نفيدكم إجراء المكرر من كلوريد الحديديك (FeCl 3) نماذج تخثر -induced على الشريان السباتي والمساريقي الشريان وكذلك السياق، تتميز بكفاءة استخدام intravital المجهري لمراقبة الوقت لالكاتمة للتكوين الجلطة الدموية.
Arterial thrombosis (blood clot) is a common complication of many systemic diseases associated with chronic inflammation, including atherosclerosis, diabetes, obesity, cancer and chronic autoimmune rheumatologic disorders. Thrombi are the cause of most heart attacks, strokes and extremity loss, making thrombosis an extremely important public health problem. Since these thrombi stem from inappropriate platelet activation and subsequent coagulation, targeting these systems therapeutically has important clinical significance for developing safer treatments. Due to the complexities of the hemostatic system, in vitro experiments cannot replicate the blood-to-vessel wall interactions; therefore, in vivo studies are critical to understand pathological mechanisms of thrombus formation. To this end, various thrombosis models have been developed in mice. Among them, ferric chloride (FeCl3) induced vascular injury is a widely used model of occlusive thrombosis that reports platelet activation and aggregation in the context of an aseptic closed vascular system. This model is based on redox-induced endothelial cell injury, which is simple and sensitive to both anticoagulant and anti-platelets drugs. The time required for the development of a thrombus that occludes blood flow gives a quantitative measure of vascular injury, platelet activation and aggregation that is relevant to thrombotic diseases. We have significantly refined this FeCl3-induced vascular thrombosis model, which makes the data highly reproducible with minimal variation. Here we describe the model and present representative data from several experimental set-ups that demonstrate the utility of this model in thrombosis research.
تجلط الدم الشرياني (تجلط الدم) هو اختلاط شائع في العديد من الأمراض الجهازية المرتبطة التهاب مزمن، بما في ذلك تصلب الشرايين والسكري والسمنة والسرطان واضطرابات المناعة الذاتية الروماتيزم المزمنة. وتورط الجلطات التي تحدث في الجذعية الدموية في الشرايين من نشاط الصفائح الدموية غير مناسب، وتجميع وآليات coagulatory اللاحقة، والنوبات القلبية والسكتات الدماغية وفقدان أقصى. جدار الوعاء الدموي هو نظام معقد يتضمن أنواع خلايا متعددة ويتأثر عدد كبير من العوامل الخارجية بما في ذلك إجهاد القص، خلايا الدم، والهرمونات، والسيتوكينات، وكذلك التعبير عن البروتينات المضادة للأكسدة في جدار الوعاء الدموي. وفي التجارب المختبرية لا يمكن نسخ هذه البيئة المعقدة، وبالتالي الدراسات المجراة باستخدام نماذج حيوانية حاسمة للسماح فهم أفضل الآليات التي تشارك في اضطرابات الجلطات.
وقد أظهرت الفئران أن يكون سيمآليات ILAR للبشر من حيث تجلط الدم وتصلب الشرايين، والتهاب 1،2 السكري. وعلاوة على ذلك، المعدلة وراثيا وخروج المغلوب الفئران يمكن أن تنشأ لاختبار وظيفة من المنتجات جين معين في فيزيولوجي معقدة أو بيئة مرضية. مثل هذه الدراسات تحاكي أمراض البشر ويمكن أن توفر المعلومات الآلية هامة تتعلق اكتشاف مسارات والعلاجات، جديدة، فضلا عن توفر تفاصيل مهمة في وصف آثار المخدرات على تجلط الدم.
تحدث بسبب البطانية إصابة طبقة أو اختلال وظيفي والتعرض للتيار الدم إلى مصفوفة تحت البطانة 3،4 الجلطة الدموية في الشرايين المرضية. وقد وضعت نماذج مختلفة تخثر للحث على هذا الضرر البطانية مثل الإصابة الميكانيكية، وإصابة الأكسدة مقرها ولاية البنغال-مجمع photoreactive روز وإصابة الليزر 5. في هذا الطيف، كلوريد الحديديك (FeCl 3) -induced إصابة الأوعية الدموية هو النموذج المستخدم على نطاق واسع من تجلط الدم. هذا كاشف عندمايطبق على الجانب الخارجي من السفن يدفع الضرر التأكسدي للخلايا الأوعية الدموية 6-8، مع فقدان الحماية الخلايا البطانية من تعميم الصفائح الدموية ومكونات شلال التخثر. نموذج FeCl 3 بسيط وحساس لكلا تخثر ومعاداة الصفائح الدموية المخدرات، وقد تم تنفيذها على الشريان السباتي والشرايين الفخذية، وعروق الوريد، والمساريقي والشرايين والأوردة العضلة المشمرة في الفئران والجرذان والخنازير الغينية والأرانب 6-15.
واحد المعلمة قابلة للقياس في هذا النموذج هو الوقت المنقضي من الاصابة لاستكمال انسداد الأوعية يقاس وقف تدفق الدم مع تدفق متر دوبلر أو تحت الملاحظة المباشرة مع 6،7،9 intravital المجهري. تم الإبلاغ عن مجموعة من الأوقات ما بين 5 إلى 30 دقيقة في دراسات مختلفة في C57Bl6 الفئران 7-10،16، مما يوحي بأن FeCl 3 تركيزات، وأنواع التخدير، والتقنيات الجراحية والعمر الماوس، خلفية الجينومية، وطريقة قياس بتدفق lood، والمتغيرات البيئية الأخرى يكون لها آثار كبيرة في هذا النموذج. هذا التباين واسع يجعل من الصعب المقارنة بين الدراسات من المجموعات البحثية المختلفة وقد جعل الكشف عن الفروق الدقيقة صعوبة.
مع رؤية للحد من هذه المتغيرات، وإقامة قابلة للتكرار بشكل موحد في نظام نموذج الجسم الحي، ولقد صقل نموذج الشريان السباتي -induced FeCl 3 الذي يجعل بيانات استنساخه للغاية مع الحد الأدنى من الاختلاف 6-10،16-19. في هذه الورقة وصفنا وتبادل المهارات وتقديم تقارير عدة أمثلة تجريبية التمثيلية التي يمكن أن تستفيد من هذا النموذج.
3 -induced نموذج FeCl هو واحد من نماذج تجلط الدم الأكثر استخداما، والتي يمكن أن توفر معلومات قيمة حول التعديلات الجينية على وظيفة الصفائح الدموية وتخثر 7،8،16،19،31-33 فحسب، بل يمكن أيضا أن تكون أداة قيمة لتقييم المركبات والاستراتيجيات العلاجية للعلاج والوقاية من ?…
The authors have nothing to disclose.
This work was supported by the National Heart Lung and Blood Institute (NHLBI) of the National Institutes of Health under award numbers R01 HL121212 (PI: Sen Gupta), R01 HL129179 (PI: Sen Gupta, Co-I: Li) and R01 HL098217 (PI: Nieman). The content of this publication is solely the responsibility of the authors and does not necessarily represent the official views of the National Institutes of Health.
Surgical Scissors – Tungsten Carbide | Fine Science Tools | 14502-14 | cut and hold skin |
Micro-Adson Forceps – Serrated/Straight/12cm | Fine Science Tools | 11018-12 | cut and hold skin |
Metzenbaum Fino Scissors – Tungsten Carbide/Curved/Blunt-Blunt/14.5cm | Fine Science Tools | 14519-14 | to dissect and separate soft tissue |
Ultra Fine Hemostat – Smooth/Curved/12.5cm | Fine Science Tools | 13021-12 | to dissect and separate soft tissue |
Graefe Forceps – Serrated/Straight/10cm | Fine Science Tools | 11050-10 | to dissect and separate soft tissue |
Dumont #5 Fine Forceps – Biology Tips/Straight/Inox/11cm | Fine Science Tools | 11254-20 | Isolate vessel from surounding tissue |
Dumont #5XL Forceps – Standard Tips/Straight/Inox/15cm | Fine Science Tools | 11253-10 | Isolate vessel from surounding tissue |
Blunt Hook- 12cm/0.3mm Tip Diameter | Fine Science Tools | 10062-12 | Isolate vessel from surounding tissue |
Castroviejo Micro Needle Holders | Fine Science Tools | 12061-02 | Needle holders |
Suture Thread 4-0 | Fine Science Tools | 18020-40 | For fix the incisors to the plate |
Suture Thread 6-0 | Fine Science Tools | 18020-60 | For all surgery and ligation |
Kalt Suture Needles | Fine Science Tools | 12050-03 | |
rhodamine 6G | Sigma | 83697-1G | To lebel platelets |
FeCl3 (Anhydrous) | Sigma | 12321 | To induce vessel injury |
Papaverine hydrochloride | Sigma | P3510 | To inhibit gut peristalsis. |
Medline Surgical Instrument Sterilization Steam Autoclave Tapes | Medline | 111625 | To fix the mouse to the plate |
Fisherbrand™ Syringe Filters – Sterile 0.22µm | Fisher | 09-720-004 | For sterlization of solutions injected to mice |
Fisherbrand™ Syringe Filters – Sterile 0.45µm | Fisher | 09-719D | To filter the FeCl3 solution |
Sterile Alcohol Prep Pad | Fisher | 06-669-62 | To sterilize the surgical site |
Agarose | BioExpress | E-3120-500 | To make gel stage |
Leica DMLFS fluorescent microscope | Leica | Intravital microscope | |
GIBRALTAR Platform and X-Y Stage System | npi electronic GmbH | http://www.npielectronic.de/products/micropositioners/burleigh/gibraltar.html | |
Streampix version 3.17.2 software | NorPix | https://www.norpix.com/ |