माउस अस्थि मज्जा से अस्थिशोषक व्युत्पत्ति
Summary
Osteoclasts शरीर में प्रिंसिपल हड्डी-resorbing सेल हैं. बड़ी संख्या में osteoclasts को अलग करने की क्षमता अस्थिशोषक जीव विज्ञान की समझ में महत्वपूर्ण प्रगति हुई है. इस प्रोटोकॉल में, हम खेती और इन विट्रो में अस्थिशोषक गतिविधि बढ़ाता, अलगाव के लिए एक विधि का वर्णन.
Abstract
Osteoclasts अस्थि मज्जा की monocyte / बृहतभक्षककोशिका वंश से प्राप्त कर रहे हैं कि अति विशिष्ट कोशिकाओं रहे हैं. हड्डी के कार्बनिक और अकार्बनिक matrices के दोनों resorb को अपने अद्वितीय क्षमता है कि वे कंकाल remodeling के विनियमन में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं कि इसका मतलब है. साथ में, अस्थिकोरक और osteoclasts अस्थि अवशोषण और स्वास्थ्य और बीमारी के दौरान सामान्य कंकाल बनाए रखने के लिए एक साथ अभिनय हड्डी गठन दोनों शामिल है कि गतिशील युग्मन प्रक्रिया के लिए जिम्मेदार हैं.
शरीर में प्रिंसिपल हड्डी-resorbing सेल के रूप में, अस्थिशोषक भेदभाव या समारोह में परिवर्तन शरीर में गहरा प्रभाव में परिणाम कर सकते हैं. बदल अस्थिशोषक समारोह के साथ जुड़े रोगों और आमतौर पर इस तरह के अत्यधिक osteoclastic अस्थि अवशोषण गठन फ्रैक्चर को predisposes जिसमें ऑस्टियोपोरोसिस, के रूप में विकृतियों मनाया के कारण hematopoiesis के लिए एक मज्जा अंतरिक्ष के लिए फार्म की विफलता के लिए घातक नवजात रोग से गंभीरता में लेकर कर सकते हैं.
ईएनटी "> इन विट्रो में उच्च संख्या में osteoclasts को अलग करने की क्षमता हड्डी remodeling के चक्र को समझने में महत्वपूर्ण प्रगति के लिए अनुमति दी गई है और इन बीमारियों से निपटने कि उपन्यास चिकित्सीय रणनीतियों की खोज के लिए मार्ग प्रशस्त किया है.यहाँ, हम अलग और osteoclasts की बड़ी संख्या निकलेगा कि माउस अस्थि मज्जा से osteoclasts खेती करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन.
Introduction
हड्डी remodeling गतिशील है और अस्थि अवशोषण 1 के साथ हड्डी गठन के युग्मन शामिल है. इस कसकर विनियमित प्रक्रिया सामान्य समस्थिति दौरान कंकाल को बनाए रखने के लिए जिम्मेदार है, और चोट और बीमारी के जवाब में.
Osteoclasts हड्डी के कार्बनिक और अकार्बनिक matrices के दोनों resorbing में सक्षम हैं कि अद्वितीय, multinucleated कोशिकाओं रहे हैं. Osteoclasts अस्थि मज्जा 2-5 की monocyte / बृहतभक्षककोशिका वंश से निकाली गई है. Osteoclasts के समारोह या गठन में असामान्यताएं ऑस्टियोपोरोसिस की तरह आम शर्तों सहित नैदानिक विकृतियों की एक किस्म में परिणाम कर सकते हैं.
इन विट्रो में osteoclasts उत्पन्न करने की क्षमता हड्डी जीव विज्ञान 6 के बारे में हमारी समझ में महत्वपूर्ण प्रगति के लिए अनुमति दी गई है. नतीजतन, नई चिकित्सकीय एजेंटों 7 महत्वपूर्ण रुग्णता और मौत के लिए जिम्मेदार हैं जो अस्थिशोषक से संबंधित रोगों के इलाज के लिए उभर रहे हैं </s> ऊपर. हड्डियों और ताकत के homeostatic रखरखाव हड्डी के गठन अस्थिकोरक और हड्डी-resorbing osteoclasts 8,9 की ठोस कार्रवाई की आवश्यकता है. अस्थि समस्थिति जिसमें अस्थिशोषक गतिविधि हड्डी द्रव्यमान और घनत्व 10 से रोगजनक नुकसान होता वृद्धि हुई है, रजोनिवृत्ति ऑस्टियोपोरोसिस सहित रोगों के एक नंबर में बदल दिया है. मानव रोग के ट्रांसजेनिक murine मॉडल की उपलब्धता में वृद्धि के साथ, मानव हड्डी रोग 11-13 में osteoclasts की भूमिका समझने के लिए अधिक अवसर है.
कई रूपों 9,12,14 वर्णित साथ अस्थिशोषक संवर्धन तकनीक के लिए कई प्रोटोकॉल, साहित्य में दिखाई देते हैं. ज़िंग और सहयोगियों murine अस्थि मज्जा कोशिकाओं से osteoclastogenic assays के उनके वर्णन में, नीचे वर्णित प्रोटोकॉल के समान पद्धति का वर्णन. हालांकि लंबी हड्डी फसल निम्नलिखित अस्थि मज्जा कोशिकाओं को रिहा करने, जिंग एट अल. Α सदस्य पूरा मीडिया के साथ मज्जा गुहा फ्लश14. Catalfamo, अस्थिशोषक समारोह पर ह्य्पेरग्ल्य्समिया के प्रभाव की जाँच और सभी कोशिकाओं अस्थि मज्जा निस्तब्धता द्वारा जुटाए जिसमें एक विधि है, जिस पर गैर-पक्षपाती कोशिकाओं 12 खारिज कर रहे हैं इंगित, 24 घंटा के लिए संवर्धित कर रहे हैं का वर्णन भी बॉयल एट अल द्वारा इस्तेमाल तकनीक 9. ये पहले प्रकाशित प्रोटोकॉल एक हड्डी के दोनों सिरों में कटौती करनी चाहिए के रूप में भी, एक सुई छड़ी चोट और मूल्यवान अस्थि मज्जा की हानि के जोखिम का परिचय जो अस्थि मज्जा, एक थकाऊ अभ्यास, निस्तब्धता के अभ्यास की जरूरत. हम वर्णन जो प्रोटोकॉल, Weischenfeldt एट अल द्वारा वर्णित बृहतभक्षककोशिका अलगाव की विधि के समान है जो osteoclasts अलग करने के लिए एक मोर्टार और मूसल का उपयोग, लागू करता है. 15
हमारा अनुभव है, हालांकि, अक्सर, जिसके परिणामस्वरूप अस्थिशोषक उत्पादन के मामले में चर परिणामों में पहले प्रकाशित तकनीक परिणामों का उपयोग कि अस्थिशोषक अलगाव और इन विट्रो संस्कृति में हैएक असमर्थता में osteoclasts खेती करने के लिए. इसलिए, हम की उपस्थिति में शुरू में मैक्रोफेज और बाद में osteoclasts बनाने चढ़ाया कोशिकाओं के 70-80% की एक अनुमानित उपज के साथ इन विट्रो में multinucleated osteoclasts की बड़ी संख्या, निर्माण करने के लिए माउस अस्थि मज्जा के अनुरूप अलगाव के लिए अनुमति देता है कि एक प्रोटोकॉल तैयार कर लिया है अस्थिशोषक प्रेरण मीडिया.
Protocol
Representative Results
Discussion
आसानी से इन विट्रो में osteoclasts की बड़ी संख्या को अलग करने और खेती करने की क्षमता हड्डी जीव विज्ञान और अस्थिशोषक की मध्यस्थता रोगों की समझ के अग्रिम की मदद करने के लिए जिम्मेदार है. यह हाल ही में अस्थिशो?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम एनआईएच अनुदान R01 DE021683, R01 DE019434, U01 HL099776, ओक फाउंडेशन और बाल चिकित्सा पुनर्योजी चिकित्सा के लिए Hagey प्रयोगशाला के समर्थन को स्वीकार करते हैं.
Materials
| Name of the Material/Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| MEM, no glutamine, no phenol red | Gibco | 51200-038 | |
| M-CSF, recombinant mouse | Gibco | PMC2044 | |
| Recombinant Mouse TRANCE/RANK L/TNFSF11 (E. coli expressed) | R&D Systems | 462-TEC-010 | |
| Prostaglandin E2 | Sigma-Aldrich | ||
| Histopaque-1077 | Sigma-Aldrich | 10771 | |
| Acid Phosphatase, Lekocyte (TRAP) kit | Sigma-Aldrich | 387A | |
| Osteoassay bone resorption plates, 24 well plates | Corning Life Sciences | 3987 |
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