulto (ou tanque de larvas de peixe) a cerca de 85 ml / min (ou 45 ml / min para o Tanque de larvas de peixe) . A qualidade da água é mantido por meio de filtração biológica activa e mudanças de água em pequena escala (~ 5% do volume do sistema), conforme necessário. O monitoramento diáriode pH, a condutividade, o oxigénio dissolvido (OD) níveis e temperatura são necessários para manter condições consistente. Kits estão disponíveis comercialmente para medir pH e níveis de OD. Medidores de condutividade também estão disponíveis para compra. A fim de testar estas variáveis diário, remover 250 ml de água a partir do reservatório e realizar a análise. O nível de pH deve ser mantida em 7,2, DO deve ser inferior a 6 mg, e condutividade entre 500 ms e 1300 uS. (Fonte aqui) Temperatura deve ser mantida a 28,5 ° C. Manutenção do sistema regular (3-4 semanas) inclui um aproximado de 30% mudança da água e da limpeza e substituição de pastilhas de filtragem e carvão.
Figura 1: Três principais componentes de uma instalação de peixe-zebra. A. O sistema de bomba e filtros estão localizados na parte inferior da prateleira (primeiroshelf) e ligar o tanque de estoque de água com a principal linha de abastecimento. B. A principal linha de abastecimento deriva da lâmpada UV e fornece água para os três prateleiras superiores que contêm os tanques de peixes. Note-se que cada compartimento de prateleira é alimentada de forma independente e pode ser controlado individualmente (ligado ou desligado) por meio de uma válvula. Esta linha principal tem também a válvula de drenagem principal na extremidade de fundo, e na extremidade superior como uma linha continua de alívio de pressão, que termina na linha de escape principal. C. A linha de escape principal recebe a água a partir da linha de alívio de pressão e do diferente compartimentos e tanque de peixes termina nos tanques de estoque de água. Note que cada prateleira tem uma linha de escape tanque de peixes que são tubos de PVC e são longitudinalmente aberto para receber a água para os tanques de peixes individuais. Estas linhas estão inclinados para permitir que a água a correr por gravidade para a linha de escape principal.Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2:. Três principais componentes de uma instalação de peixe-zebra montado e prontamente funcional Note-se que o tanque de estoque de água já tem bioballs. A água a partir da linha principal de escape irá cair sobre um filtro colocado na esponja de malha acima do nível da água (por motivos de clareza este não está representado na figura). Note-se que, para maior clareza a segunda prateleira tem apenas alguns tanques de peixes descritas, o irrigador mostrado tem apenas 4 tubos abastecimento, ea linha do tanque de descarga de peixe é transparente. Cada prateleira do rack pode conter nove tanques de 1 L de peixes e tem um irrigador porta 9.
Figura 3:. Unidade de tanques de peixes do tanque de peixes é adquirido em uma loja regular animal de estimação e tem uma capacidade de 2 L A. O sistema de drenagem do tanque de peixes é construído através da perfuração de um "buraco 1 1/8 na parte de trás. o tanque, em seguida, 3/4 "peças de tubo de PVC são colocados em um" L "invertido forma usando um 3/4" cotovelo de PVC. Este sistema de drenagem cai para o lado aberto das linhas de escape do tanque de peixes localizados na parte de trás dos tanques de peixes. B. Imagem que descreve a instalação de uma rede para o sistema de drenagem do tanque de peixes. A malha impede que o peixe-zebra de ser drenado para as linhas de escape.
Figura 4: As peças individuais de construção. A. O sistema de filtro e uma bomba de três é na prateleira inferior do sistema. A bomba está ligado a três mechanical filtros seguido por um filtro de UV para eliminar contaminantes da água do sistema. B. A linha de alimentação horizontal termina num colector de irrigação porta 9, a qual irá fornecer a água fresca e de oxigénio para cada tanque. A linha de alimentação para cada prateleira tem uma válvula on-off que pode ser usado para impedir que a água para cada prateleira para fins de limpeza e de quarentena. C. A linha de escape tanque de peixes deságua no principal linha de escape para reinserir circulação. A linha de alívio de pressão também deságua na linha de escape principal.
Figura 5:. Concluída sistema O sistema completado, contém um sistema de bomba e filtro, uma linha de fornecimento principal vertical, uma linha de fornecimento para cada prateleira horizontal, uma linha de escape do tanque, uma linha de alívio de pressão, e uma linha de escape principal para um sistema de circulação contido .
Figura 6:. Tanque de peixes Representante O tanque de peixes contém uma linha de drenagem que irá se conectar com as linhas de drenagem horizontais no sistema.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
O principal objetivo deste artigo é demonstrar que a construção de uma instalação de peixe-zebra funcional não é complicado e pode ser construído por pesquisadores de peixes novatos com conhecimento mínimo de construção. Além disso, este artigo mostra que os materiais para esta facilidade zebrafish funcional pode ser adquirido facilmente e acessível a partir de lojas de pet locais ou lojas de ferragens. Uma vez que todos os materiais e ferramentas foram adquiridos a construção do sistema e os tanques de peixes leva cerca de um dia de trabalho. A primeira corrida de 72 horas permite que qualquer falha no sistema, tais como vazamentos ou baixa pressão de água, a ser determinado. Esta primeira execução permite também contaminantes dentro do sistema a ser retirados de circulação. Por exemplo, a cola de PVC pode conter materiais orgânicos perigosos que vai ser removida durante as primeiras várias horas de circulação. O sistema tem uma válvula de drenagem principal que permite e facilita o ajustamento do volume de água e substituição para mainten ance. Além disso, o sistema tem uma linha de alívio de pressão que também facilita o ajustamento da pressão da água. Esta linha é útil quando apenas um ou dois compartimentos (prateleiras) serão usadas uma vez que permite a regulação da pressão da água.
A instalação é um projeto modular que permite a utilização de 1, 2 ou 3 compartimentos (36 tanques de 1,8 L de peixe) para atender as necessidades de capacidade dos pesquisadores individuais. As válvulas liga-desliga colocados em cada compartimento de facilitar o isolamento das diferentes partes do sistema. Este sistema de válvula é também útil para evitar a disseminação da infecção potencial, e para facilitar a limpeza do sistema de compartimentos. Além disso, o abastecimento de água a cada tanque de peixes tem duas válvulas, uma no irrigador porta 9 e um no tubo flexível à entrada do tanque de peixes. Este sistema de válvula dupla permite o ajuste fino da pressão da água e também facilitar os procedimentos de limpeza ou de extração de peixe ou manipulação.
t "> A documentação adequada de amônia, nitrito e nitrato é essencial para o bom funcionamento da instalação. Para isso, os bioballs são importantes, pois fornecem a superfície suficiente para bactérias nitrificantes para o crescimento. Uma vez que a colônia de peixe é estável, a instalação pode ser facilmente modificado para usar tanques de peixes maiores ou menores. Além disso, a instalação pode ser modificado para produzir peixes-zebra seguindo os protocolos disponíveis na literatura 5. Além disso, a instalação pode ser modificado para adicionar outros módulos ou racks para expandir as capacidades do sistema .O fluxo de água fresca para dentro do tanque fornece suficiente oxigénio fresco, de modo que não há necessidade de adicionar um oxigenador adicional. A troca de ar que ocorre no reservatório de água é uma fonte suficiente de oxigénio. Se os tanques maiores são usadas então pode ser adicionado uma fonte de oxigênio suplementar. Também deve-se notar que, sem fluxo de água doce no tanque dos peixes vai sufocar, por isso é vital que o fluxo de água be monitorados de perto para assegurar que nada está bloqueando as linhas de água. É essencial que a temperatura da água ser mantida a 28,5 ° C. Uma temperatura constante, pode ser conseguido mantendo a temperatura da sala na qual o sistema se encontra a 28,5 ° C. Em alternativa, uma fonte de aquecimento do aquário podem ser adquiridos, a fim de manter uma temperatura constante. Manter a qualidade da água é essencial para resultados experimentais consistentes. Existem muitas fontes disponíveis para ajudar a determinar parâmetros exatos de qualidade da água com base nas condições experimentais.
Os tanques de peixes são limpos a cada 7-10 dias, e posteriormente pulverizadas com álcool 70% antes da reutilização. Sugere-se também que o rack cromado ser limpos e secos neste momento para evitar ferrugem e construir. Se forem observados sinais de contaminação, tanques individuais são desinfetados com uma solução de água sanitária 2% 8. Saúde geral é monitorada com atenção especial aos sinais de infecção (inchaço, úlceras cutâneas, exolpthalmia, cor off, etc.), gás doença bolha (devido às concentrações supersaturadas de gás, mudanças rápidas na temperatura da água, problemas no sistema de encanamento), hiperplasia branquial (altos níveis de amônia, cobre, zinco ou cloro ativo na água) , escoliose (devido à deficiência de vitamina C) ou ovo associado a inflamação e fibroplasias (devido a retenção de ovos fêmea que empurra para fora da parede abdominal).
A construção desta instalação é flexível e permite um sistema de menor ou expandido. Ao tomar as idéias básicas de construção, esta facilidade pode ser organizado para atender às necessidades básicas de pesquisa de vários tamanhos. Porque a construção pode variar conforme a instituição, a etapa mais crítica no protocolo é o primeiro prazo de 72 horas, e o acompanhamento diário de amônio, nitrato, e os níveis de nitrito durante a primeira semana de construção. Excelente qualidade da água irá ajudar na manutenção da saúde dos peixes. Muitos dos protocolos atuais disponíveis para um syste peixe acessívelm exigem uma água-flow ao ar livre 3. Ter água protegida do ar livre minimiza chance de contaminação da água e evaporação. Manutenção de um sistema fechado é mínima quando comparado com os sistemas de ar aberta comuns.
Se surgirem problemas na construção da instalação (vazamentos, baixa pressão de água, etc.) Pode-se substituir um tubo cimentado por simplesmente cortando a área de preocupação na instalação e substituição de peças da mesma maneira passo a passo como listado acima . Este sistema pode ser vulnerável a grande perda de água devido a pequenos vazamentos, que podem tornar-se perigosos para os peixes se passar desapercebida. Para um investimento mínimo um dispositivo de desligamento flutuador irá detectar quando o nível da água caiu abaixo de um limite seguro e desligar o sistema. Isto pode ser necessário se a acompanhar de perto o sistema não está disponível. Com as modificações corretas, há muito poucas limitações deste sistema enfrenta, além de falta de mobilidade. Uma vez que este sistema é construired é muito difícil de se mover sem cortar algumas partes e recementing-los no novo local. Esta limitação da mobilidade significa que o sistema irá idealmente devem ser mantidos em um espaço de trabalho. Se a mobilidade é desejada há pequenas modificações que podem ser feitas para aumentar a flexibilidade. Adicionar uma união no início de cada abastecimento lateral, a linha de alívio de pressão, a descarga da bomba, e acima da válvula de drenagem. As linhas de drenagem pode ser seco montado em vez de cimentada no lugar. Adicionando um acoplamento flexível para a seção de bomba também ajudará na mobilidade. Este é um adicional
A construção simples e manutenção desse sistema significa que os protocolos atuais encontrados na literatura estão disponíveis para as pequenas instituições de pesquisa 1,2,10-12. A manutenção é simples, tornando este um sistema ideal para iniciação científica do aluno. Este sistema é excelente para laboratórios de ensino e pesquisa independentes, também.
Em conclusão, este tipo deinstalação é acessível, fácil de construir, e funcional para a experimentação in vivo. Esta facilidade é ideal para as instituições com recursos limitados e espaço pecuária limitada. Pesquisa de peixe-zebra é uma área que é utilizado para vários tipos de estudos, incluindo farmacologia, fisiologia, desenvolvimento, ou mesmo os estudos genéticos. Na verdade, o grande número de mutantes disponíveis ou linhas de peixes-zebra transgénicos suporta inovadores de pesquisa em virtualmente todos os campos da biomedicina. Além disso, este sistema pode ser usado para aumentar as oportunidades de pesquisa e experiências de sala de aula para majores da ciência em pequenas instituições predominantemente de graduação e inspirar a próxima geração de cientistas biomédicos.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Os autores declaram não haver conflitos de interesse para este papel.
Acknowledgments
Os autores gostariam de agradecer ao Instituto de Investigação de Presbyterian College School of Pharmacy para apoio financeiro deste projecto através dos Prêmios pequena farmácia de Investigação & Collaboration (SPARC) Award. Os autores agradecem ao Sr. John Smink, Gerente do Laboratório de Pesquisa de Animais Aquáticos da Universidade Clemson, Clemson, SC por sua técnica de revisão assistência manuscrito.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Item | Brand | Quantity | |
| 74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit | Style Selections | 1 | |
| 18-Gallon General Bucket/Tote | Centrex Plastics: LLC Rugged Tote | 1 | |
| 6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord | Master Electrician | 1 | |
| 9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp | Smartpond | 1 | |
| Whole House Water Replacement Filter | Whirlpool | 6 | |
| Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing | Whirlpool | 2 | |
| Thread Seal Tape | William H Harvey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC PVC Cement | Oatey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC Primer | Oatey | 1 | |
| 1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing | Mister Landscaper | 1 | |
| 1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve | Mister Landscaper | 33 | |
| 9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter | Mister Landscaper | 6 | |
| Drop-In Filter with House | Whirlpool | 6 | |
| 2-in Dia 90-Degree PVC Elbow | LASCO | 3 | |
| 2-in Dia 90-Degree Tee | LASCO | 3 | |
| 3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow | LASCO | 15 | |
| 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 7 | |
| 3/4-in Dia PVC Tee | LASCO | 12 | |
| 2-in Dia PVC Cap | LASCO | 3 | |
| 1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 2 | |
| 3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve | American Valve | 5 | |
| 1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | Lasco | 8 | |
| 3/4-in Dia PVC Cap | Lasco | 1 | |
| 2-In x 5-Ft Pvc Pipe | Charlotte Pipe | 4 | |
| ¾-In x 10-Ft Pvc pipe | Charlotte Pipe | 3 | |
| 11/16x1-7/80 PVC ring | SXT | 10 | |
| ½” PVC male adapter | SXT | 1 | |
| ¾” PVC coupling | SXT | 1 | |
| ½” PVC female adapter | SXT | 1 | |
| link | |||
| 1.8 L Dual Beta Keeper | Top Fin | 27 | |
| ¾” PVC male adapter (w/ #18 O-ring) | SXT | 28 | |
| 90-degree ¾” threaded PVC elbow | SXT | 27 | |
| Fine Mesh | N/A | 1 yard | |
| Bulkhead Connector | N/A | 1 | |
| Hacksaw | N/A | 1 | |
| Drill | N/A | 1 | |
| Hole saw | N/A | 1 | |
| Adjustable Wrench | N/A | 1 | |
| Pliers | N/A | 1 | |
| Tape Measure | N/A | 1 | |
| Safety Glasses | N/A | 1 | |
| Work Gloves | N/A | 1 |
References
- Detrich, H., Westerfield, M., Zon, L. The Zebrafish: Cellular and Developmental Biology, Part A.. , 3rd ed, Academic Press. New York, New York. (2010).
- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
- Kim, S., Carlson, R., Zafreen, L., Rajpurohit, S. K., Jagadeeswaran, P.
- Linbo, T. L. Zebrafish (Danio rerio) husbandry and colony maintenance at the Northwest Fisheries Science Center. U.S. Dept. Commer., NOAA Tech. Memo. 62, (2009).
- Avdesh, A., et al. Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction. J Vis Exp. 69, 4196 (2012).
- McNabb, A., Scott, K., Ochsenstein, E., Seufert, K., Carl, M. Don't be afraid to set up your fish facility. Zebrafish. 9 (3), 120-125 (2012).
- Garcia, R. L., Sanders, G. E. Efficacy of cleaning and disinfection procedures in a zebrafish rerio) facility. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (6), 895-900 (2011).
- Rivas-Boyero, A. A., et al. Pharmacological characterization of a nociceptin receptor from zebrafish (Danio rerio). J Mol Endocrinol. 46 (2), 111-123 (2011).
- Sanchez-Simon, F. M., Zhang, X. X., Loh, H. H., Law, P. Y., Rodriguez, R. E. Morphine regulates dopaminergic neuron differentiation via miR-133b. Mol Pharmacol. 78 (5), 935-942 (2010).
- Velasco, E. M., Law, P. Y., Rodríguez, R. E. Mu opioid from the zebrafish exhibits functional characteristics as those of mammalian mu opioid receptor. Zebrafish. 6 (3), 259-268 (2009).
