אנו מדווחים הליך מעודן של כלוריד Ferric (FeCl 3) מודלים פקקת -induced על העורק הראשי ואת mesenteric וכן וריד, מאופיין באמצעות מיקרוסקופ intravital ביעילות לפקח הזמן Occlusive היווצרות thrombi.
Arterial thrombosis (blood clot) is a common complication of many systemic diseases associated with chronic inflammation, including atherosclerosis, diabetes, obesity, cancer and chronic autoimmune rheumatologic disorders. Thrombi are the cause of most heart attacks, strokes and extremity loss, making thrombosis an extremely important public health problem. Since these thrombi stem from inappropriate platelet activation and subsequent coagulation, targeting these systems therapeutically has important clinical significance for developing safer treatments. Due to the complexities of the hemostatic system, in vitro experiments cannot replicate the blood-to-vessel wall interactions; therefore, in vivo studies are critical to understand pathological mechanisms of thrombus formation. To this end, various thrombosis models have been developed in mice. Among them, ferric chloride (FeCl3) induced vascular injury is a widely used model of occlusive thrombosis that reports platelet activation and aggregation in the context of an aseptic closed vascular system. This model is based on redox-induced endothelial cell injury, which is simple and sensitive to both anticoagulant and anti-platelets drugs. The time required for the development of a thrombus that occludes blood flow gives a quantitative measure of vascular injury, platelet activation and aggregation that is relevant to thrombotic diseases. We have significantly refined this FeCl3-induced vascular thrombosis model, which makes the data highly reproducible with minimal variation. Here we describe the model and present representative data from several experimental set-ups that demonstrate the utility of this model in thrombosis research.
פקקת עורקים (קריש דם) היא סיבוך נפוץ של מחלות מערכתיות רבות הקשורות בדלקת כרונית, כולל טרשת עורקים, סוכרת, השמנת יתר, סרטן והפרעות rheumatologic אוטואימונית כרונית. Thrombi המתרחשת בגזע במחזור עורקים מהפעלת טסיות הולמת, צבירה ומנגנוני coagulatory הבאות שלה מעורבת התקף לב, שבץ ואובדן גפיים. בדפנות כלי הדם היא מערכת מורכבת הכוללת סוגי תאים מרובים ומושפע רב של גורמים חיצוניים כולל מאמץ הגזירה, תאי דם, הורמונים וציטוקינים, כמו גם ביטוי של חלבונים נוגדי חמצון בדפנות כלי הדם. ניסויים במבחנה לא יכול לשכפל בסביבה המורכבת הזו ולכן במחקרים vivo תוך שימוש במודלים של בעלי חיים הם קריטיים כדי לאפשר הבנה טובה יותר של המנגנונים המעורבים הפרעות של פקקת.
עכברים הוכחו יש simמנגנוני ilar לבני אדם במונחים של פקקת, טרשת עורקים, דלקת 1,2 סוכרת. יתר על כן, העכברים הטרנסגניים ו בנוקאאוט ניתן ליצור לבדוק את הפונקציה של מוצרים גנים ספציפיים פיזיולוגי מורכב או הסביבה פתולוגיים. מחקרים כאלה לחקות הפתולוגיה האנושית עשויה לספק מידע מכניסטית חשובים הקשורים גילוי מסלולים וטיפולים חדשים, כמו גם לספק פרטים חשובים באפיון השפעות התרופה על פקקת.
Thrombi עורקי הפתולוגי להתרחש עקב אנדותל פציעה שכבה או תפקוד לקוי וחשיפה של זרם הדם המטריצה subendothelial 3,4. מודלים פקקת שונים פותחו כדי לגרום נזק האנדותל זה כגון פגיעה מכנית, מתחם photoreactive פציעה חמצוני מבוססי בנגל רוז לייזר פציעה 5. ב הספקטרום הזה, כלוריד Ferric (FeCl 3) -induced לפגיעה בכלי דם היא מודל נפוץ של פקק. מגיב זה כאשרמוחל על היבט של כלי החיצוני גורם נזק חמצוני לתאים וסקולרית 6-8, עם הפסד של הגנה תא האנדותל מן במחזור טסיות ורכיבים של מפל הקרישה. המודל 3 FeCl הוא פשוט רגיש לשני תרופות נוגדות קרישה ואנטי-טסיות, והועלה על התרדמה ועורקים הירך, ורידי הצוואר, mesenteric ו arterioles cremasteric ו venules בעכברים, חולדות, שרקנים וארנבות 6-15.
אחת פרמטר מדיד במודל זה הוא הזמן שחלף מפציעה להשלים חסימה כלי, כפי שנמדד הפסקת זרימת הדם עם מד זרימת דופלר או בהשגחה ישירה עם 6,7,9 מיקרוסקופיה intravital. מגוון של פעמים בין 5 עד 30 דקות דווח במחקרים שונים C57BL6 עכברי 7-10,16, דבר המצביע על כך ריכוזי FeCl 3, סוגים של הרדמה, טכניקות כירורגיות, גיל עכבר, רקע גנטי, שיטת המדידה בזרימת lood, ומשתנים סביבתיים אחרים יש השפעה משמעותית במודל זה. השתנות רחבה זה עושה את זה קשה להשוות מחקרים מקבוצות מחקר שונות והוא רשאי להתקין זיהוי של הבדלים דקים קשה.
עם חזון כדי למזער variabilities כאלה ולהקים לשחזור אחיד במערכת מודל vivo, יש לנו מודל חלופי שהוצע עורק התרדמה -induced FeCl 3 שעושה את הנתונים לשחזור ביותר עם וריאציה מינימלי 6-10,16-19. במאמר זה נתאר ולשתף את הכישורים ולדווח כמה דוגמאות ניסיוני נציג שיכול להפיק תועלת במודל זה.
מודל FeCl 3 -induced הוא אחד הדגמים פקקו בשימוש הנרחב ביותר, אשר לא יכול רק לספק מידע רב ערך על שינויים גנטיים על תפקוד טסיות ופקק 7,8,16,19,31-33, אבל גם יכול להיות כלי רב ערך להערכת תרכובות אסטרטגיות טיפוליות לטיפול ומניעה של מחלות atherothrombotic 11,17,34-37. כאן אנו הראינו…
The authors have nothing to disclose.
This work was supported by the National Heart Lung and Blood Institute (NHLBI) of the National Institutes of Health under award numbers R01 HL121212 (PI: Sen Gupta), R01 HL129179 (PI: Sen Gupta, Co-I: Li) and R01 HL098217 (PI: Nieman). The content of this publication is solely the responsibility of the authors and does not necessarily represent the official views of the National Institutes of Health.
Surgical Scissors – Tungsten Carbide | Fine Science Tools | 14502-14 | cut and hold skin |
Micro-Adson Forceps – Serrated/Straight/12cm | Fine Science Tools | 11018-12 | cut and hold skin |
Metzenbaum Fino Scissors – Tungsten Carbide/Curved/Blunt-Blunt/14.5cm | Fine Science Tools | 14519-14 | to dissect and separate soft tissue |
Ultra Fine Hemostat – Smooth/Curved/12.5cm | Fine Science Tools | 13021-12 | to dissect and separate soft tissue |
Graefe Forceps – Serrated/Straight/10cm | Fine Science Tools | 11050-10 | to dissect and separate soft tissue |
Dumont #5 Fine Forceps – Biology Tips/Straight/Inox/11cm | Fine Science Tools | 11254-20 | Isolate vessel from surounding tissue |
Dumont #5XL Forceps – Standard Tips/Straight/Inox/15cm | Fine Science Tools | 11253-10 | Isolate vessel from surounding tissue |
Blunt Hook- 12cm/0.3mm Tip Diameter | Fine Science Tools | 10062-12 | Isolate vessel from surounding tissue |
Castroviejo Micro Needle Holders | Fine Science Tools | 12061-02 | Needle holders |
Suture Thread 4-0 | Fine Science Tools | 18020-40 | For fix the incisors to the plate |
Suture Thread 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 | For all surgery and ligation |
Kalt Suture Needles | Fine Science Tools | 12050-03 | |
rhodamine 6G | Sigma | 83697-1G | To lebel platelets |
FeCl3 (Anhydrous) | Sigma | 12321 | To induce vessel injury |
Papaverine hydrochloride | Sigma | P3510 | To inhibit gut peristalsis. |
Medline Surgical Instrument Sterilization Steam Autoclave Tapes | Medline | 111625 | To fix the mouse to the plate |
Fisherbrand™ Syringe Filters – Sterile 0.22µm | Fisher | 09-720-004 | For sterlization of solutions injected to mice |
Fisherbrand™ Syringe Filters – Sterile 0.45µm | Fisher | 09-719D | To filter the FeCl3 solution |
Sterile Alcohol Prep Pad | Fisher | 06-669-62 | To sterilize the surgical site |
Agarose | BioExpress | E-3120-500 | To make gel stage |
Leica DMLFS fluorescent microscope | Leica | Intravital microscope | |
GIBRALTAR Platform and X-Y Stage System | npi electronic GmbH | http://www.npielectronic.de/products/micropositioners/burleigh/gibraltar.html | |
Streampix version 3.17.2 software | NorPix | https://www.norpix.com/ |