Abstract
In vivo la ricerca biomedica è fondamentale per tradurre in risultati in vitro in progressi clinici. Piccole istituzioni accademiche con risorse limitate trovano praticamente impossibile costruire e mantenere strutture tipiche di roditori per la ricerca. Ricerca Zebrafish ha dimostrato di essere una valida alternativa per la ricerca in vivo in farmacologia, fisiologia, sviluppo e studi genetici. Questo articolo dimostra che un impianto di zebrafish funzionale può essere costruito in modo facile e conveniente. Abbiamo dimostrato che un tale impianto potrebbe essere costruito in circa un giorno di lavoro con gli strumenti minimi e competenze. Il costo del serbatoio di pesce facility zebrafish 27 1.8 L costruito in questo studio è stato di circa $ 1.500. Stimiamo che il mantenimento di un primo lavoro di 150 colonie di pesci per 3 mesi è di $ 1.000. Il progetto ha coinvolto gli studenti, che sono stati introdotti per aquaculturing di zebrafish per la ricerca propone.
Introduction
In vivo modelli sono essenziali nel condurre ricerca biomedica completa poiché permettono nella ricerca vitro da tradurre a livello di sistema e organismal. Ad esempio, la ricerca con piccoli mammiferi, ovvero roditori, è stato dimostrato necessario lo sviluppo di farmaci e nel miglioramento di farmaci disponibili. Tuttavia, la complessità (finanziariamente e logisticamente) potrebbe rendere praticamente impossibile costruire e mantenere strutture di roditori per la sperimentazione si propone in ricerca di piccole istituzioni accademiche. Tuttavia, in vivo ricerca può essere eseguita utilizzando altre specie animali che richiedono meno elaborati logistica. Zebrafish (Danio rerio) sono stati utilizzati con successo come un modello in vivo per studiare la genetica, lo sviluppo, fisiopatologia e farmacologia 1,2,10,11,12. Le strutture necessarie per ospitare zebrafish per la sperimentazione sono relativamente semplici e molto meno costoso rispetto a rstrutture Odent. Kim et al. 3 hanno recentemente descritto in dettaglio un sistema di alloggiamento zebrafish 80 serbatoio che può essere costruito per circa 1.500 dollari, che include entrambe le parti e il costo del lavoro. Ciò è in netto contrasto con la quasi 8.500 dollari che sarebbe necessario per l'acquisto di un sistema di 80 tank ready-made da qualsiasi numero di fornitori commerciali. Tuttavia, la descrizione data da Kim et al. può essere complicato e difficile da seguire per i novizi di ricerca di pesce. Noi crediamo che un impianto zebrafish può essere costruito in maniera semplificata per un investimento di 1.500 dollari.
La creazione di una struttura in vivo alle piccole istituzioni accademiche fornisce loro facoltà un ulteriore strumento con cui produrre ricerca più potente e completa. I dati in vitro supportati da in vivo risultati generalmente produrre ricerca biomedica più completo rispetto ai dati ottenuti utilizzando solo metodi in vitro. Pertanto, larealizzazione di un centro di ricerca in vivo migliorerà in modo significativo il successo dell'istituzione nei suoi sforzi globali di ricerca (esposizione studente alla ricerca, pubblicazioni, comunicazioni, ricerca di finanziamenti esterni, ecc.).
La costruzione di un impianto di Zebrafish come quella descritta in questo studio è l'ideale per la ricerca istituzioni accademiche con servizi limitati (o istituzioni senza in vivo strutture di ricerca) durante costrizione financial times.
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Protocol
NOTA: Questi protocolli seguono le linee guida del IACUC di Presbyterian College.
1. Acquisire materiali elencati nella tabella 1.
2. Montare il 5 Shelf Chrome secondo le istruzioni del produttore. Questo verrà utilizzato per ospitare il Fondo.
3. Costruire il serbatoio di acqua e sistema di filtrazione (Figure 1A e 2).
- Utilizzando la Figura 1A come guida, il layout 18 gallone secchio, pompe, filtri e lampada UV per determinare la posizione di installazione finale e la dimensione.
- Una volta che le parti sono disposte, misurare e tagliare il "tubo di PVC ¾ alla lunghezza necessaria per il montaggio. Variare le lunghezze di tutti i tubi in base alle esigenze e alle limitazioni di spazio specifici.
- Montare i tubi e raccordi come indicato in precedenza con il primer PVC e cemento, vedi sotto (3.3.2 e 3.3.3).
- Sand i bordi tagliati del tubo con carta vetrata fino a che non sono lisce al tatto unad non ci sono detriti.
- Prime l'esterno del tubo e l'interno del raccordo con il primer PVC acquistato con il tampone incluso dal primer PVC.
- Cemento tubo e raccordo insieme applicando cemento PVC all'esterno del tubo utilizzando il tampone inclusa. Ripetere l'operazione per tutti i passi che devono cementazione PVC.
- Posizionare il secchio 18 gallone ad un lato della costruzione mensola.
- Installare un connettore paratia lato del serbatoio.
- Collegare un "tubo di PVC ¾ alla paratia.
- Collegare l'altra estremità del ¾ "tubo della pompa con un ¾" filettato fare raccordo.
- Collegare i filtri per la pompa con due gomiti 90 gradi e ¾ "tubo di PVC.
- Utilizzare un filtro di carta seguito da uno filtri a carboni attivi per filtrare detriti e ridurre i livelli di cloro e chimici nell'acqua.
- Collegare la lampada UV al filtri According per le istruzioni del produttore.
- Fissare la pompa e il sistema di filtro per il lato superiore del primo ripiano del rack utilizzando fascette. Variare l'ordine del montaggio e fissaggio secondo la dimensione e la disposizione del ripiano / cremagliera prescelto.
- Aggiungere 1 Bioball per litro d'acqua al serbatoio di acqua quando la pompa e il sistema di filtro sono assemblati e fissati alla mensola.
4. Costruire la linea principale di alimentazione (Figure 1B e 2).
- Misurare e tagliare un pezzo di ¾ "tubo di PVC per collegare la lampada UV alla rete principale
- Utilizzare un ¾ "tee PVC per avviare la linea di alimentazione principale collegando il tee al ¾" gas di scarico in PVC proveniente dal filtro UV. .
- Aggiungere una valvola on-off sul fondo del tee PVC per servire come uno scarico per lavaggio manutenzione del sistema.
- Avviare la linea di alimentazione principale dalla parte superiore del ¾ "tee PVC misurando e taglio ¾" PVCtubo alla lunghezza desiderata per fornire tubi di alimentazione per ciascuno dei ripiani sulla cremagliera.
- Installare ¾ "tee PVC per le linee orizzontali che entreranno ogni ripiano del rack.
- Opzionalmente (e suggerito), aggiungere una ¾ "on-off valvola per ciascuna linea di alimentazione mensola per consentire l'isolamento di ogni ripiano e un design modulare del sistema.
- Utilizzare un "tubo di PVC ¾ come un riduttore di linea sul ripiano superiore. Se questa linea corre sul retro del ripiano, utilizzare questa mensola per immagazzinaggio. Terminare la linea di riduzione della pressione nella linea di scarico principale (Figura 1B) con un ¾ "valvola on-off.
- Una volta che i passi precedenti sono stati completati, primo e cementare il tubo in PVC insieme come fatto in precedenza quando si costruisce il sistema di serbatoio e filtrazione.
5. Costruire la linea principale di scarico (Figure 1C e 2).
- Eseguire la lunghezza verticale della linea principale di scarico verso l'altro lato del rack fROM la linea di alimentazione principale. Utilizzare un tubo da 2 "in PVC per questa linea verticale per ricevere la linea di alimentazione principale delle linee migliori e scarico delle vasche dei pesci provenienti da ogni scaffale.
- Tagliare i pezzi di 2 "tubo di PVC per la linea di scarico principale verticale e utilizzare 2" tee PVC per ricevere le linee di scarico del serbatoio di pesce provenienti da ogni scaffale. Terminare la linea principale di scarico nel serbatoio stock di espellere l'acqua riciclata su filtro di spugna.
- Tagliare una apertura per l'intera lunghezza delle 2 "pezzi di tubo in PVC un pollice e allegare alla linea verticale di scarico principale con PVC tees per le linee di scarico orizzontali dalle vasche dei pesci.
- Tappare le "linee di scarico orizzontali con 2" 2 cap PVC.
- Prime e cementare i pezzi con gli accessori necessari (connettori, capezzoli o gomiti).
6. Costruire le vasche dei pesci (Figura 3).
- Con il trapano, tagliare un "foro posteriore del serbatoio di pesce 1" 1 1/8 sotto il bordo superiore con una sega a tazza.
- Applicare e stringere a 90 gradi 3/4 'filettato gomito PVC all'adattatore maschio per creare il tubo di scarico serbatoio di pesce. Aggiungere un pezzo di maglia fine prima di avvitare il dado di partecipazione per evitare zebrafish passare attraverso il sistema di scarico.
- Posizionare il serbatoio di pesce con la sua fine tubo di scarico nello spazio aperto della linea di drenaggio dietro i carri armati
7. Avvio del sistema idrico
- In più contenitori, come quello utilizzato per il serbatoio, misurare tre volte la quantità di acqua contenuta all'interno del sistema. Lasciare riposare l'acqua a temperatura ambiente per condizionamento per 48 h.
- Aggiungere acqua al sistema e lasciare circolare per un minimo di 3 giorni.
- Cambiare l'acqua nel sistema vigorosamente durante i primi 3 giorni di circolazione al fine di liberare il sistema di contaminanti that risiedono all'interno dei tubi.
- Aggiungere zebrafish avviamento e consentire al ciclo dell'azoto per ottenere stabilito. Normalizzare il pH di un coerente 7. Tenere sette zebrafish per 1.8 L, e dar loro da mangiare due volte al giorno durante la settimana e una volta al giorno durante i fine settimana, come suggerito da LiNbO 4 e 6 McNabb.
- Monitorare il nitrato (<75 mg / l), nitriti (<10 mg / l), e di ammonio (0 mg / L) al giorno durante la prima settimana dopo l'aggiunta di pesce, e livelli di due volte a settimana, una volta desiderati sono stati mantenuti con cambi d'acqua regolari .
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Representative Results
La costruzione del sistema di pompa e fltri
Una volta che il rack è assemblato e configurato il primo passo è quello di costruire il sistema di pompa e filtro. I filtri sono collegati al sistema di pompa e si trovano al di sopra del livello inferiore del primo ripiano, che consente una facile manutenzione e sostituzione del filtro. Analogamente, la lampada UV è collegato con il tubo di PVC al filtro e tenuto in posizione con fascette di plastica per permettere una facile sostituzione della lampada UV come necessario (Figura 4A). Immediatamente dopo la pompa un filtro di carta, filtro a carboni attivi, e una lampada UV vengono installati tramite tubo in PVC. Bioballs vengono aggiunti al serbatoio per fornire la superficie per la crescita di batteri, che converte l'ammoniaca rifiuti tossici ai nitrati. Uno Bioball per litro d'acqua nel sistema è superficie sufficiente per consentire la crescita batterica. Il coperchio del serbatoio plastica può essere montato in modo che in caso di overflow le bioballs rimarranno nel serbatoio e le probabilità di contaminazionene sono ridotti al minimo. Anche se un evento di overflow è molto improbabile, un sistema di scarico (aggiunta di un tubo di scarico nella parte superiore del serbatoio) è un facile aggiunta che può essere fatto al sistema.
Costruzione della Fornitura Main Line
Il secondo passo è quello di montare la tubazione principale dell'acqua che alimenta ogni scomparto che conterrà i serbatoi di zebrafish (Figura 4B). Questa linea è collegata alla lampada UV con un pezzo di tubo in PVC. Questa linea corre verticalmente e lateralmente al rack attraverso un tee PVC. L'estremità inferiore del tee viene utilizzato per collegare un pezzo di tubo in PVC che servirà come una valvola di scarico per l'intero sistema.
Le linee principali che alimentano i serbatoi eseguire orizzontale per quattro scomparti: all'inizio del secondo ripiano, all'inizio del terzo ripiano, all'inizio del terzo scaffale, e inferiore del quinto ripiano. Poiché la parte superiore della seconda, terza e quarta riga mensola fornire acqua agli acquari corrono al midline dei ripiani. Ognuna di queste linee hanno singole valvole on-off, che permette il controllo dei singoli compartimenti.
Un irrigazione collettore 9 porta è fissato all'estremità delle linee orizzontali, e questi irrigatori alimentazione dell'acqua al acquari attraverso flessibile ¼ "tubo (Figura 4B). Ogni porta del collettore irrigazione ha una valvola incorporata in on-off. Inoltre, una valvola on-off è posizionato all'estremità del tubo collegato a ciascuna porta, vicino all'ingresso serbatoio di pesce, per un facile accesso e controllo del flusso dell'acqua. Il tubo viene inserito nel serbatoio da un foro praticato nel coperchio. Questo sarà utile per tenere il tubo saldamente inserita nel serbatoio.
La linea che corre sulla parte superiore del quinto ripiano è usato come un sollievo di pressione ed è controllata con una singola valvola on-off. Si raccomanda di avere questa linea eseguire sul retro del quinto ripiano in modo che questa zona può essere utilizzato per la memorizzazione. Dal momento che il mailinea n corre sulla linea mediana del lato del rack, viene portato alla parte posteriore con un gomito PVC e un pezzo di tubo in PVC, e poi scorre longitudinalmente (orizzontale), la linea di sollievo di pressione utilizzando un altro gomito PVC e un pezzo di tubo in PVC. La linea di sollievo di pressione termina nella linea di scarico principale che corre verticalmente al lato delle cremagliere e termina nel serbatoio dell'acqua (questa linea di scarico è realizzato di 2 "tubo di PVC, vedi sotto).
La costruzione della principale linea di scarico
Il terzo passo è per assemblare il sistema di scarico, che corre lateralmente al rack, sul lato in cui è collocato il serbatoio dell'acqua (Figura 4C). Questo sistema è costruito utilizzando 2 "tubo di PVC e raccoglie l'acqua che esce dalla linea di sollievo pressione, e dal serbatoio di pesce di scarico (vedi costruzione vasca per i pesci sotto). La linea di scarico principale corre verticalmente, collegando la linea di sollievo di pressione sulla parte superiore del rack e termina in re acquaservoir. Inoltre, la linea di scarico principale riceve lo scarico dai serbatoi di pesce attraverso tubi 2 "PVC orizzontali che collegano alla linea di scarico principale via tees PVC. Questi tubi di scarico orizzontali hanno un taglio longitudinale 1 'a ricevere l'acqua di scarico dai serbatoi di pesce (vedi sotto). Queste linee di scarico orizzontali eseguire sul retro e sulle parti inferiori dei ripiani e avere una pendenza minore che permette l'acqua drenata per eseguire la linea principale di scarico per gravità. Pastiglie filtro Spugna vengono aggiunte alle linee di drenaggio orizzontali in modo che l'acqua di scarico del serbatoio di pesce cade sulle spugne e filtra i detriti. Un intero sistema assemblato è raffigurato in Figura 5.
Costruzione di pesce serbatoi
Un serbatoio di pesce rappresentativo è mostrato in Figura 6. L'estremità della linea di scarico del serbatoio di pesce è posto nella linea di scarico orizzontale (vedi sopra sezione sulla linea di scarico). Una rete metallica viene inserita nella linea di scarico nel serbatoio di pesce per prevenire lazebrafish dal nuoto dal serbatoio. Questi serbatoi particolari hanno coperchi che impediscono il pesce di fuggire e anche di ridurre al minimo le opportunità di contaminazione. Se si verifica overflow di coperchi dei serbatoi impediranno pesce di cadere a terra. Serbatoi con coperchi sono ideali, ma se il sistema viene costruito contenente serbatoi senza coperchi poi un piccolo foro può essere forato nella parte superiore del serbatoio. Questo permetterà all'acqua di fuoriuscire mentre evitare che il pesce di fuggire.
Funzionamento
Una colonia zebrafish potrebbe essere mantenuto dai protocolli disponibili e consolidate descritte altrove 3- 6. In breve, la nostra struttura permette alla pompa di sistema per far circolare il volume del sistema di circa 75 volte l'ora, per la regolazione della portata per ogni adulto (o serbatoio di pesce larvale) a circa 85 ml / min (o 45 ml / min per il serbatoio di larve) . La qualità dell'acqua è mantenuta per filtrazione biologica attiva e cambi d'acqua su piccola scala (~ 5% del volume di sistema) come necessario. Il monitoraggio quotidianodi pH, conducibilità, sono necessari per mantenere le condizioni di costante di ossigeno disciolto (DO) i livelli, e temperatura. I kit sono disponibili in commercio per misurare pH e DO livelli. Conduttimetri sono disponibili per l'acquisto. Per testare queste variabili giornaliera, rimuovere 250 ml di acqua dal serbatoio ed effettuare analisi. Il livello di pH dovrebbe essere mantenuta a 7,2, DO deve essere inferiore a 6 mg, e conducibilità tra 500 mS e 1.300 mS. (SOURCE QUI) temperatura deve essere mantenuta a 28,5 ° C. Manutenzione del sistema regolare (3 - 4 settimane) include una variazione approssimativa del 30% di acqua e la pulizia e la sostituzione delle pastiglie filtro e carbone.
Figura 1: Tre componenti principali di un impianto di zebrafish. A. Il sistema di pompa e filtri si trovano nella parte inferiore della mensola (primamensola) e collegare il serbatoio di acqua stock con la linea di alimentazione principale. B. La linea di alimentazione principale deriva dalla lampada UV e fornisce acqua ai tre ripiani superiori che contengono le acquari. Si noti che ogni vano segnatura viene fornito in modo indipendente e può essere controllata singolarmente (acceso o spento) tramite una valvola. Questa linea principale ha anche la valvola di scarico principale all'estremità inferiore e all'estremità superiore continua come una linea sollievo pressione che termina nella linea di scarico principale. C. La linea di scarico principale riceve acqua dalla linea di sollievo di pressione e dalla diversa pesce compartimenti serbatoio e finisce nei serbatoi acqua stock. Si noti che ogni ripiano ha una linea di scarico serbatoio di pesce che sono tubi in PVC e sono longitudinalmente aperti a ricevere l'acqua per i singoli acquari. Queste linee sono leggermente inclinati per permettere all'acqua di scorrere per gravità alla linea di scarico principale.Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 2:. Tre componenti principali di un impianto di zebrafish assemblato e facilmente funzionale noti che il serbatoio di acqua stock ha già bioballs. L'acqua della linea di scarico principale cadrà su un filtro di spugna posto sulla maglia di sopra del livello dell'acqua (per chiarezza non è rappresentato in figura). Si noti che per chiarezza secondo ripiano ha solo alcune vasche di pesci raffigurati, l'irrigatore mostrato ha solo 4 tubi di alimentazione, e la linea di scarico serbatoio di pesce è trasparente. Ogni mensola del rack può contenere nove vasche 1 L pesce e hanno un irrigatore 9 porto.
Figura 3:. Unità Fish Tank Il serbatoio di pesce è acquistato in un negozio normale animale domestico e ha una capacità di 2 L A. sistema di drenaggio Il serbatoio di pesce è costruito da perforazione di un "buco 1 1/8 nella parte posteriore di. il serbatoio, poi 3/4 "pezzi di tubo in PVC sono posizionati in una rovesciata" "forma con un 3/4" L gomito PVC. Questo sistema di drenaggio cadrà nel lato aperto delle linee di scarico serbatoio pesce situati nella parte posteriore delle acquari. B. Immagine raffigurante l'installazione di una maglia nel sistema di scarico serbatoio di pesce. La maglia impedisce il zebrafish si scarichi alle linee di scarico.
Figura 4: costruzione parti individuali. A. Il filtro e la pompa sistema a tre è sulla cremagliera inferiore del sistema. La pompa è collegata a tre Mechanfiltri ici seguita da un filtro UV per eliminare contaminanti dall'acqua dell'impianto. B. La linea di alimentazione orizzontale termina in un collettore di irrigazione 9 porta, che fornirà acqua fresca e ossigeno per ogni serbatoio. La linea di alimentazione di ogni ripiano dispone di una valvola di intercettazione che può essere utilizzato per arrestare acqua per ogni ripiano per la pulizia e quarantena. C. La linea di scarico serbatoio di pesce sfocia nella linea di scarico principale di rientrare circolazione. La linea di scarico della pressione sfocia anche nella linea di scarico principale.
Figura 5:. Completato sistema Il sistema completo contiene un sistema di pompe e filtri, una linea di alimentazione principale verticale, una linea di alimentazione orizzontale per ogni ripiano, una linea di scarico del serbatoio, una linea di scarico della pressione, e una linea di scarico principale per un sistema di circolazione contenuta .
Figura 6:. Serbatoio di pesce rappresentativa Il serbatoio di pesce contiene una linea di drenaggio che collegherà con le linee orizzontali drenaggio del sistema.
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Discussion
Lo scopo principale di questo articolo è quello di dimostrare che la costruzione di un impianto di zebrafish funzionale non è complicato e può essere costruito da ricercatori di pesce alle prime armi con il minimo della conoscenza costruzione. Inoltre, questo articolo dimostra che i materiali di questo strumento zebrafish funzionale possono essere acquistate facilmente e conveniente nei negozi di animali da compagnia locali o negozi di ferramenta. Una volta che tutti i materiali e gli strumenti sono stati acquisiti la costruzione del sistema e gli acquari richiede circa un giorno lavorativo. La prima esecuzione 72 ore permette a qualsiasi guasto nel sistema, come ad esempio perdite o bassa pressione dell'acqua, da determinare. Questa prima esecuzione consente anche di contaminanti all'interno del sistema per essere rimosso dalla circolazione. Ad esempio, la colla PVC può contenere materiale organico pericolosi che sarà rimossa durante le prime ore di circolazione. Il sistema ha una valvola principale drenante che permette e facilita la regolazione del volume e dell'acqua sostituzione mainten ance. Inoltre, il sistema ha una linea sollievo pressione che facilita la regolazione della pressione dell'acqua. Questa linea è utile quando saranno utilizzati solo uno o due scomparti (scaffali) in quanto permette la regolazione della pressione dell'acqua.
La struttura ha un design modulare che consente l'utilizzo di 1, 2 o 3 vani (36 acquari di 1,8 L) per soddisfare le esigenze di capacità dei singoli ricercatori. Le valvole di intercettazione disposti in ciascun compartimento facilitare l'isolamento delle diverse parti del sistema. Questo sistema valvola è anche utile per evitare potenziale di diffusione dell'infezione, e per facilitare la pulizia del sistema compartimenti. Inoltre, ogni pesce approvvigionamento idrico serbatoio ha due valvole, una alla irrigatore 9 porta e uno al tubo flessibile all'ingresso del serbatoio di pesce. Questo sistema a doppia valvola permette la messa a punto della pressione dell'acqua e facilitare anche le procedure di pulizia o di estrazione pesci o manipolazioni.
t "> Una documentazione adeguata di ammoniaca, nitriti e nitrati è essenziale per il corretto funzionamento della struttura. Per questo, i bioballs sono importanti perché forniscono superficie sufficiente per i batteri nitrificanti alla crescita. Una volta che la colonia di pesce è stabile, la struttura può essere facilmente modificati per utilizzare più o meno grandi acquari. Inoltre, l'impianto può essere modificato per allevare zebrafish seguendo i protocolli disponibili in letteratura 5. Inoltre, l'impianto può essere modificato per aggiungere altri moduli o rastrelliere per espandere le capacità del sistema .Il flusso di acqua fresca nella vasca fornisce abbastanza ossigeno fresco in modo che non vi è necessità di aggiungere un ulteriore ossigenatore. Lo scambio d'aria che si verifica nel serbatoio di acqua è una fonte sufficiente di ossigeno. Se i serbatoi più grandi vengono utilizzate quindi una fonte di ossigeno supplementare può essere aggiunto. Va inoltre notato che senza flusso di acqua fresca nella vasca i pesci soffocarlo, quindi è fondamentale che il flusso dell'acqua be strettamente monitorati per garantire che niente sta bloccando le linee d'acqua. È essenziale che la temperatura dell'acqua sia mantenuta a 28,5 ° C. Una temperatura costante può essere ottenuto mantenendo la temperatura ambiente in cui il sistema è alloggiato a 28,5 ° C. In alternativa, una fonte di calore acquario può essere acquistato per mantenere una temperatura costante. Mantenere la qualità dell'acqua è fondamentale per i risultati sperimentali coerenti. Ci sono molte fonti disponibili per aiutare a determinare i parametri esatti di qualità dell'acqua in base alle condizioni sperimentali.
Acquari vengono pulite ogni 7 - 10 giorni e successivamente spruzzati con il 70% di alcol prima di riutilizzarli. Si suggerisce inoltre che il rack cromato essere pulito e asciugato a questo punto per evitare la ruggine e costruire. Se si osservano segni di contaminazione, singoli serbatoi vengono disinfettati con una soluzione di candeggina 2% 8. Salute generale è monitorato con particolare attenzione ai segni di infezione (gonfiore, ulcere cutanee, exolpthalmia, il colore spento, ecc.), gas bolla malattia (a causa di concentrazioni di gas soprasaturi, rapidi cambi di temperatura dell'acqua, problemi al sistema idraulico), iperplasia Gill (alti livelli di ammoniaca, rame, zinco o cloro attivo nell'acqua) , scoliosi (a causa di carenza di vitamina C) o uovo associati infiammazione e fibroplasias (a causa di ritenzione di uovo femminile che spinge fuori la parete addominale).
La costruzione di questo impianto è flessibile e permette un sistema più piccolo o espanso. Prendendo le idee di costruzione di base, questa funzione può essere organizzato per soddisfare le esigenze della ricerca di base di varie dimensioni. Perché la costruzione può variare per istituzione, la fase più critica del protocollo è la prima esecuzione 72 ore, e il monitoraggio quotidiano di ammonio, nitrati, nitriti e livelli durante la prima settimana di costruzione. Eccellente qualità dell'acqua sarà di aiuto nel mantenimento della salute dei pesci. Molti degli attuali protocolli disponibili per un syste pesce a prezzi accessibilim richiedono un open-air acqua flusso 3. Avere acqua protetta dal cielo aperto riduce al minimo la possibilità di contaminazione delle acque e l'evaporazione. Manutenzione su un sistema chiuso è minima rispetto ai sistemi comuni all'aperto.
In caso di problemi nella costruzione della struttura (perdite, bassa pressione dell'acqua, ecc.) Si può sostituire un tubo cementato semplicemente tagliando via la zona di preoccupazione nella struttura e la sostituzione delle parti nella stessa maniera graduale, come riportato sopra . Questo sistema può essere vulnerabile a grandi perdite di acqua a causa di piccole perdite, che possono diventare pericolose per i pesci se lasciato inosservato. Per un investimento minimo di un dispositivo di intercettazione galleggiante rileva quando il livello dell'acqua è sceso sotto una soglia di sicurezza e arrestare il sistema. Questo può essere necessario se attento monitoraggio del sistema non è disponibile. Con le modifiche corrette, ci sono poche limitazioni di questo sistema si trova ad affrontare, oltre la mancanza di mobilità. Una volta che questo sistema è costruireEd è molto difficile muovere senza tagliare alcune parti e recementing nella nuova posizione. Questa limitazione di movimento significa che il sistema deve idealmente essere mantenuta in uno spazio di lavoro. Se la mobilità si desidera ci sono piccole modifiche che possono essere fatte per aumentare la flessibilità. Aggiungere un'unione all'inizio di ciascuna fornitura laterale, la linea di massima pressione, la mandata della pompa, e sopra la valvola di scarico. Le linee di scarico possono essere montati a secco anziché cementati in luogo. Aggiunta di un giunto elastico alla sezione pompa aiuterà anche in mobilità. Questo è un ulteriore
La semplice costruzione e la manutenzione di questo sistema significa che attuali protocolli presenti in letteratura sono disponibili per i piccoli istituti di ricerca 1,2,10-12. La manutenzione è semplice rendendo questo un sistema ideale per la ricerca studente universitario. Questo sistema è ideale per i laboratori di ricerca e di insegnamento indipendenti, anche.
In conclusione, questo tipo diimpianto è conveniente, facile da costruire, e funzionale per la sperimentazione in vivo. Questa funzione è ideale per le istituzioni con risorse limitate e spazio limitato zootecnia. Ricerca Zebrafish è una zona che viene utilizzato per diversi tipi di studi, tra cui la farmacologia, fisiologia, lo sviluppo, o anche studi genetici. In realtà, il gran numero di mutanti disponibili o zebrafish transgenico supporta innovative linee di ricerca in quasi tutti i campi della biomedicina. Inoltre, questo sistema può essere utilizzato per migliorare le opportunità di ricerca e di esperienze in aula per major scienza alle piccole istituzioni prevalentemente universitari e ispirare la prossima generazione di scienziati biomedici.
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Disclosures
Gli autori dichiarano assenza di conflitto di interesse per questo lavoro.
Acknowledgments
Gli autori desiderano ringraziare l'Ufficio di Ricerca della Presbyterian College School of Pharmacy per il sostegno finanziario di questo progetto attraverso il piccolo Farmacia Awards per la Ricerca & Collaboration (SPARC) Award. Gli autori ringraziano John Smink, Responsabile del Laboratorio di Ricerca per gli animali acquatici, Clemson University, Clemson, SC per la sua tecnica di revisione assistenza manoscritto.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Item | Brand | Quantity | |
| 74-in H x 48-in W x 18-in D 5-shelf Steel Freestanding Shelving Unit | Style Selections | 1 | |
| 18-Gallon General Bucket/Tote | Centrex Plastics: LLC Rugged Tote | 1 | |
| 6-Outlet Power Strip With 15-Ft. Cord | Master Electrician | 1 | |
| 9-Watt UV Water Garden Clarifier FiIter and UV lamp | Smartpond | 1 | |
| Whole House Water Replacement Filter | Whirlpool | 6 | |
| Opaque Whole-House Pre-Filtration Housing | Whirlpool | 2 | |
| Thread Seal Tape | William H Harvey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC PVC Cement | Oatey | 1 | |
| 8-fl oz LO-VOC Primer | Oatey | 1 | |
| 1/4-in x 100-ft Vinyl Drip Irrigation Distribution Tubing | Mister Landscaper | 1 | |
| 1/4-in Barbed Drip Irrigation On/Off Valve | Mister Landscaper | 33 | |
| 9-Port NPT Irrigation Manifold with Filter | Mister Landscaper | 6 | |
| Drop-In Filter with House | Whirlpool | 6 | |
| 2-in Dia 90-Degree PVC Elbow | LASCO | 3 | |
| 2-in Dia 90-Degree Tee | LASCO | 3 | |
| 3/4-in Dia 90-Degree Slip Elbow | LASCO | 15 | |
| 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 7 | |
| 3/4-in Dia PVC Tee | LASCO | 12 | |
| 2-in Dia PVC Cap | LASCO | 3 | |
| 1-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | LASCO | 2 | |
| 3/4-in PVC Socket In-Line Ball Valve | American Valve | 5 | |
| 1/2-in Dia x 3/4-in Dia PVC Adapter | Lasco | 8 | |
| 3/4-in Dia PVC Cap | Lasco | 1 | |
| 2-In x 5-Ft Pvc Pipe | Charlotte Pipe | 4 | |
| ¾-In x 10-Ft Pvc pipe | Charlotte Pipe | 3 | |
| 11/16x1-7/80 PVC ring | SXT | 10 | |
| ½” PVC male adapter | SXT | 1 | |
| ¾” PVC coupling | SXT | 1 | |
| ½” PVC female adapter | SXT | 1 | |
| link | |||
| 1.8 L Dual Beta Keeper | Top Fin | 27 | |
| ¾” PVC male adapter (w/ #18 O-ring) | SXT | 28 | |
| 90-degree ¾” threaded PVC elbow | SXT | 27 | |
| Fine Mesh | N/A | 1 yard | |
| Bulkhead Connector | N/A | 1 | |
| Hacksaw | N/A | 1 | |
| Drill | N/A | 1 | |
| Hole saw | N/A | 1 | |
| Adjustable Wrench | N/A | 1 | |
| Pliers | N/A | 1 | |
| Tape Measure | N/A | 1 | |
| Safety Glasses | N/A | 1 | |
| Work Gloves | N/A | 1 |
References
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- Grim, J. M., et al. Hemogen (hemgn), a transcription factor that regulates erythropoiesis and skeletogenesis in zebrafish. Strategic Conference of Zebrafish Investigators Poster Presentation, 2013, Asilimar, CA, , (2013).
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